超高效液相色譜—質譜/質譜法同時測定蔬菜中7種磺胺的殘留量

黃志波 王紀陽 程雪梅 梁志剛 何健安

摘 要 為建立超高效液相色譜-質譜/質譜法（UPLC-MS/MS）同時測定蔬菜中7種磺胺殘留量的方法。樣品用1%乙酸乙腈提取，以C18色譜柱分離待測物，采用多反應監測（MRM）離子掃描模式，外標法進行定量，線性良好，相關系數均大于0.999。結果顯示：7種磺胺的檢出限為0.000 4～0.000 6 mg/kg，樣品添加回收率為67.5%～94.1%，相對標準偏差均少于5.3%（n=6）。該方法簡單快捷、定量準確，可滿足多種蔬菜中7種磺胺的殘留檢測要求。

關鍵詞 超高效液相色譜-質譜/質譜法 ；磺胺 ；殘留量 ；蔬菜

中圖分類號 O657.752 文獻標識碼 A Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2016.06.016

Determination of 7 Sulfanilamide in Vegetables by

UPLC-MS/MS Spectrometry

HUANG Zhibo WANG Jiyang CHENG Xuemei LIAGN Zhigang HE Jian'an

（Dongguan Agricultural Products Institute of Quality Safety Supervision and Inspection，

Dongguan， Guagndong 523000）

Abstract The detectable method of 7 sulfanilamide in vegetables by UPLC-MS/MS spectrometry simultaneous has been established. The samples are initially extracted with 1% acetic acid acetonitrile. The eluate is separated by gradient elution with methanol-water solution of different ratio on C18 （100 mm×2.1 mm， 1.8 μm） column， and detected under positive multiple reactions monitoring（MRM）. The external standard calibration curves are used for quantitative analysis， the correlation coefficients is higher than 0.999. The results showed that the 7 sulfanilamide detection limits is 0.000 4～0.000 6 mg/kg. The average spiked recoveries ranged from 67.5%～94.1%， and the relative standard deviations （RSDs， n=6） is less than 5.3%. The method is quick， easy and effective， it can satisfy the demand for the determination of the 7 sulfanilamide residues in vegetables.

Keywords UPLC-MS/MS ； sulfanilamide ； residual ； vegetable

磺胺類藥物（Sulfonamides，SAs）是指具有對氨基苯磺酰胺結構的一類藥物的總稱，是一類用于預防和治療細菌感染性疾病的化學治療藥物。因其具有結構穩定性和環境持久性，容易在環境中長期殘留，對人類的健康造成較為嚴重的影響[1]。

近年來，磺胺類抗生素普遍用在養殖業中，這些藥物在使用后大多以其原形或者代謝物形式被排出，畜禽糞便廣泛被用作肥料而進入到農田，并影響農田土壤和灌溉水。盡管磺胺在動物性食品中污染問題的關注度很高，但在植物性食品中的污染關注不多，甚至是空白。植物性食品中磺胺污染可能會產生與動物性食品中殘留超標和農藥殘留超標一樣的人體健康風險。

目前，磺胺類抗生素在動物類食品、環境中的監測分析常有報道。涉及分析方法有高效液相色譜法（HPLC）[2-4]、氣相色譜質譜聯用分析法（GC-MS）[5]、液相色譜質譜聯用分析法（LC-MS＼MS）[6-10]，但對于蔬菜中磺胺類藥物殘留檢測分析卻非常少，李學德等[11]撰寫高效液相色譜-熒光檢測法同時測定蔬菜中3種磺胺類藥物殘留一文中提及的前處理方法要烘干磨碎，費時費力，不利于大批量蔬菜的檢測。

本研究建立了基于超高效液相色譜-質譜/質譜（LC-MS/MS）法同時測定蔬菜中7種磺胺的殘留量的分析方法。該法快速、簡單、實用性高，完全能滿足日常蔬菜中磺胺殘留檢測的要求。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器與試劑

Agilent Technologies 6420 Triple Quard 超高效液相色譜串聯四級桿質譜聯用儀購于安捷倫公司；臺式高速冷凍離心機購于德國Sigma；渦旋混合器購于美國VVW公司；乙腈和甲酸均為色譜純；乙酸為分析純；實驗室用水為Milli-Q超純水儀器制備的超純水。

磺胺嘧啶（CAS：68-35-9）、磺胺吡啶（CAS：144-83-2）、磺胺惡唑（CAS：246-67-47）、磺胺氯噠嗪（CAS：80-32-0）、磺胺異惡唑（CAS：127-69-5）、磺胺地索辛（CAS：155-91-9）、磺胺鄰二甲氧嘧啶（CAS：2447-57-6）均購于德國Dr Ehrenstorfer公司，純度均>98%。

1.1.2 儀器工作條件

色譜條件：采用安捷倫ZORNAX BONUS-RP C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm），柱溫為40℃，進樣量為1 μL；流動相：A為乙腈，B為0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫程序見表1。

質譜條件：動態多反應監測（DMRM）正離子掃描模式。其他質譜參數見表2。

1.2 方法

1.2.1 樣品提取

稱取5.00 g已均質過的蔬菜試樣于50 mL的離心管中，加入1%乙酸乙腈15 mL，用渦旋混合器混勻30 s后，震蕩提取30 min。

1.2.2 樣品測定

將離心后樣品用濾紙過濾，濾液收集到20 mL容量瓶中，最后用水定容至20 mL，混勻后過0.2 μm微孔濾膜后，按儀器工作條件進行測定。

2 結果與分析

2.1 儀器條件優化分析

2.1.1 質譜條件考察

在正離子模式下對各待測化合物單標準溶液全掃描找出母離子，SIM掃描模式優化母離子碎裂電壓；再進行子離子掃描，找出每個化合物所對應的2個相對強響應的特征子離子，并優化起碰撞電壓等參數，獲得的最佳質譜條件見表2。

2.1.2 提取劑的選擇

一般磺胺類藥物提取溶劑有乙腈、二氯甲烷，但二氯甲烷有可能會提取出脂類物質而影響檢測效果，所以選取乙腈為提取溶劑。由于磺胺類一般為弱堿性，結果發現，在乙腈中添加1%乙酸比純乙腈提取效果好（圖1）。

2.1.3 色譜柱的選擇

本試驗采用安捷倫ZORNAX BONUS-RP C18色譜柱，對比100 mm×2.1 mm（1.8 μm）柱和50 mm×2.1 mm（1.8 μm）柱后，結果發現50 mm柱的分離度不夠，出峰時間過快，造成多種藥物同時出峰，而采用100 mm柱分離效果好，而且峰型對稱尖銳。因此，本試驗采用ZORNAX BONUS-RP C18 100 mm×2.1 mm（1.8 μm）色譜柱。

2.1.4 流動相的選擇

比較以乙腈-0.1%甲酸水、甲醇-0.1%甲酸水作為流動相對7種磺胺分離的影響，結果表明，以乙腈-0.1%甲酸水為流動相時，各藥物有較好的分離，而且峰形和靈敏度也有所提高（圖2），因此選擇乙腈-0.1%甲酸水作為流動相。

2.2 基質影響、線性范圍及檢出限分析

2.2.1 基質影響

液相色譜-質譜/質譜法中基本都存在基質效應，且大多都是共提物基質成分與目標成分的電離競爭引起的降低目標離子強度，從而對檢測定量定性造成較大的影響。由于蔬菜種類多，批量樣品都找對應蔬菜基質校準定量，則工作量大而不符合快速、簡單、實用性高的要求。分別采用生菜、豆角、蘿卜、茄子代表葉菜、豆類、根莖類、茄果類蔬菜基質，考察純溶劑標樣與基質匹配標樣的差異，分別配置純溶劑標樣與基質匹配標樣的相同濃度標樣上機對比，以純標峰面積為100%，各種蔬菜基質標與純標的對比結果見圖3所示，各種蔬菜的基質影響不大，因此，本實驗采用純標液外標法定量。

2.2.2 線性關系和檢出限

在質量濃度為0.05～0.5 mg/L范圍內，純溶劑標準溶液經UPLC-MS/MS測定后，以標準品峰面積為縱坐標，以待測物質量濃度（mg/L）為橫坐標，得到各藥物的工作曲線（表3），理論定量限按照公式進行計算。

檢出限=■。

其中，C：標液濃度為0.05 mg/L；V：定容體積為20 mL；F：濃縮倍數為4；m：稱樣量為5.00 g；S/N：標液濃度0.05 mg/L的信噪比。得到各種農藥的最低檢出限結果見表3。

2.3 方法的回收率和精密度分析

由于蔬菜種類繁多，本實驗只選取了生菜、豆角、蘿卜、茄子代表葉菜、豆類、根莖類、茄果類蔬菜進行回收率和精密度的驗證實驗。選用不含各種待測組分的生菜、豆角、蘿卜、茄子樣品進行3個濃度水平的添加回收實驗，每個處理平行重復6次，按照1.2.2的條件進行處理測定。7種磺胺在不同蔬菜中的添加量、平均回收率和精密度結果見表4，純溶劑標準溶液色譜見圖4。

3 結論

本研究建立了蔬菜樣品中7種磺胺類藥物殘留同時測定的篩選方法，純溶劑標外標法定量，定量準確，總體回收率為67.5%～94.1%，相對偏差均小于5.3%，最低檢出限為0.000 4～0.000 6 mg/kg，本方法操作快速、簡單、實用性高，能滿足大批量蔬菜樣品的檢測，易于在蔬菜磺胺類藥物殘留檢測中推廣應用。

參考文獻

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