淺談注射劑生產的微生物控制

陳傳就

摘要：注射劑的質量關乎患者生命安危，因此我國GMP無菌附錄規定“注射劑的生產須滿足其質量和預定用途的要求，應最大限度降低微生物、各種微粒和熱原的污染。”通過分析微生物的主要污染因素和防治措施，為注射劑生產的微生物控制和降低污染提供參考。

關鍵詞：無菌工藝；注射劑；微生物控制；微生物污染

注射劑是直接注入人體的一種劑型，不經過任何人體屏障直接進入體循環。微生物污染是影響注射劑質量的關鍵因素之一，關乎患者的生命安危。2006年的克林霉素磷酸酯（欣弗事件）就是典型的例子之一。安徽華源制藥公司未經嚴格驗證擅自增加滅菌柜裝載量，改變滅菌溫度和時間，致使產品無菌檢查和熱源檢查均不合格，造成93例患者發生嚴重反應和11例死亡的藥品不良事件。欣弗事件不是偶然，警醒我們在生產過程中時刻關注藥品質量，關注微生物污染問題。微生物的污染來源于多方面，以下是幾個主要的因素。

1 人員

人是主要的污染源，是微生物污染的關鍵影響因素。任何一流的廠房設計和先進的設備都離不開認為人員活動的干預，因此可以說，人員的管理水平決定著藥品質量水平。國外經過試驗得出：①潔凈室內當工作人員穿無菌服時，靜止時的發菌量一般為10～300個/min/人，軀體一般活動時的發菌量為150～1000個/min/人，快步行走時的發菌量為900～2500個/min/人。②咳嗽一次的發菌量一般為70～700個/min/人，噴嚏一次的發菌量一般為4000～60000個/min/人。③穿平常衣服時發菌量為3300～62000個/min/人。④無口罩發菌量：有口罩發菌量為（1∶7）～（1∶14）。

由上數據可知，潔凈室內穿無菌衣人員的靜態發菌量一般不超過300個/min/人，動態發菌量一般不超過1000個/min/人。

由此可見，人員的活動對潔凈區微生物數量產生非常重大的影響，甚至是決定性的影響。要消除人員帶來的污染，必須規范人員的行為和操作。

1.1相應的潔凈區域 必須僅限于相關區域的生產操作人員進出，非相關區域的操作人員是不允許進入，非生產相關人員原則上禁止進出生產潔凈區域。特殊情況下，參觀人員，機械設備維修人員等需要進入潔凈區的，必須經過嚴格的更衣培訓，并在生產相關人員的陪同和指導下才能或許進入。

1.2人員無菌意識的培訓 應對每一個員工培訓微生物基礎知識，潔凈區基本知識，無菌藥品基本知識和法規等。人的意識決定著人的行為，加強無菌意識培訓，才能從源頭上將污染減少到最低。

1.3人員的更衣程序 每個員工正確更衣不是一件簡單的事情，里面包含很多細節性的東西。人員是活動的，更衣不合格，就會把污染帶入潔凈區，產品就會承受巨大的風險。很多跨國公司對更衣的要求非常嚴格，大多普通的員工反復練習1個月甚至更長才能達到要求，才能獲準進入無菌核心區域操作。企業應該嚴肅對待更衣問題，差不多的思想千萬要不得。

2 滅菌設備和滅菌程序

滅菌設備要選擇方便驗證的設備，比如方便驗證布點。有很多手提式的滅菌設備既沒有驗證口，也不方便驗證布點。這樣的滅菌設備是不可控的，是絕不能使用的。滅菌程序必須要經過驗證。滅菌鍋的裝載量，裝載方式，空載滿載等都要經過驗證，包括微生物的挑戰性實驗。滅菌程序一經驗證，就必須按照既定的驗證程序進行，任何擅自改變都會產生無可預計的風險。

2.1裝載量和裝載方式 一個滅菌程序要按照既定的裝載量和裝載方式進行。裝載量和裝載的隨意改變會影響滅菌氣體的流通和穿透性，可能導致滅菌不徹底，產品發生污染。

2.2微生物的耐熱性評估 微生物在不同的介質中耐熱性能是不一樣的，D值有可能存在較大波動，有可能會超過所用生物指示劑的D值。每個公司應該采集物料、環境和人員身上分離到的菌株，測定相關的D值并進行對比，才能選用最合適的驗證程序。比如附著于膠塞的分離菌，其耐熱性能可能高于生物指示劑（如嗜熱脂肪芽孢桿菌生物指示劑）的耐熱性能，盲目的以生物指示劑為參照，就會導致滅菌不徹底，對產品質量和患者產生危害。

2.3對無菌保證的理解 歐盟滅菌決策樹對濕熱滅菌的F0值要求至少為8 min。這里應該理解為手段，而不是標準。F0≥8 min不一定符合藥典標準，F0≤8 min不一定就不符合藥典標準，關鍵是要對生產全過程進行必要的監控措施、滅菌前作污染菌的檢查（污染菌總數及耐熱性）；另外，有人將耐熱性最強的芽孢接入產品中，濃度須達到106，認為只有滅菌程序能使之下降6D或12D時，此滅菌工藝才能達到標準，這是一種誤解。接種進入產品的生物指示劑耐熱性高，在上述濃度下將其完全殺滅所需的F0會由此變得很大。

3 清潔和消毒

現在很多廠家多采用過氧化氫、乳酸、臭氧等進行熏蒸消毒，應根據實際情況使用。不管是何種消毒方式，不能參照相關的消毒物質濃度，還需要考慮環境溫度和濕度，才能發揮最好的效果。所有的消毒效果必須以驗證數據為準。這里需要注意的是，生物指示劑的選擇。有些廠家選擇暴露的細菌芽孢生物指示劑，如枯草芽孢桿菌，而且消毒頻率比較大，需要注意因此帶來的污染。紫外消毒也是一種常用的有效的表面消毒方式，主要用在潔凈工作臺、層流罩、物流傳遞窗、甚至整個潔凈房間。紫外線消毒需要對紫外燈的波長，使用時間和強度進行確認，才能保證消毒效果。紫外線波長為136～390 nm，消毒用的紫外燈應限制在短波的波長范圍內，為200～275 nm，殺菌作用最強的波段是250～270 nm，其最強滅菌波長為253.7 nm，在操作面上的強度要求達到70 μW/cm2以上，殺菌作用隨菌種不同而不同。國產紫外燈平均壽命一般為2000 h，但是其滅菌有效使用時間要依據驗證而定。傳遞窗傳遞物品的裝載方式也要經過驗證，否則紫外消毒的效果會大打折扣。

4 物料和物品的傳遞方式

理想的物料區應該緊鄰生產區，縮短物料的傳輸距離，避免污染。物料區離生產區域太遠，增加轉運的麻煩更增加污染的風險，在非正常天氣比如梅雨季節的時候更明顯。物流通道應有專用的通道，并且進和出的通道嚴格分開。物料進入潔凈區前，表面要進行徹底的清潔和消毒，避免將污染帶入無菌區域。無菌物品轉移應該避免二次污染。滅完菌的物料或者物品，從滅菌設備中轉移到目標區域，操作不當很容易造成二次污染。常見的如無菌原料的轉運，無菌膠塞的轉運，凍干成品出箱的轉運（進行軋蓋），都需要在層流下進行轉運，人員的操作也必須要十分的仔細小心，除了不能直接接觸無菌物品等最基本的要求外，應避免人體部分或者長時間暴露于層流下物料的上方或前方。

總結：注射劑生產過程中，每一個環節都是預防微生物污染不可忽視的。廠房設施的良好設計和布局，水系統，公用氣體，空調系統等公用系統等，都能夠產生重要的影響。人員是其中最重要的影響因素，物料的傳遞和轉運，滅菌程序的合理驗證和使用，消毒劑的交叉使用等各項細節性的東西嚴格遵循法規和無菌操作，能夠在極大的程度上避免微生物污染，提高產品質量[1-4]。

參考文獻：

[1]藥品生產質量管理規范無菌附錄[S].2013.

[2]白良慧，李臣武.藥品生產驗證指南[M].北京：人民衛生出版社，2003：74.

[3]賀國強，陳躍武，馬義嶺.制藥工業驗證實施手冊[M].北京：化學工業出版社，2012：113-119.

[4]弗里德克李·卡利登，詹姆斯·艾蓋洛克.無菌制藥工藝的驗證[M].上海：上海科學普及出版社：178-200.

編輯/張燕