鄂西山區豬圓環病毒2型感染的血清學調查

摘 要：為了解鄂西山區豬群中豬圓環病毒2型的感染情況，應用ELISA方法對鄂西山區2013-2015年間的1260份不同年齡段的豬血清進行PCV2抗體檢測，同時檢測了PRRSV、PRV gE及CSFV抗體，結果表明PCV2抗體檢測平均陽性率為56.75 %（715/1260），不同豬群的檢測結果表明，公豬的PCV2抗體陽性率最低為20 %（4/20），保育豬PCV2抗體陽性率最高為66.67 %（204/306）；全部未免疫PRRSV疫苗豬的PRRSV抗體平均陽性率為48.45 %（344/710），PRV gE抗體平均陽性率為23.73 %（299/1260），而CSFV免疫抗體平均陽性率僅為71.35 %。同時發現PCV2抗體感染率高的豬場PRRSV、PRV的感染率也相對較高，而CSFV的免疫抗體陽性率則相對較低。本研究結果表明PCV2感染在鄂西山區豬群中普遍存在，且與PRRSV、PRV的感染具有一定的相關性。

關鍵詞：PCV2；抗體；ELISA；混合感染

中圖分類號：S855.3 文獻標識碼：A 文章編號：1001-0769（2016）10-0033-04

豬圓環病毒（Porcine Circovirus， PCV）在病毒分類上屬于圓環病毒科（Circoviridae）圓環病毒屬（Circovirus），是一種環狀、無囊膜的單股DNA病毒[1]，包括豬圓環病毒1型（PCV1）和豬圓環病毒2型（PCV2）兩個基因型，其中PCV1對豬無致病性，PCV2是嚴重危害全球養豬業的重要病原之一[2]。PCV2主要感染6～12周齡豬，臨床表現為體質下降、消瘦、皮膚發白、腹瀉、呼吸困難，有的豬有黃疸。PCV2感染一般不會直接引起豬的死亡，主要是引起豬體的免疫抑制[3，4]。由于PCV2能破壞豬體的免疫系統，造成免疫抑制，因而本病常與豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬偽狂犬病毒、豬肺炎支原體、多殺性巴氏桿菌和鏈球菌等混合或繼發感染[5]。PCV2及其相關聯的豬病已在全世界范圍內發生和流行，死亡率10 %～30 %不等。較嚴重的地區，豬場在暴發本病時死淘率高達40 %左右，其危害和造成的重大經濟損失顯而易見，現已被公認為世界重要的豬傳染病[6，7]。

近年來，PCV2的發生呈上升趨勢，其危害除自身引起的免疫抑制以外，還容易繼發、并發其他一系列疾病，給我國乃至世界養豬業造成了巨大損失。為了解鄂西山區PCV2的感染及與其他疫病的混合感染情況，本研究利用ELISA方法對2013年～2015年間采自鄂西山區不同養殖場的1 260份豬血清進行了PCV2抗體檢測，并對該豬瘟抗體、豬繁殖與呼吸綜合征抗體及豬偽狂犬病抗體進行了檢測，旨在了解鄂西山區PCV2的感染及其他疫病的感染與免疫情況，為鄂西山區PCV2的綜合防控提供理論依據，為進一步促進鄂西山區養豬業的健康可持續發展提供技術支持。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 豬血清樣本的收集

本研究于2013年～2015年間，在鄂西山區鄂西山區隨機選擇20個豬場（均未免疫商品化豬圓環病毒疫苗），按5 %的比例隨機采集不同年齡段豬的血液樣品。血液采自豬耳靜脈或前腔靜脈，分離血清，4 ℃保存備用或立即進行ELISA檢測。

1.1.2 檢測所用試劑盒

PCV2抗體檢測試劑盒為本實驗室利用原核表達的PCV2 cap蛋白作為抗原包被酶標板制備的試劑盒；豬偽狂犬病gE抗體檢測試劑盒、豬瘟病毒抗體檢測試劑盒、豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測試劑盒均為美國IDEXX公司產品，購于北京愛德士元亨生物科技有限公司。

1.2 檢測方法

PCV2抗體檢測按如下步驟進行：

（1）樣品處理：將全血樣品4 000 rpm離心 10 min，取上清備用；

（2）樣品稀釋：在血清稀釋板中按1∶2的體積稀釋待檢血清樣品（100 μL樣品稀釋液中加 50 μL待檢血清樣品）；

（3）對照稀釋：在血清稀釋板中按1∶2分別稀釋陽性對照和陰性對照（100 μL樣品稀釋液中加50 μL對照血清）；

（4）取抗原包被板（根據樣品多少，可拆開分多次使用），分別將稀釋好的待檢血清樣品和對照血清各取100 μL加入到抗原包被板孔中。同時設2孔陰性對照、2孔陽性對照，輕輕混勻孔中樣品（勿溢出），置37 ℃下孵育90 min；

（5）棄去孔中的液體，每孔加入200 μL洗滌液，每次靜置3 min，棄去洗滌液，并在吸水紙上拍干，共計洗板5次；

（6）每孔加酶標記物100 μL，置37 ℃下孵育20 min，洗滌5次；

（7）每孔加底物液A和底物液B各1滴（約 50 μL），混勻，室溫（20 ℃～25 ℃）避光顯色 15 min；

（8）每孔加終止液1滴（約50 μL），混勻后10 min內測定結果。

結果判定：在酶標儀上測各孔OD630值。試驗成立的條件是陰性對照孔平均OD630值與陽性對照平均OD630值之差≥0.3；確定樣品OD630≥0.45時，判定為陽性，OD630<0.45時，判定為陰性。

豬偽狂犬病gE抗體、豬瘟病毒抗體和豬繁殖與呼吸綜合征抗體的檢測均按試劑盒說明書進行。

2 結果

2.1 不同豬場的PCV2抗體檢測結果

對2013年～2015年采自鄂西山區20個豬場的1 260份血清樣品進行PCV2抗體檢測，結果發現所有被檢豬場均存在PCV2感染，豬場的抗體陽性率為100 %（20/20），全部豬的PCV2抗體平均陽性率為56.75 %（715/1 260），其中PCV2抗體陽性率最高的達77.97 %（46/59），最低的為35 %（21/60），見表1。

2.2 不同豬群的PCV2抗體檢測結果

不同豬群的PCV2抗體陽性率檢測結果表明，公豬的陽性率為20 %（4/20），母豬為21.67 %（26/120），育肥豬為53.46 %（139/260），保育豬為66.67 %（204/306），哺乳仔豬為61.73 %（342/554）（表2）。由此可知，鄂西山區保育豬和哺乳仔豬PCV2感染率較高，分別達66.67 %和61.73 %。

2.3 不同豬場的PRRSV抗體檢測結果

對2013年～2015年采自鄂西山區20個豬場中未免疫PRRSV疫苗的11個豬場的710份血清進行了PRRSV抗體檢測，結果發現所有被檢豬場均存在PRRSV感染，豬場的抗體陽性率為 100 %（11/11），全部豬的PRRSV抗體平均陽性率為48.45 %（344/710），其中PRRSV抗體陽性率最高的達71.67 %（43/60），最低的為32.31 %（21/65），見表3。

2.4 不同豬場的PRV gE抗體檢測結果

對2013年～2015年采自鄂西山區20個豬場的1 260份血清樣品進行PRV gE抗體檢測，結果發現20個被檢豬場有13個豬場存在PRV野毒感染，豬場PRV野毒感染率達65 %（13/20）；全部豬的PRV gE抗體平均陽性率為23.73 %（299/1 260），其中PRV gE抗體陽性率最高的達48.28 %（28/58），見表4。

2.5 不同豬場的CSFV抗體檢測結果

對2013年～2015年采自鄂西山區20個豬場的1 260份血清樣品進行CSFV抗體檢測，所檢20個豬場均進行了CSFV疫苗的免疫，結果發現20個被檢豬場CSFV抗體平均陽性率為71.35 %，其中CSFV抗體陽性率最高的達93.33 %（56/60），最低的僅有50 %（28/56），見表5。

3 討論

近年來，我國部分地區動物流行病學監測結果顯示，豬圓環病毒2型的感染率及其引起的豬圓環病毒病的暴發次數都有上升的趨勢，且常與豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬偽狂犬病病毒（PRV）、豬瘟病毒（CSFV）等混合感染，表現出較高的病死率，給養豬業造成了嚴重的經濟損失[8，9]。本研究中被檢測豬場均存在PCV2感染，其抗體平均陽性率為56.75 %（715/1 260），比郎洪武等[10]報道的全國7個養豬大省42.9 %的陽性率高出近14個百分點，比趙東升[11]等報道的全國2002年～2007年PCV2血清抗體平均陽性率38.47 %高18.28個百分點，而比徐廷川[6]等報道的廣東省2002年～2007年PCV2血清抗體平均陽性率61.91 %要低5.16個百分點，說明鄂西山區的PCV2感染已經非常普遍，這可能與近幾年頻繁到外地引種且引種時沒有嚴格檢測相關疫病，飼養管理水平低下等原因有關。

對于不同豬群PCV2的血清抗體檢測結果表明，受檢豬群哺乳仔豬、保育豬及育肥豬的PCV2感染陽性率較高，這與郎洪武等[10]、吳瑗等[12]報道的后備母豬、經產母豬和種公豬的PCV2感染陽性率較高有所不同。

近年來，隨著養殖規模的不斷壯大，在豬群中普遍存在PCV2、PRRSV及其他病原的感染的現象，對養豬業造成的危害也日益加劇[13]。本研究對所有20個豬場均進行了PRV gE抗體、CSFV抗體的檢測，對其中未免疫PRRSV疫苗的11個豬場進行了PRRSV抗體檢測，結果發現PCV2抗體感染率高的豬場PRRSV、PRV的感染率也相對較高，而CSFV的免疫抗體陽性率則相對較低，具有一定的相關性，這可能與PCV2感染后導致的免疫抑制有關。

PCV2能夠破壞豬的免疫系統，造成免疫抑制，從而引起多種疾病混合感染的發生，另外還造成對疫苗的免疫失敗或對治療無應答的現象。因此，該病對豬的健康和養豬業健康可持續發展的威脅日益增大。本次檢測的20個養殖場均未進行PCV2免疫，這應引起廣大養殖場（戶）和動物疫病防控部門的高度重視。

本研究通過對采自鄂西山區的豬血清樣本進行PCV2感染抗體的檢測及其他病原抗體的檢測，系統分析了PCV2在豬群中的感染及流行情況，為進一步開展PCV2的診斷與防控研究提供了理論依據。

參考文獻：（13篇，略）