栽培種花生EST—SSR引物的開發及應用

吳曉

摘 要：由于對農作物的要求不斷提高，栽培種花生在產量和應用開發上實現了有效的實施。河南省內鄉縣農業技術推廣中心在本文中利用相關材料，通過對EST-SSR引物和應用效果進行分析，從而實現了最佳的引物效果，實現了野生種子的有效性和擴展效果。

關鍵詞：花生；EST-SSR；開發及應用

中圖分類號：S565.2 文獻標識碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20160333102

花生作為一種豆類食品，在栽培過程中，它屬于野生種子。這種野生性的花生能抵抗一些病蟲害，還能形成高質量的油類。所以，為了保證花生在栽培期間形成良好的資源基礎，就要利用SSR引物來實現完善性的開發和利用。

1 EST-SSR的概述

EST-SSR是一種新型的分子標記方式，在種植的多種作物上都能建立良好的標記效果，也能對物種進行有效的遺傳分析。由于EST數據的不斷增長，SSR成為主要的引物來源，所以EST-SSR引物開發成為花生作物主要的研究途徑。從EST中體現的EST-SSR引物改變了傳統的SSR引物開發形式，對一些基因建構和DNA復雜文庫進行了優化，而且在表達基因上也得到間接和直接的聯系，在遺傳學領域發展中得到有效的利用。EST-SSR具有3種特殊優勢：實現的信息量比較大，如果EST在某一處的標志發生連鎖效應，EST就會與控制形狀的相關基因有聯系；通用性也比較好，由于EST是轉錄區的來源方式，具有較高的保守型，所以在親緣物種之間具有明顯的利用價值；不僅開發的成本比較低，開發形式也比較簡單。在花生標記和研發上具有重要作用，不僅對分子標記實現了開發性和穩定性，對花生種子的栽培也具有重要意義[1]。

2 研究材料與方法

選擇花生抗青枯病高油品系列，根據每個葉子和根的EST數量，對栽培品種的EST-SSR進行檢測。要提取花生基因組的DNA，利用CTAB-酚方法，還要保證一定的測試濃度和純度、DNA的質量等。實現EST的序列拼接方式，利用聚類的相關軟件，將所有的EST拼接起來，并保證一定的拼接標準。再使用SSR位點進行搜索，在拼接后產生的序列方式上，利用一定的時間，搜索出相關的應用材料。還要對SSR引物進行設計，根據兩端的保守區域，利用Primer3軟件對引物進行設計，在引物溫度的選擇上、長度范圍都要經過嚴謹篩選。實現PCR的擴增，根據PCR中每個反應體系，對SSR的正反向建立DNA模板，利用電泳方式在顯微鏡下進行分析。

3 對結果進行分析

根據實驗的研究表明，栽培花生種子在DNA下的提取可以看出，所有的品種葉子都得到了較高的DNA質量，而且在紫外分光上的檢測以及電泳上的檢測，所有得到的DNA都比較完整，沒有發生講解現象[2]。在序列拼接期間，為了減少EST序列的冗余，就要對某個特定的基因實現共有序列方式。在EST-SSR中產生的分布頻率和特點也不同，花生栽培中的種類比較豐富，在各個材料中，核苷酸出現的頻率比較高，二核苷酸出現的重復類型比較多。在已經搜索出的栽培花生種子EST-SSR中，出現的頻率也不同。在EST-SSR引物中產生的設計和檢測的多態性中，利用Primer3可以看出，由于SSR位點出現的序列比較短、結構比較復雜，不能進行引物的設計。所以利用EST-SSR引物對花生的栽培品種進行PCR擴增，然后根據清晰的條帶檢測出種子的多樣性，從而檢測出引物的等位基因。

4 對結論進行討論

根據實驗和結果的分析可以得到，花生SSR引物在開發期間，主要對基因組SSR引物的開發、引物的開發轉移等。利用EST-SSR方法，在花生種子栽培中檢測出EST的位點，然后對作物中EST產生的SSR進行表示[3]。在EST-SSR中，大多數的植物都是以三核苷酸和二核苷酸作為主要的重復類型的，由于植物葉子的不同性，花生中的栽培品種以EST-SSR中的三核苷酸作為主要的重復類型。由于葉子中含有豐富的重復類型，所以在四、五、六核苷酸重復類型中不會經常出現。該實驗也使用了擴增性，由于擴充區的復雜結構，引物在進行擴增期間，就會出現一些條帶的顯示，從而為栽培花生中的基因作為重要的引物序為。

5 結 論

在花生栽培過程中，利用EST-SSR引物進行開發和標記是可行的，不僅實現了野生種子的有效性和擴展效果，對花生中產生的多樣性資源也產生重要意義。EST-SSR這種表達基因方式不僅能夠對花生的分子類型進行標記，還能在遺傳性方面實現多種方式的應用價值。

參考文獻

[1] 江建華，倪皖莉，肖美華.花生SSR標記的開發及其應用現狀和前景[J].花生學報，2012（2）：39-45.

[2] 唐梅，陳玉寧，任小平等.源于栽培種花生的EST-SSR引物對野生花生擴增的多態性[J].作物學報，2012（7）：1221-1231.

[3] 肖洋，廖伯壽，晏立英等.栽培種花生EST-SSR引物的開發及應用[J].湖北農業科學，2010（11）：2625-2628.