檉柳ThbHLH1上游表達調控基因1)

張兵　及曉宇　聶顯光　王玉成

(林木遺傳育種國家重點實驗室(東北林業大學)，哈爾濱，150040)

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檉柳ThbHLH1上游表達調控基因1)

張兵及曉宇聶顯光王玉成

(林木遺傳育種國家重點實驗室(東北林業大學)，哈爾濱，150040)

摘要通過檉柳轉錄組分析克隆得到了一條bHLH基因(ThbHLH1)。在此基礎上，本研究通過TAIL-PCR的方法克隆ThbHLH1轉錄因子的啟動子序列，長2 061 bp。經PLACE等軟件分析發現，ThbHLH1啟動子中存在多個DOF元件，利用酵母單雜交和染色質免疫共沉淀試驗(ChIP試驗)研究發現，檉柳的ThDof16基因可識別ThbHLH1基因啟動子中的DOF元件，說明ThDof16基因是調控ThbHLH1基因表達的上游調控因子。另外，通過基因槍技術瞬時轉化煙草葉片，進行GUS染色和GUS酶活測定的試驗，得到進一步驗證。

關鍵詞轉錄因子;ThbHLH1基因;非生物脅迫;基因表達調控;酵母單雜交;ChIP試驗;GUS酶活測定;GUS染色

分類號S792.12；Q78

Upstream Regulator ofThbHLH1 fromTamarixhispida

Zhang Bing, Ji Xiaoyu, Nie Xianguang, Wang Yucheng

(The State Key Laboratory of Forest Genetics and Breeding, Northeast Forestry University, Harbin 150040, P. R. China)//Journal of Northeast Forestry University，2016,44(4)：13-17,24.

AbHLHgene,ThbHLH1 was cloned from transcriptome ofTamarixhispida. The promoter region ofThbHLH1 with 2061 bp in length was cloned using TAIL-PCR. There were many DOF motifs in the promoter ofThbHLH1, and yeast one hybrid and ChIP analysis were performed to determine the upstream of ThbHLH1. The results showed that a DOF protein fromT.hispida,ThDof16 can bind to these DOF motifs in the promoter ofThbHLH1, and is the upstream regulator ofThbHLH1. The GUS staining and GUS enzyme activity determination assays of the transient-transformed tobacco leaves, which were obtained by gene-gun bombardment technology, were performed.

KeywordsTranscription factor;ThbHLH1; Abiotic stress; Gene expression regulation; Yeast one-hybrid; ChIP; GUS enzyme activity assay; GUS staining

bHLH轉錄因子是一類重要的轉錄因子家族，植物中的bHLH蛋白分布非常地廣泛，功能也相當多樣化[1]。在植物中，擬南芥的bHLH基因家族由162個成員組成[2]。研究表明bHLH結構域含有一個特征序列模式，由一個HLHM及其上游富含堿性氨基酸順序的核酸順序組成[3]。bHLH轉錄因子結構中的bHLH結構域，具有與DNA結合和與bHLH蛋白形成同源或異源二聚體的能力。同時，bHLH蛋白以同源或異源二聚體形式與DNA上E—盒(E-box)序列CANNTG結合而發揮功能。研究發現，bHLH轉錄因子在生物的生長發育調控過程中起著極為重要的作用[4]，在高等植物不同組織中廣泛存在，在植物花器官發生、激素應答和植物次生代謝中扮演了非常重要的角色[5-6]。……