番茄組織培養(yǎng)

雷蕾

[摘 要]針對組織培養(yǎng)中污染這個首要問題及番茄種子的特點對其進行消毒處理，采用次氯酸鈉（商品名為安替福民）對兩個供試品種即五彩番茄和抗寒番茄進行消毒。兩個品種各進行四次處理。每次處理有一組變量，處理結(jié)束后取出芽多污染少的變量作為下次處理的必要條件。通過不同的消毒結(jié)果，分析出最佳的番茄消毒措施。

[關(guān)鍵詞]番茄；種子；次氯酸鈉；消毒

植物組織培養(yǎng)是20世紀初開始，以植物生物學為基礎(chǔ)發(fā)展起來的一項植物繁殖技術(shù)。番茄組織培養(yǎng)技術(shù)也已用于遺傳進化，因而獲得無菌苗是番茄組培的關(guān)鍵。污染是組織培養(yǎng)過程中首先遇到的問題，且難以控制，不能把污染降低到可以接受的范圍，也就意味著這項工藝不能進行下去。因此，控制污染成了組織培養(yǎng)中的首要技術(shù)。對番茄進行組織培養(yǎng)，首先應該得到無菌苗。那么第一步就要對番茄種子進行消毒處理。番茄種子扁平，灰黃色帶絨毛。所以根據(jù)番茄種子的特點及導師的指導和兩種消毒液的特點：次氯酸鈉對種子無毒害而升汞抑制IAA對細胞的影響和幼苗的生長，從而大大降低種子的活力。

一、材料與方法

1. 供試材料

試驗選用兩個品種，即抗寒番茄、五彩番茄。

2. 試驗儀器與藥品

高壓蒸汽滅菌鍋，烘箱，光照培養(yǎng)箱，鑷子，小燒杯，玻璃棒，量筒，超凈工作臺，酒精燈，精密試紙，牛皮紙，標簽筆，1N NaOH，1N HCl，次氯酸鈉原液，95%醫(yī)用酒精，蒸餾水等。

3.試驗方法

（1）培養(yǎng)基。以1/2MS為基本培養(yǎng)基，不加任何其它激素。1/2MS培養(yǎng)基共1000ml/次。調(diào)pH值為5.8，每瓶分裝約25ml，共40瓶，并在121℃和1個大氣壓下滅菌15分鐘。

（2）接種前的準備工作。

①配制培養(yǎng)基。稱取瓊脂10g，蔗糖30g，蔗糖放入少許蒸餾水溶解，用量筒量取MSA100ml， MSB 10ml ，鐵鹽10ml，有機成份10ml。混勻備用。將瓊脂放入電磁爐中加水溶解，徹底溶解后加入蔗糖和母液再加入蒸餾水定容到1000ml，同時不斷攪拌使混合均勻一般要求pH5.8-6.0。過酸或過堿用0.1N NaOH或0.1N HCl調(diào)節(jié)。

②儀器滅菌。將小燒杯，量筒，鑷子，玻璃棒等用牛皮紙包好在1260C下進行高壓滅菌30min.待用。

（3）種子消毒。選取兩個番茄品種，即抗寒番茄、五彩番茄。

對抗寒番茄和五彩番茄進行以下四組處理：

第一組：

處理Ⅰ：蒸餾水浸種10h（加入百菌清），在超凈工作臺上用安替福民液1：7浸7min（加入洗潔精），無菌水洗6次。

處理Ⅱ：蒸餾水浸種12h（加入百菌清），在超凈工作臺上用安替福民液1：7浸7min（加入洗潔精），無菌水洗6次。

處理Ⅲ：蒸餾水浸種14h（加入百菌清），在超凈工作臺上用安替福民液1：7浸7min（加入洗潔精），無菌水洗6次。

處理Ⅳ：蒸餾水浸種16h（加入百菌清），在超凈工作臺上用安替福民液1：7浸7min（加入洗潔精），無菌水洗6次。

第二組：

處理Ⅰ：蒸餾水浸種抗寒番茄12h；五彩番茄14h（加入百菌清），在超凈工作臺上用70%酒精浸0.5min，無菌水沖洗1次，用安替福民液1：7浸7min（加入洗潔精），無菌水洗6次。

處理Ⅱ：蒸餾水浸種抗寒番茄12h五彩番茄14h；（加入百菌清），在超凈工作臺上用70%酒精浸1min，無菌水沖洗1次，用安替福民液1：7浸7min（加入洗潔精），無菌水洗6次。

處理Ⅲ：蒸餾水浸種抗寒番茄12h；五彩番茄14h（加入百菌清），在超凈工作臺上用70%酒精浸1.5min，無菌水沖洗1次，用安替福民液1：7浸7min（加入洗潔精），無菌水洗6次。

處理Ⅳ：蒸餾水浸種抗寒番茄12h；五彩番茄14h（加入百菌清），在超凈工作臺上用70%酒精浸2min，無菌水沖洗1次，用安替福民液1：7浸7min（加入洗潔精），無菌水洗6次。

第三組：

處理Ⅰ：蒸餾水浸種抗寒番茄12h；五彩番茄14h（加入百菌清），在超凈工作臺上用70%酒精浸泡抗寒番茄1min；五彩番茄1.5min，無菌水沖洗1次，用安替福民液1：7浸5min（加入洗潔精），無菌水洗6次。

處理Ⅱ：蒸餾水浸種抗寒番茄12h；五彩番茄14 h（加入百菌清），在超凈工作臺上用70%酒精浸泡抗寒番茄1min；五彩番茄1.5min，無菌水沖洗1次，用安替福民液1：7浸7min（加入洗潔精），無菌水洗6次。

處理Ⅲ：蒸餾水浸種抗寒番茄12h；五彩番茄14h（加入百菌清），在超凈工作臺上用70%酒精浸泡抗寒番茄1min；五彩番茄1.5min，無菌水沖洗1次，用安替福民液1：7浸9min（加入洗潔精），無菌水洗6次

處理Ⅳ：蒸餾水浸種抗寒番茄12h；五彩番茄14h（加入百菌清），在超凈工作臺上用70%酒精浸泡抗寒番茄1min；五彩番茄1.5min，無菌水沖洗1次，用安替福民液1：7浸11min（加入洗潔精），無菌水洗6次

第四組：

處理Ⅰ：蒸餾水浸種抗寒番茄12h；五彩番茄14h（加入百菌清），在超凈工作臺上用70%酒精浸泡抗寒番茄1min；五彩番茄1.5min，無菌水沖洗1次，用安替福民液1：5浸泡抗寒番茄5min；五彩番茄9min（加入洗潔精），無菌水洗6次。

處理Ⅱ：蒸餾水浸種抗寒番茄12h；五彩番茄14h（加入百菌清），在超凈工作臺上用70%酒精浸泡抗寒番茄1min；五彩番茄1.5min，無菌水沖洗1次，用安替福民液1：6浸泡抗寒番茄5min；五彩番茄9min（加入洗潔精），無菌水洗6次。

處理Ⅲ：蒸餾水浸種抗寒番茄12h；五彩番茄14h（加入百菌清），在超凈工作臺上用70%酒精浸泡抗寒番茄1min；五彩番茄1.5min，無菌水沖洗1次，用安替福民液1：7浸泡抗寒番茄5min；五彩番茄9min（加入洗潔精），無菌水洗6次

處理Ⅳ：蒸餾水浸種抗寒番茄12h；五彩番茄14h（加入百菌清），在超凈工作臺上用70%酒精浸泡抗寒番茄1min；五彩番茄1.5min，無菌水沖洗1次，用安替福民液原液浸泡抗寒番茄5min；五彩番茄9min（加入洗潔精），無菌水洗6次以上每組四個處理，每個處理接種5瓶，每瓶接10粒種子。

（4）培養(yǎng)條件。接種后將瓶置于光照培養(yǎng)箱中，16h光照/8h黑暗，溫度控制在250C±20C，培養(yǎng)9天。

二、結(jié)果分析

抗寒番茄浸泡12小時，70%酒精消毒1分鐘，無菌水沖洗1次，再用安替福民原液消毒5分鐘，無菌水沖洗6次，消毒效果最好。

五彩番茄浸泡14小時，70%酒精消毒1.5分鐘，無菌水沖洗1次，安替福民原液消毒9分鐘，無菌水沖洗6次，消毒效果最好。

三、結(jié)語

在當今快速高效發(fā)展的社會中，各個領(lǐng)域都在尋求發(fā)展的快車道，那么植物組織培養(yǎng)也早已成為生命科學領(lǐng)域不可忽視的一部分。通過對不同品種番茄進行種子消毒培養(yǎng)，從而得到番茄種子對于各種消毒措施發(fā)芽的影響，為進一步發(fā)展番茄的無菌種植提供了實驗依據(jù)。

參考文獻：

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