解脲/人型支原體分離培養與藥敏實驗分析

目的：了解本地區解脲支原體耐藥狀況，指導臨床合理用藥。方法：應用支原體微量培養及同步藥敏試劑盒，檢測解脲支原體及其藥敏分析。美滿霉素、交沙霉素、克拉霉素三種抗生素敏感性高，不易產生耐藥性，且耐藥率變化不大；結論：臨床治療UU引起的非淋菌性尿道炎，本地區應推薦美滿霉素、強力霉素、交沙霉素作為治療解脲支原體的首選藥物。不論是UU單項感染或是UU+MH混合感染均產生多重耐藥，支原體的耐藥問題嚴重，治療要根據藥物敏感性報告用藥。提示：在進行治療前做支原體藥敏試驗很有必要。

支原體（mycoplasma）是細胞外生存的最小微生物。是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物，大小一般在0.3～0.5um之間，呈高度多形性，有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態，能在無生命培養基中生長繁殖的最小原核細胞型微生物。它不同于細胞，也不同于病毒。種類繁多、分布廣泛、造成的危害相當大，涉及人、動物、植物及昆蟲等多個領域，給人類健康和科研工作帶來不利影響。從人體分離的16種支原體中，5種對人有致病性，即肺炎支原體、解脲支原體、人型支原體、生殖支原體及發酵支原體。脲解支原體屬（ureaplasma）含脲解支原體等體、脲解支原體及人型支原體等對人有致病性。肺炎支原體是呼吸道感染、肺炎的主要原因。能引起人類泌尿生殖道感染的有解脲支原體（UU）、人型支原體（MH）、生殖道支原體等，其中最常見的是UU，約有30%～40%男性的非衣原體、非淋病性尿道炎是由UU所致；此外UU可通過胎盤感梁胎兒，引起早產、死胎、低體重胎兒和新生兒呼吸道感染。由于不合理使用抗生素，支原體對常用抗生素耐藥已非常普遍，對其進行培養及耐藥性監測顯得尤為重要。解脲支原體（M.urealyticum）為支原體屬中唯一的一個種，因生長需要尿素而得名。菌落微小，直徑僅有15～25um，須在低倍顯微鏡下觀察，故舊稱T株 （tiny strain）。解脲支原體與女性生殖健康關系最為密切，解脲支原體可引起泌尿生殖道感染，并被認為是非淋球菌性尿道炎中僅次于衣原體（占50%）的重要病原體。由于80%孕婦的生殖道內帶有解脲支原體，因此可通過胎盤感染胎兒而導致早產、死胎，或在分娩時感染新生兒，引起呼吸道感染。

我國近年來發病的例數不斷增加。隨著廣譜抗生素的大量使用，耐藥菌株在不斷增加。本文對2009年7月～2009年12月我院門診患者標本作解脲支原體（UU）、人型支原體（MH）培養和藥物敏感性試驗。現將結論報告如下：

一、材料與方法

（一）標本來源 2009年7月～2009年12月我院婦科、皮膚科患者標本共9例，男性2例，女性7例，患者均為呈貢泌尿道感染者，年齡不限。男性患者均有尿道內不適和漿液性分泌物，女性患者大多數有白帶增多，白帶涂片檢查均有膿白細胞增多。

（二）標本采集 男性患者用無菌棉球擦干尿道口，用無菌棉拭子插入尿道2 cm～3 cm，輕輕旋轉后取出；女性患者清除陰道口分泌物后，用無菌棉拭子插入宮頸1 cm～2 cm，輕輕旋轉后取出。標本取出后立即接種培養。

（三）試劑與方法 采用鄭州安圖綠科生物工程有限公司生產的UU和MH分離鑒定、藥敏試劑盒。嚴格按說明書操作及判讀結。

（四）試劑 試劑盒采用鄭州安圖綠科生物工程有限公司支原體分離、鑒定、藥敏檢測試劑盒。測定藥物包括：強力霉素、交沙霉素、司帕沙星、羅紅霉素、美滿霉素、克拉霉素、阿奇霉素、林可霉素、大觀霉素、甲砜霉素、共10種抗生素。

（五）病原體檢測方法 采用鄭州安圖綠科生物工程有限公司的試劑檢測UU、Mh。嚴格按照檢測試劑使用說明書無菌操作，標本采集后立即送檢，室溫保存不得超過2h，2～8℃不超過5h。首先將50μl完全溶解培養基加入C-空白孔中，再將無菌拭子采集的樣本插入完全溶解培養基中，擠壓旋轉拭子數次，使拭子中樣本滲入培養基中，充分混勻接種了樣本的液體培養基，用加樣器分別準確量取50ul接種到試劑條各孔中（除C-），再滴加一滴無菌石蠟油（約50ul），然后蓋上蓋子。36 ℃恒溫箱UU培養24 h，Mh培養24 h，培養基不變色為陰性，培養基由橙黃色變成紅色，且清亮透明為陽性，表示有支原體生長。

（六）實驗材料 采用鄭州安圖綠科生物工程有限公司生產的

Mycoplasma culture，identification，susceptibility kit試劑盒進行測試。該試劑盒集鑒定、藥敏為一體，在同一試劑盒分別設置生長對照孔，解脲支原體（UU）、人型支原體（MH）鑒定孔及10種抗生素測試孔。操作嚴格按說明書進行。

二、結果

（一）支原體陽性檢出率 從9例患者標本中檢出支原體共7株陽性率為 78 %。其中UU單項感染5例，占陽性總數的71%，UU+MH混合感染1，占陽性總數的14 %，H單項感染4例，僅占陽性總數的57%。

（二）支原體藥物敏感試驗結果 分別對UU陽性、UU+MH陽性、MH陽性的標本作藥物敏感性試驗并進行比較分析發現，不論是UU單項感染或是UU+MH混合感染者強力霉素、美滿霉素的耐藥率最低，其次是克拉霉素，耐藥率最高為大觀霉素。MH單項感染病例相對較少，耐藥情況有待進一步探討。本次調查男性支原體感染率為0，女性支原體感染率為100%，經統計學檢驗P<0.05，可認為支原體感染在性別上有顯著性差異，女性高于男性。這個特點可能與男女生殖系統的結構差別有關。

在7例女性生殖道分泌物標本中解脲人型支原體都有生長的有1例，只有解脲支原體生長的有5例，人型支原體的有1例。7例女性支原體生長的藥敏結果如下表：

3 討論

由于試劑檢測原理是依據培養與生化，利用PH值的升高致基礎液變色而判斷結果，極少量堿性標本可能會直接導致溶液變紅，出現假陽性，解脲支原體如同其他支原體一樣，在人工培養基上可以生長，但營養要求較高，需要供給膽固醇和酵母。酸堿度要求低，最適PH值6.0±0.5具有尿素酶，在PH6.0含有尿素的培養基中，能分解尿素，產生NH3，因PH上升使含酚紅指示劑的培養液由黃變紅。如培養液過堿PH8.0以上時，其中UU會迅速死亡。解脲支原體生物學特性對PH要求較低（6.0），具有分解尿素產生氨，使酚紅指示劑變色，不分解葡萄糖、精氨酸，而人型支原體可分解精氨酸，但不分解尿素和葡萄糖，人型支原體除引起人類非淋菌性尿道炎外，還可引起慢性前列腺炎、宮頸炎和盆腔炎。臨床能引起性病的支原體主要包括解脲支原體和人型支原體，其發病率一直呈上升趨勢，耐藥性也隨著抗生素的濫用日趨厲害，危害著人類的健康。治療及防治支原體傳播的關鍵是及時準確的診斷。

（作者單位：云南省楚雄醫藥高等專科學校）