牡丹籽皮中總黃酮提取工藝探究

◎ 程雪芬，顧菲菲，吳媛霞，晉曉峰，方 晴

（國家銅鉛鋅及制品質量監督檢驗中心，安徽 銅陵 244000）

黃酮類物質是自然界中一類重要的抗氧化物質，屬于天然次級代謝產物[1]。黃酮類物質的提取方法有水提法、有機溶劑萃取法、微波提取法、超聲波法、超臨界流體萃取法等[2-6]。純化方法主要有柱層析法（硅膠、聚酰胺、葡聚糖凝膠）、紙層析法、薄層層析法、鉛鹽沉淀、大孔樹脂吸附分離法等[7-12]，其中大孔樹脂法在工業上應用最為廣泛。

1 實驗材料

牡丹仔皮，購于安徽銅陵；大孔吸附樹脂（HZ835、AB-8、HZ-818、DA-201），分別購于國內不同化工廠；蕓香葉苷，國藥集團化學試劑有限公司；氫氧化鈉，無錫市展望化工試劑有限公司；亞硝酸納，無錫市展望化工試劑有限公司；硝酸鋁，國藥集團化學試劑有限公司；乙醇，煙臺市雙雙化工有限公司。

2 方法與結果

2.1 大孔樹脂的預處理

用95%乙醇溶液浸泡4種不同類型樹脂24 h，待充分溶脹，裝柱，再用乙醇洗至洗出液加入適量的蒸餾水（v/v，1∶5），至無白色渾濁現象，用蒸餾水洗至無乙醇味，濾取備用。

2.2 大孔樹脂中含水量的測定

分別稱取一定質量經上述預處理的大孔樹脂，65 ℃烘干至恒重，計算含水量。經測量，HZ835的含水量為72.35%，AB-8的含水量為69.89%，HZ818的含水量為75.24%，DA201的含水量為61.14%。

2.3 大孔樹脂對牡丹籽皮總黃酮吸附量的測定

分別稱取一定質量2.1中預處理的大孔樹脂（分別相當于0.5 g干樹脂），加入60 mL黃酮濃度為0.184 mg/mL的牡丹籽皮提取液，置搖床上，室溫下連續震蕩24 h。充分吸附后，過濾，測定濾液中總黃酮的含量。計算得吸附量Q，HZ835為14.64 mg/g，AB-8為15.44 mg/g，HZ818為 14.39 mg/g；DA201為 14.86 mg/g， 故 選 用AB-8大孔樹脂來提取牡丹籽皮總黃酮。

2.4 牡丹籽皮總黃酮提取工藝參數的探究

2.4.1 吸附流速的影響

在室溫下，將初始濃度為1.13 mg/mL的提取液分別以0.01、0.04、0.08、0.10 mL/s的流速通過裝有10 mL AB-8大孔樹脂的層析柱（Φ1×50 cm），流速用秒表控制。之后濃度分別為0.8482、0.8963、0.9667、0.9772 μg/mL。得出大孔樹脂的吸附量隨著流速的增加而遞減，但減幅較小。流速過大，溶質提早泄漏，耗能增多。流速過慢延長生長周期，生產成本增加。綜合考慮，確定最佳上樣流速為0.04 mL/s。

2.4.2 洗脫劑的影響

黃酮類化合物分子中具有多個羥基，易溶于有機溶劑中，選擇乙醇作為洗脫劑。按上述所確定的吸附條件進行動態吸附后，裝有大孔樹脂的層析柱先用水洗脫至洗脫液近無色后，再分別用濃度為30%、50%、70%和95%的乙醇溶液進行梯度洗脫，以乙醇濃度為橫坐標，洗脫液中黃酮的含量占樹脂吸附的總黃酮含量的百分比為縱坐標作圖，如圖1所示。

圖1 乙醇濃度對樹脂洗脫性能的影響圖

由圖1得出，在乙醇溶液濃度為50%時，27.69%以上的總黃酮被洗脫出，故認為50%乙醇為最佳洗脫濃度。

3 結語

通過比較4種大孔樹脂對牡丹籽皮總黃酮的吸附與解吸特性，選擇出一種最適合提取牡丹仔皮總黃酮的樹脂，并對其提取工藝參數進行探究。結果表明：從樹脂靜態平衡吸附量、靜態吸附動力學過程等方面探究4種大孔吸附樹脂對牡丹籽皮總黃酮的吸附性能，選定AB-8大孔樹脂作為分離純化牡丹籽皮總黃酮的介質；再通過AB-8大孔樹脂對牡丹籽皮總黃酮的動態吸附過程的探究表明，提取牡丹籽皮總黃酮的最佳工藝條件為：取一定量預處理好的AB-8大孔樹脂，使牡丹籽皮提取液緩慢通過樹脂床，用1 000 mL的水柱去柱中殘留的溶液，再用濃度為50%乙醇溶液以0.04 mL/s的流速流過樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮至干，即為牡丹籽皮總黃酮。

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