口香糖中多種色淀類(lèi)色素的檢測(cè)方法

◎ 房英杰，顏顯輝，于軍強(qiáng)

（榮成出入境檢驗(yàn)檢疫局，山東 榮成 264300）

隨著食品工業(yè)的發(fā)展，色素由于可有效改善食品的色澤，被廣泛應(yīng)用于食品加工業(yè)中[1]。食用色素是以食品著色為目的的一類(lèi)食品添加劑[2]，我國(guó)對(duì)色素的使用范圍及使用量在GB 2760-2014中有明確規(guī)定[3]。色素在口香糖中的使用通常以色淀的方式添加，色淀由于水溶性差，檢測(cè)時(shí)提取困難。因此，研究一種可行的口香糖色素（含色淀）的檢測(cè)方法，可有效地控制色素的含量，保障消費(fèi)者的安全。本研究在參考各種文獻(xiàn)[4-6]的基礎(chǔ)上，建立了一種適合于口香糖中色素的測(cè)定方法。

1 試驗(yàn)材料

1.1 儀器

超聲波清洗儀，HSC-12A；半自動(dòng)固相萃取儀，美國(guó)supelco公司；Agilent 1260液相色譜儀，美國(guó)Agilent公司；ODS色譜柱，ZORBAX SB-C18，5 μm，150 mm×4.6 mm；漩渦混合器，IKA MS3；純水儀，密理博；電子天平，MELLTER AB204-S；離心機(jī)，日立；冰箱。

1.2 試劑及溶液

檸檬黃標(biāo)準(zhǔn)品、日落黃標(biāo)準(zhǔn)品、亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品、靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品、誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)品和檸檬黃鋁色淀，濃度36%～39%；日落黃鋁色淀，濃度38%～42%；亮藍(lán)鋁色淀，濃度28%～31%；靛藍(lán)鋁色淀，濃度30%～～36%；誘惑紅鋁色淀，濃度38%～42%；赤蘚紅鋁色淀，濃度38%～42%。以上各試劑均購(gòu)自美國(guó)卡樂(lè)康公司。

甲醇，色譜純；乙腈，色譜純；乙酸銨，優(yōu)級(jí)純；氫氧化鈉，分析純；PEP-plus 500 mg/6 mL固相萃取小柱，艾杰爾；C18固相萃取小柱500 mg/6 mL；乙酸銨，分析純；氫氧化鈉，分析純；氮?dú)狻?/p>

2 試驗(yàn)方法

2.1 樣品提取

稱(chēng)取2.0 g樣品于50 mL離心管中，加入15 mL 60 ℃0.02 moL/L氫氧化鈉溶液，再加入5 g海砂，渦旋混勻1 min，再以3 500 r/min離心10 min，取上清。殘?jiān)尤?0 mL提取液重復(fù)提取一次，以3 500 r/min離心10min，取上清與第一次提取液合并混勻。將上清液轉(zhuǎn)移至125 mL的容量瓶中，加入30 mL正己烷，振蕩混合1 min，靜置分層后棄去正己烷層。下層液體加入30 mL的正己烷，振蕩混合1 min，靜置分層后取下層12.5 mL液體作凈化處理。

2.2 樣品的凈化

采用PEP-plus 500 mg/6 mL固相萃取小柱凈化，固相萃取小柱分別用5 mL甲醇，5 mL水淋洗，12.5 mL提取液過(guò)柱，再用2 mL水淋洗柱子，吹干固相萃取小柱內(nèi)的液體，用3 mL 5%氨水甲醇洗脫。洗脫液置40 ℃水浴中氮吹至1～2 mL，加水定容至5 mL，取1.5 mL溶液置1.5 mL離心管中，10 000 r/min轉(zhuǎn)離心5 min，取上清液上機(jī)測(cè)定。

2.3 儀器條件

流速：1.5 mL/min；柱溫：25℃；色譜柱：ZORBAX SB-C18，5 μm，150 mm×4.6 mm； 進(jìn) 樣 量：20 μL；流動(dòng)相：A為pH7.5的1%的乙酸銨溶液，B為甲醇∶乙腈=80∶20（體積比）；梯度洗脫程序?yàn)椋?～2.0 min，100% A；2.0～22.0 min，100%～48%A；22.0～40.0 min，48%～10%A；40.0～43.0 min，10%～100%A。二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)變化程序?yàn)椋?～8.5 min，427～ 610 nm；11.0～ 14.0 min，485～ 505 nm；18～23 min，630～530 nm。

3 結(jié)果與討論

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

在0.2、0.4、1.0、4.0 mg/kg和10.0 mg/kg 5個(gè)濃度范圍內(nèi)，檸檬黃、靛藍(lán)、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)和赤蘚紅6種色素均具有較好的線(xiàn)性，相關(guān)系數(shù)均為0.9998。

3.2 分離條件

本研究中采用梯度洗脫的方式對(duì)色素進(jìn)行分離，從圖1可看出，檸檬黃、靛藍(lán)、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)和赤蘚紅6種色素基線(xiàn)完全分離，峰形尖銳對(duì)稱(chēng)。

圖1 6種色素液相色譜圖

3.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

目前國(guó)家標(biāo)《食品中合成著色劑的測(cè)定》（GB/T 5009.35-2003）采用的檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《食品中的誘惑紅、酸性紅、亮藍(lán)、日落黃的含量檢測(cè) 高效液相色譜法》（SN/T 1743-2006）也采用這一檢測(cè)波長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)中，采用DAD檢測(cè)器對(duì)目標(biāo)色素的最大吸收波長(zhǎng)進(jìn)行掃描，從掃描的結(jié)果可看出，檸檬黃、靛藍(lán)、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)和赤蘚紅的紫外區(qū)外最大吸收波長(zhǎng)分別為：427、610、485、505、630 nm和530 nm。

3.4 回收率

從表1中可看出，在0.5、1.0、5.0 mg/kg 3個(gè)濃度下，檸檬黃的回收率在73.2%～77.0%，靛藍(lán)的回收率在78.6%～82.4%，日落黃回收率在78.6%～82.4%，誘惑紅回收率在80.5%～86.3%，亮藍(lán)回收率在70.8%～74.1%，赤蘚紅回收率在72.6%～74.3%，6種色素均具有較好的回收率。

表1 不同添加濃度下6種色素的回收率表

3.5 精密度

從表2中可看出，在0.5、1.0、5.0 mg/kg 3個(gè)濃度下，檸檬黃精密度在4.0%～5.6%，靛藍(lán)精密度在5.0%～6.3%，日落黃精密度在3.1%～4.8%，誘惑紅精密度在5.5%～6.6%，亮藍(lán)精密度在3.5%～5.3%，赤蘚紅精密度在4.6%～5.1%，6種色素均具有較好的精密度。

表2 不同添加濃度下6種色素的精密度表

3.6 檢出限

以1.0 mg/kg的色素標(biāo)準(zhǔn)品添加空白樣品，根據(jù)3倍信噪比計(jì)算檢出限，檸檬黃、靛藍(lán)、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)和赤蘚紅的檢出限分別為0.01、0.04、0.01、0.02、0.01 mg/kg和 0.02 mg/kg。

4 結(jié)語(yǔ)

口香糖中的檸檬黃、靛藍(lán)、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)和赤蘚紅6種色素在0.2～10.0 mg/kg內(nèi)均具有良好的線(xiàn)性，加標(biāo)回收率在70%～87%，本方法具有靈敏度高、重復(fù)性好等特點(diǎn)，適用于口香糖中色素的測(cè)定。

參考文獻(xiàn)：

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