鐵皮石斛離體快繁初代培養(yǎng)基的篩選

何靜茹　劉會穎

摘 要 試驗(yàn)以鐵皮石斛假鱗莖作為實(shí)驗(yàn)材料，研究鐵皮石斛初代培養(yǎng)中，適宜腋芽萌發(fā)的生長調(diào)節(jié)劑濃度組合。結(jié)果表明，將消毒后的莖段水平放置于MS+NAA0.3 mg/L+6-BA2 mg/L培養(yǎng)基中，10 d左右開始萌發(fā)，且萌發(fā)的腋芽長且壯，為9組不同生長調(diào)節(jié)劑濃度組合培養(yǎng)基中最佳的初代培養(yǎng)基。

關(guān)鍵詞 鐵皮石斛；初代培養(yǎng)；培養(yǎng)基

中圖分類號：S682.31 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2016.21.021

鐵皮石斛（Dendrobium officinale）屬蘭科（Orchideceae）石斛屬（Dendrobium）多年生附生性草本植物，既是我國傳統(tǒng)的名貴中藥材[1]，也是價格昂貴的出口藥材[2]。多分布于海拔近千米的山地半陰濕巖石上，加上長期采挖，野生鐵皮石斛資源日漸枯竭[3-4]。而鐵皮石斛的種子細(xì)如微塵，且無胚乳，自然條件下萌發(fā)率極低（低于5%[5]）須與蘭菌共生才能萌發(fā)[6]，實(shí)生苗人工栽培比較困難；并且傳統(tǒng)的分株、扦插等繁殖方式生長周期長，繁殖率低，遠(yuǎn)不能滿足生產(chǎn)需要[7]。鐵皮石斛離體快繁技術(shù)無污染、成苗周期短，且能在短期內(nèi)大量繁殖，因此是解決此問題的一個有效方法。本試驗(yàn)以鐵皮石斛假鱗莖作為實(shí)驗(yàn)材料，對鐵皮石斛離體快繁途經(jīng)中初代培養(yǎng)的植物生長調(diào)節(jié)劑濃度配比進(jìn)行篩選，找到誘導(dǎo)出腋芽的最佳培養(yǎng)基，以便繼續(xù)后來的增殖培養(yǎng)，短期內(nèi)獲得無菌健康植株。力求對鐵皮石斛的種質(zhì)資源保護(hù)提出有效途徑，以及對鐵皮石斛的離體快繁及工廠化育苗提供一些理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 植物材料

以鐵皮石斛帶腋芽假鱗莖作為試驗(yàn)材料進(jìn)行研究。

1.2 試驗(yàn)方法

去掉假鱗莖上面的葉片和葉鞘，切成長約1.5 cm的帶節(jié)莖段，用軟毛刷蘸取洗潔精液清洗莖段表面，再用自來水持續(xù)沖洗1 h。然后濾干水分，在70%酒精中浸泡8 s，用無菌水沖洗2～3次，再用10%次氯酸鈉浸泡

10 min，最后用無菌水沖洗3～5次，等待接種。

以MS為基本培養(yǎng)基（蔗糖30 g/L、瓊脂7 g/L），添加不同濃度的NAA（0.2～0.4 mg/L）和6-BA（1.0～

3.0 mg/L），形成9種不同生長調(diào)節(jié)劑濃度的培養(yǎng)基組合。將經(jīng)滅菌的假鱗莖切成長約1 cm的帶節(jié)莖段，分別接種于不同初代培養(yǎng)基中，接種方式分水平放置和直立放置兩種，接種后置于溫度24±2 ℃、光照強(qiáng)度1 600～2 000 lx、光照時間14 h/d中培養(yǎng)。每個處理30瓶。重復(fù)3次，接種后

30 d，對萌發(fā)的腋芽高度和直徑進(jìn)行測量統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 莖段不同放置方式對腋芽萌發(fā)的影響

本試驗(yàn)對帶節(jié)莖段采取兩種接種方式，一種是直立放置，另一種是水平放置。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，水平放置的莖段約10 d開始萌發(fā)腋芽，萌芽率100%；而直立放置的莖段約15 d后腋芽才開始萌發(fā)，萌芽率只有65%。且水平放置的帶節(jié)莖段萌發(fā)的腋芽無論從高度還是直徑都受植物生長調(diào)節(jié)劑濃度配比的影響，而直立放置的帶節(jié)莖段，萌發(fā)的腋芽平均高度1～2 cm，直在3～4 mm，其數(shù)值基本不受植物生長調(diào)節(jié)劑濃度配比的影響。且相同植物生長調(diào)節(jié)劑濃度配比中，水平放置的莖段萌發(fā)的腋芽較直立放置的較高且較壯，見表1，誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)效果更好。

2.2 不同生長調(diào)節(jié)劑濃度配比對腋芽萌發(fā)的影響

莖段接種30 d后，對所有生長調(diào)節(jié)劑濃度組合的培養(yǎng)基中外植體已萌發(fā)的腋芽進(jìn)行高度與直徑的統(tǒng)計。見表1，相同生長調(diào)節(jié)劑濃度組合的培養(yǎng)基中，無論是萌發(fā)的腋芽的平均高度、還是平均直徑，水平放置的方式優(yōu)于直立放置。NAA濃度為0.2 mg/L時，萌發(fā)的腋芽高度較矮，直徑偏小，當(dāng)NAA濃度增大到4 mg/L時，配合

1 mg/L的6-BA，腋芽平均高度達(dá)到最大值，為5.45 cm，但是腋芽細(xì)弱，平均直徑僅為2.25 mm。MS+NAA0.3 mg/L+

6-BA3 mg/L培養(yǎng)基中，萌發(fā)的腋芽最粗壯，平均直徑達(dá)到

6.16 mm，但是平均高度只有2.81 cm。從萌發(fā)的腋芽高度及粗壯度等綜合考慮，在9組不同生長調(diào)節(jié)劑的濃度配比中，MS+NAA0.3 mg/L+6-BA2 mg/L培養(yǎng)基中腋芽平均高度為

4.11 cm，平均直徑為5.03 mm，兩項(xiàng)指標(biāo)均衡，為鐵皮石斛初代培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基。

3 討論

本試驗(yàn)以鐵皮石斛的帶節(jié)莖段作為外植體進(jìn)行初代培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)水平放置的帶節(jié)莖段較之直立放置，腋芽誘導(dǎo)的時間更短、誘導(dǎo)率更高，且質(zhì)量更好。有研究表明，生長素和細(xì)胞分裂素的種類和濃度是影響離體快繁的關(guān)鍵因素之一，采用NAA與6-BA居多[8]，在所選擇的3個NAA濃度梯度中，隨著濃度增大，腋芽萌發(fā)的高度隨之增加；NAA濃度為0.3 mg/L時，配合不同濃度梯度的6-BA腋芽直徑數(shù)值相對較大。通過初代培養(yǎng)萌發(fā)的腋芽繼續(xù)培養(yǎng)10～20 d，轉(zhuǎn)接入繼代培養(yǎng)基后，培養(yǎng)約10 d，在其基部切口處能繼續(xù)增殖，長出3～4個新芽，再進(jìn)行增殖培養(yǎng)，可獲得大量叢生芽。

鐵皮石斛的離體快繁一般有2個途徑：一是原球莖途徑，多使用種子作為外植體[9]，此途徑增殖系數(shù)大，能獲得大量組培苗，但培養(yǎng)周期較長，費(fèi)用較高；二是叢生芽途徑，多使用帶節(jié)莖段作為外植體，增殖系數(shù)沒有原球莖途徑大，但外植體容易獲得，培養(yǎng)周期相對較短，且費(fèi)用較低，是工廠化大量生產(chǎn)常選用的途徑。本試驗(yàn)對鐵皮石斛初代培養(yǎng)的探索僅限于對接種方式以及兩種植物生長調(diào)節(jié)劑的濃度配比選擇，在培養(yǎng)過程中，發(fā)現(xiàn)直立放置的帶節(jié)莖段有部分基部褐化，最后死亡，并未成功誘導(dǎo)出腋芽，而水平放置的帶節(jié)莖段均誘導(dǎo)出腋芽，且無褐化現(xiàn)象，具體原因尚不清楚，可能與代謝物質(zhì)的運(yùn)輸方向有關(guān)。

參考文獻(xiàn)

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[9]余樂，蘭芹英，姜宗慶.鐵皮石斛立體快繁技術(shù)[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014（11）：268-270.

（責(zé)任編輯：劉昀）