諾氟沙星膠囊微生物限度檢查方法研究

周永海

【關(guān)鍵詞】 薄膜過濾;限度檢查;諾氟沙星膠囊;陽性對照;中和劑

諾氟沙星，又稱為氟哌酸、淋克小星、淋沙星等。諾氟沙星由于其廣譜抗菌性質(zhì)，對需氧類細(xì)菌具有很好的抗菌性，但同時(shí)其弊端也很明顯諾氟沙星它對真菌無抑菌作用[1]。因此，在臨床上諾佛沙星多用來治療因敏感菌所導(dǎo)致的疾病，比如腸炎、前列腺炎等的感染。我院開展此項(xiàng)研究，報(bào)道如下：

1儀器與材料

1.1儀器? ?培養(yǎng)箱;生物類安全柜;集菌儀;電子天平;電熱恒溫培養(yǎng)箱-隔水式 。

1.2樣品與試劑? ?本次實(shí)驗(yàn)采用的樣品為諾氟沙星膠囊;干粉培養(yǎng)基： 氯化鈉蛋白胨緩沖液pH值7.0、蛋白胨水溶液（濃度0.1%）、胰酪大豆胨培養(yǎng)基兩種分別為液體及瓊脂、沙氏葡萄糖培養(yǎng)基分別為液體及瓊脂、麥康凱培養(yǎng)基分別為液體及瓊脂;分析純：氯化鈉、硫酸鎂[2]

2試驗(yàn)方法

首先將枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌置于30℃ ～35℃的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，將其培養(yǎng) 18～24 h后靜置，以備試驗(yàn)時(shí)使用。在進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，先將上述培養(yǎng)物各取 1 mL，再使用 0.9% 無菌氯化鈉溶液進(jìn)行稀釋，稀釋保持在10倍稀釋液至 10-6 或10-3的菌懸液。再將白色念珠菌在 20℃ ～25℃沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中培養(yǎng) 2～3 d ，實(shí)驗(yàn)開始取該培養(yǎng)基培養(yǎng)物1mL，同樣使用0.9%的無菌氯化鈉溶液保持10倍稀釋至 10-4 ～10-2的菌懸液。然后在20℃ ～25℃的沙氏葡萄糖瓊脂斜面上培養(yǎng)黑曲霉，5-7小時(shí)后取出該培養(yǎng)物。隨之加入5ml的無菌氯化鈉溶液，將黑曲霉進(jìn)行清洗。最后將清洗的孢子懸液取出1 ml，并用濃度為0.05 %的無菌氯化鈉溶液進(jìn)行10倍稀釋，直至稀釋到10-4 ～10-2的孢子懸液[3]。

2.1微生物計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)

2.1.1 需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)

試驗(yàn)組：取1ml 1∶10的供試液，使用薄膜過濾法，使用800 ml無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液（pH7.0）進(jìn)行沖洗，分8次沖洗，每次取100mL進(jìn)行沖洗;沖洗之后濾干，隨之將濾膜菌進(jìn)行轉(zhuǎn)移，并將濾膜菌正面朝上貼在胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板上。上述操作后，接著將其置于培養(yǎng)箱中，進(jìn)行約為72小時(shí)的培養(yǎng)，并每天觀察實(shí)驗(yàn)變化結(jié)果[4]。

其中實(shí)驗(yàn)需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)適用性試驗(yàn)結(jié)果見表1。

2.2.1霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)

試驗(yàn)組： 取9.9mL 的1：10供試液，在供試液中加入0.1 ml上述配制的試驗(yàn)菌液，并混合均勻。取混合均勻的供試液1ml注入平皿，隨之將其倒入沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中。然后將經(jīng)過培養(yǎng)基培養(yǎng)的供試液置于20℃ ～25℃的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)約24到120 小時(shí)之間，并做好每日實(shí)驗(yàn)結(jié)果的記錄。

供試品對照組：將試驗(yàn)組的操作進(jìn)行重復(fù)操作，隨之進(jìn)行培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

菌液對照組： 將供試品對照組和試驗(yàn)組中配備的菌液取適量，隨后用稀釋劑進(jìn)行稀釋，并進(jìn)行培養(yǎng)計(jì)數(shù)。霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)適用性試驗(yàn)結(jié)果如下：菌液對照組中的白色念珠菌有80菌、試驗(yàn)組有白色念珠菌75菌、供試品對照組的白色念珠菌有0菌，回收比值為1.0;菌液對照組中的黑曲霉有79菌、試驗(yàn)組中有黑曲霉69菌、供試品對照組有黑曲霉0菌，回收比值為：1.1。

3.討論

根據(jù)臨床試驗(yàn)顯示，諾氟沙星膠囊抑菌性較強(qiáng)，若單獨(dú)采取薄膜過濾法，會(huì)導(dǎo)致最終試驗(yàn)結(jié)果的回收效果不理想。為了研究微生物限度檢查方法的成效，我院對諾氟沙星膠囊進(jìn)行生物限度檢查進(jìn)行研究。

本次研究結(jié)果顯示：所實(shí)驗(yàn)的各試驗(yàn)菌其回收比值需要符合藥典規(guī)定，而大腸埃希菌則需要在控制菌檢查的陽性對照試驗(yàn)檢中被檢出。諾氟沙星膠囊的抗菌活性則由中和劑硫酸鎂來去除。各項(xiàng)試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，試驗(yàn)方法可用于諾氟沙星膠囊的微生物限度檢查。

因此，對諾氟沙星膠囊進(jìn)行微生物限度檢查，該方法價(jià)值較高，可大力推廣。

【參考文獻(xiàn)】

[1]曹寒梅，蔡虎，楊曉莉，常春，傅強(qiáng).氧氟沙星膠囊微生物限度檢查方法的建立[J].中國藥業(yè)，2019，28（16）：35-38.

[2]衛(wèi)延明，閔朕，陳子龍，杜思迪，秦亞紅.倍芪腹瀉貼微生物限度檢查方法的適用性試驗(yàn)[J].安徽醫(yī)藥，2018，22（10）：1877-1880.

[3]楊小春，謝家軍，侯澤峰.鹽酸左氧氟沙星膠囊微生物限度檢查方法的建立[J].實(shí)用醫(yī)技雜志，2015，22（04）：438-440.

[4]孫偉，劉文杰，崔穎，牛振東，高春.β-環(huán)糊精在喹諾酮類抗生素藥品微生物限度檢查方法建立中的應(yīng)用[J].藥物分析雜志，2013，33（01）：18-21+29.