痰結核桿菌在結核患者中的檢驗方法探討

馬瑞瑛 楊振萍

摘要：目的 探討痰結核桿菌在結核患者中的檢驗方法。方法 選取2014年1 ～12月收治的結核病患者133例，取所有患者痰液標本分三份分別采用羅氏培養基培養法、痰涂片抗酸染色法和PCR檢查法進行結核桿菌檢測，分析對比3種方法檢測結果，檢測時間與檢測成本。結果 經過對比，PCR 檢測法檢測結核桿菌陽性率高于痰涂片抗酸染色法和羅氏培養基培養法，痰涂片抗酸染色法檢測時間最短，羅氏培養基培養法檢測成本最低（P<0.05）。結論 3種方式檢測結核患者痰結核桿菌，PCR檢測法檢測準確率最高，其次為菌培養法。但涂片法所用檢測時間較短。臨床上應依據實際情況選擇所需。

關鍵詞：痰結核桿菌；結核病；檢驗方法

結核病是結核桿菌所引起的慢性傳染性疾病，因其具有的高度傳染性，一直以來都是人類的健康殺手，影響十分嚴重。近幾年，隨著結核桿菌的變異和抗藥性不斷增加，結核病的發病率、發病人數與病死率呈上升趨勢發展。這種情況在發展中國家這種情況更加嚴重，據統計，全球目前約有大約30%人數受到了結核桿菌感染，每年新增結核病例900多萬，死于結核病的人數約為200萬，該病已成為因單一病原體引起，致病致死率最高的疾病[1]。因此，準確快速的結核桿菌檢測并幫助確診結核病人對發現、控制、治療結核病都有十分關鍵的意義。目前對于結核桿菌的檢測是診斷結核病較為有效的方法。通常結核桿菌的診斷方法主要是采用羅氏培養基培養法和痰涂片抗酸染色法。這兩種方法雖然有一定效果，但在一定條件上受限太多，各有優缺點，涂片法相對簡單容易操作，但檢出率較低。羅氏培養基培養法先對檢出率高但通常需要4～8w的檢測周期。隨著現代分子生物學技術的進步，熒光定量PCR（fluorescent quantitative PCR，FQ-PCR）做為新開發出的技術，因其具有的高特異性和敏感度，被逐漸應用到臨床診斷[2]。本研究對比分析了幾種痰結核桿菌的檢驗方法效果，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取我院2014年1～12月收治的結核病患者133例，去痰液標本133份，其中男73例，女60例，年齡17～46歲，平均38.7歲，所有患者均有不同程度盜汗、低熱，乏力等臨床癥狀， 經臨床觀察與病理學診斷確診為肺結核。

1.2方法 所有患者于清晨用生理鹽水清理口腔后咳痰，并棄去第一口痰液，取第二口分三份分別裝在無菌標本盒內立即送至我院檢驗科檢測。對痰液標本分別應用羅氏培養基培養法、痰涂片抗酸染色法和PCR檢測。

1.2.1羅氏培養基培養 取2ml痰液標本中膿性部分置于消化管中，根據消化管中標本濃稠度，取適量3.0%～4.0%NaOH溶液加入消化管，放置在渦旋震蕩器上搖晃均勻后靜置15 min，取0.1ml無菌環境下接種在兩支羅氏培養基上，溫箱溫度設置在（36±1）℃孵育培養8w，分別在孵育的第3d和第7d觀察記錄生長數據，以后每周均觀察記錄一次。

1.2.2痰涂片抗酸染色法 按照《痰涂片鏡檢標準化操作及質量保證手冊》中的規范要求留取操作送檢的痰液標本，在生物安全柜中取痰液標本的膿性部分涂厚片，干后采用抗酸染色，顯微鏡在100視野下檢測記錄。

1.2.3 PCR檢查 取4倍痰液標本體積的4%NaoH溶液加入送檢痰液中，搖晃均勻，置于室溫下液化30min后，取0.5～1.5ml加入0.5ml4%NaoH放在離心管中靜置10min，進行5min速度15000rpm下的低溫離心。棄上清，經沉淀后加1ml無菌生理鹽水混合均勻，轉速15000rpm進行5min離心，沉淀物重復操作1次。加入50μL裂解液充分混勻，沸水浴10min后15000rpm離心5min。取2μL處理后的樣本作為模板，加進PCR管內進行PCR 擴增。結果用陽性定量參考品CT值和陰、陽性質控

品進行判定。

1.3統計學方法 數據資料采用SPSS17.0軟件進行處理分析，計量資料用χ2檢驗，對相關數據進行分析，P<0.05差異明顯，具有統計學意義。

2 結果

2.1 133例結核患者檢驗結果 133例結核患者痰液經過三種方式檢驗，羅氏培養基培養法檢驗結核桿菌陽性59例，陽性率44.36%。痰涂片抗酸染色法檢驗結核桿菌陽性40例，陽性率30.08%。PCR檢查結核桿菌陽性87例，陽性率65.41%。經過對比，PCR檢查法檢測結核桿菌陽性率（65.41%）>羅氏培養基培養法（44.36%）>痰涂片抗酸染色法（30.08%）。差異明顯，具有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 3種檢測方式檢測成本與檢測時間對比 經過對比，檢測成本上PCR檢查法>痰涂片抗酸染色法>羅氏培養基培養法；檢測時間上羅氏培養基培養法>PCR檢查法>痰涂片抗酸染色法。3種方式對比差異顯著，具有統計學意義（P<0.05），見表2。

3 討論

肺結核是常見的呼吸道傳染病，治療不當，常會轉移使腎臟等器官病變，對人類健康危害很大，一般結核患者早期的臨床癥狀雖然多樣但并不典型，容易出現誤診情況，而結核病患者的治療周期普遍較長，臨床上更加需要準確有效的檢測方式幫助診治患者的病情。結核桿菌經過病原學檢查確認一直是診斷肺結核的金標準，對于早期的預防和治療階段幫助很大。結核桿菌檢測方法較多，目前主要應用涂片抗酸染色法、培養法和RT-PCR檢測法[3]。涂片抗酸染色法與培養法做為傳統檢測方法檢測成本相對低一些，但檢測效果并不理想，而基于新技術的PCR檢測法有更加準確的檢測率。本文研究顯示，分析133例結合患者痰液檢測結果，PCR檢測法檢測結核桿菌陽性率最高，羅氏培養基培養法次之，痰涂片抗酸染色法最低，PCR 檢測法是從分子領域對結核桿菌進行定量、定性的檢測，相比具有較高的特異性和靈敏性，可作為評估療效的主要檢測手段應用。羅氏培養基培養法所用檢測時間最長，但在菌落培養過程中可以評估細菌的耐藥性，對臨床研究有較大的應用價值。

綜上所述，臨床上如要準確的對痰結核桿菌進行檢測，PCR檢測法是首選，羅氏培養基培養法對檢測治療過程中細菌抗藥性有一定的臨床價值。而痰涂片抗酸染色法適合規模性的普查活動。

參考文獻：

[1]楊光武.不同檢驗方法在肺結核早期診斷中的應用[J].航空航天醫學雜志，2012，23（3）：309-310.

[2]趙文娟，張翠英，高玉然.三種結核抗體檢查診斷活動性肺結核比較[J].預防醫學情報雜志，2012，28（9）：702-705.

[3]楊巍巍.結核患者痰結核桿菌檢驗的方法探討[J].中國醫藥指南，2013，5（11）：258-259.

編輯/趙恒德