牡丹籽皮總黃酮提取工藝研究

◎ 顧菲菲，晉曉峰，程雪芬，吳媛霞

（國家銅鉛鋅及制品質量監督檢驗中心，安徽 銅陵 244000）

黃酮類化合物廣泛存在于植物的根、皮、葉、果實中，通常以苷類的形式存在，是植物經光合作用產生的一類天然物質，屬于植物在長期自然選擇過程中產生的次級代謝產物。黃酮類化合物泛指兩個具有酚羥基的苯環（A-與B-環）通過中央三碳原子相互連結而成的一系列化合物，其基本母核為2-苯基色原酮[1]。目前黃酮類化合物可分為10多個類別，現已發現的黃酮類化合物達4 000多種[2]。黃酮類化合物的作用極其廣泛，其藥理性作用有：調節心血管系統，對心腦、膽、肝等具有保護作用；抗炎調節免疫、防癌抗病毒作用。其生物性作用有：具有良好的抗氧化活性和清除氧自由基能力；改善皮膚過敏癥狀、吸收紫外輻射、預防骨質疏松、祛痰、提高記憶力、活血化瘀等[3]。

牡丹屬毛茛科芍藥屬木本植物，有“花中之王”的美譽，是重要的景觀植物和資源植物。牡丹籽是牡丹植株的精華結晶，具有自身獨特的營養成分。牡丹籽油富含不飽和脂肪酸，是生產牡丹皮的副產品牡丹籽經壓榨、脫色、脫臭等工藝制作而成。牡丹籽皮占牡丹籽質量的1/3，是牡丹籽油生產過程中的中間產物，一般當作垃圾處理，不僅污染環境，還造成資源浪費。但目前國內對于牡丹籽皮的研究較少，其中牡丹籽皮總黃酮提取工藝的文獻鮮有報道。本課題采用超聲波提取法提取牡丹籽皮總黃酮，通過對影響因素進行正交試驗，確定牡丹籽皮總黃酮的最佳提取工藝，本次實驗研究也為牡丹籽皮的綜合開發利用提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

原料為干燥的牡丹籽皮，由銅陵瑞璞牡丹產業發展有限公司提供；蘆丁（BR），國藥集團化學試劑有限公司；亞硝酸鈉（AR），無錫市展望化工試劑有限公司；硝酸鋁（AR），國藥集團化學試劑有限公司；氫氧化鈉（AR），無錫市展望化工試劑有限公司；乙醇（AR），煙臺市雙雙化工有限公司；UV1102紫外可見分光光度計，上海天美儀器公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 標準曲線的測定

準確稱取9.2 mg干燥至恒重的蘆丁標準品，置于50 mL容量瓶中，以50%的乙醇溶液配成濃度為0.184 mg/mL的溶液備用。

分別量取上述標準溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0 mL和4 mL于10 mL容量瓶中，并補加50%乙醇至5 mL。加入0.3 mL 5%亞硝酸鈉溶液，搖勻，放置6 min后，加入0.3 mL 5%硝酸鋁溶液，搖勻，靜置6 min；加4 mL 4%氫氧化鈉溶液，加水稀釋至刻度，搖勻，靜置15 min后，于510 nm波長處測定吸光度。以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，得出回歸方程為：

1.2.2 牡丹籽皮總黃酮的提取

黃酮類化合物常用的提取方法有水提取法、有機溶劑萃取法、微波萃取法、超聲波提取法和超臨界流體萃取法等[4-5]，本研究采用超聲波提取法。影響牡丹籽皮總黃酮提取的因素有很多，本方法應用L9（33）正交表，對提取劑（A）、投料比（B）、提取時間（C）三因子在三水平上進行優選，因素水平見表1。

表 1 L9（33） 因素水平表

精密稱取1.0 g的牡丹籽皮樣品，置于50 mL三角瓶中，加入一定體積和濃度的乙醇溶液，提取一定時間，過濾，殘渣用50%乙醇洗滌2次，過濾，合并濾液，置于100 mL容量瓶中，以50%乙醇定容至100 mL作為樣品溶液待測。

1.2.3 牡丹籽皮總黃酮的測定

取上述待測樣品溶液1 mL，按標準曲線的測定方法進行測定，得出牡丹籽皮中總黃酮濃度。樣品中黃酮含量按式（1）進行計算。

其中，A為測定用樣液中總黃酮含量，mg；m為樣品質量，g；V1為樣品配成溶液時的體積，mL；V2為測定用樣液體積，mL。

2 結果與討論

為全面考察影響牡丹籽皮總黃酮的提取因素，設計三因子三水平的正交試驗，結果見表2。

表2 正交試驗直觀分析結果表

由直觀分析結果可確定，超聲波提取牡丹籽皮總黃酮的最優提取條件為：A1B2C2，即50%乙醇溶液，料液比1∶20，提取時間1.5 h。各因子對提取率的影響依次為：提取劑＞提取時間＞投料比。在最佳超聲提取條件下所得牡丹籽皮總黃酮提取物含量為7.8%。

目前市面上有許多產品為保持產品營養價值和提高產品穩定性在食品中添加合成抗氧化劑，如特丁基對苯二酚（TBHQ）、丁基羥基茴香醚（BHA），這些抗氧化劑在保持產品質量上有著顯著效果，但同時對人體的健康有著潛在的威脅。因此，天然抗氧化劑越來越為人所熟知和喜歡，牡丹籽皮總黃酮的提取也就存在著研究的意義。牡丹籽皮作為一種副產品，很具開發潛力。目前牡丹籽皮總黃酮的提取方法有很多，每種方法都有各自的優點，但也存在著提取液量大、溶劑回收率低、成本高等缺點[6]。本研究采用超聲法提取牡丹籽皮總黃酮，提取速度快、耗能低、目標成分提取效率高，為進一步研究牡丹籽皮總黃酮的提取提供了理論依據，同時對于牡丹的資源化利用，牡丹籽皮的廢物利用，具有巨大的經濟價值和環保價值。

參考文獻：

[1]竇勇博.牡丹花黃酮的抗氧化活性研究[J].中國果菜，2016（4）：23-36.

[2]PCH Hollman，MB Katan. Dictary Flavonoids: Intake,Health effects and Bioavailability[J].Food and Chemical Toxicology，1999（9-10）：937-942.

[3]朱 丹，袁 芳，孟 坤等.黃酮類化合物的研究進展[J].中華中醫藥雜志，2007（6）：387-389.

[4]張 俞，劉婷婷，劉 洋，等.蒙古櫟種殼多酚的超聲輸助提取及抗氧化能力[J].植物研究，2010（5）：623-628.

[5]林 平，張 瑩，祖元剛，等.核桃楸葉片中總黃酮的最佳提取工藝研究[J].植物研究，2007（5）：616-618.

[6]孟慶煥，王 化，王洪政，等.牡丹種皮黃酮提取及對ABTS自由基清除作用[J].植物研究，2013（4）：504-507.