不同脫鈣條件對骨組織免疫組織化學染色抗原性的影響淺析

朱淑玲++武彤彤++吳惠如等

【摘要】 目的 分析不同脫鈣條件對骨組織免疫組織化學（免疫組化）染色抗原性的影響。方法 用8%硝酸分別于微波、光波及光波+微波組合Ⅰ、光波+微波組合Ⅱ的條件下對骨組織進行脫鈣， 并將室溫（20℃）條件下脫鈣的骨組織作為對照組， 運用鏈霉菌素卵白素-生物素（LSAB）免疫組化染色技術， 并對其染色效果進行分析比較。結果 微波、光波、光波+微波組合Ⅰ及光波+微波組合Ⅱ的脫鈣時間顯著低于對照組， 且免疫組化染色效果顯著優于對照組（P<0.05）；光波+微波組合的免疫組化染色效果顯著優于微波、光波（P<0.05）；但微波與光波之間、光波+微波組合Ⅰ與光波+微波組合Ⅱ之間的免疫組化染色效果比較， 差異無統計學意義（P>0.05）。結論 光波+微波組合脫鈣時間要明顯短于微波、光波及室溫脫鈣， 且具有良好的免疫組化染色效果。

【關鍵詞】 脫鈣條件；骨組織；免疫組織化學染色；抗原性

【Abstract】 Objective To analyze influence by different decalcification conditions on bone tissue antigenicity in immunohistochemical staining. Methods Decalcification was made through 8% nitric acid under microwave， light wave， light wave + microwave Ⅰ and light wave + microwave Ⅱ in bone tissue. Decalcification under room temperature （20℃） was taken as control group. Labelled streptavidin biotin method （LSAB） immunohistochemical staining was applied to analyze and compare stain effects. Results Decalcification time under microwave， light wave， light wave + microwave Ⅰ and light wave + microwave Ⅱ were all shorter than control group， and their immunohistochemical staining effects were all better than control group （P<0.05）. Light wave + microwave had better immunohistochemical staining effects than single microwave or light wave （P<0.05）. There was no statistically significant difference of immunohistochemical staining effects across microwave， light wave， light wave + microwave Ⅰ and light wave + microwave Ⅱ （P>0.05）. Conclusion Light wave + microwave provides shorter decalcification time than microwave， light wave and room temperature， and it contains good immunohistochemical staining effect.

【Key words】 Decalcification condition； Bone tissue； Immunohistochemical staining； Antigenicity

目前， 免疫組化染色技術是臨床病理鑒別及診斷的重要手段， 骨組織由于含有豐富的鈣鹽， 因此其免疫組織化學染色自然與常規石蠟切片有所區別， 通常需要先去除鈣鹽后才可制成比較薄的切片， 然后再進行常規脫水、透明處理等操作[1]。本研究旨在分析探討不同脫鈣條件對骨組織免疫組化染色抗原性的影響， 現報告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 選取2012年4月～2015年8月骨外科送檢的人骨組織， 脫鈣液為硝酸10 ml+蒸餾水190 ml制成的硝酸液。Panasonic NN-DF382M光波/微波爐1臺， 微波額定輸入功率為1400 W， 光波額定輸入功率為1050 W， 微波額定輸出功率為900 W， 額定輸出頻率為2450 MHz， 輸出功能共分為微波、光波及光波+微波組合Ⅰ、光波+微波組合Ⅱ。微波輸出功率為5個調節檔， 光波輸出功率為單一光波管發光， 光波+微波組合Ⅰ為微波輸出時間的30%+光波輸出時間的70%， 光波+微波組合Ⅱ為微波輸出時間的55%+光波輸出時間的45%。

1. 2 方法 將1.0 cm×0.5 cm×0.3 cm的骨組織分別用8%硝酸分別于微波、光波及光波+微波組合Ⅰ、光波+微波組合Ⅱ的條件下進行脫鈣。將脫鈣后的骨組織常規制成切片， 經復合酶消化石蠟切片后， 運用LSAB免疫組化進行免疫酶細胞化學染色。

1. 3 統計學方法 采用SPSS19.0統計學軟件處理數據。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

微波、光波、光波+微波組合Ⅰ及光波+微波組合Ⅱ的脫鈣時間顯著低于對照組， 且免疫組化染色效果顯著優于對照組（P<0.05）；光波+微波組合的免疫組化染色效果顯著優于微波、光波（P<0.05）；但微波與光波之間、光波+微波組合Ⅰ與光波+微波組合Ⅱ之間的免疫組化染色效果比較差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

3 討論

骨組織含有大量的鈣， 質地堅硬， 一般不可直接進行制片染色， 需要經過脫鈣處理的特殊工序。對病理活檢蘇木精-伊紅染色（HE染色）的效果不會構成比較大的影響， 但是在很大程度上會影響到免疫組化染色抗原性[2]。近些年， 微波輻射技術逐步深入應用到骨組織脫鈣、免疫組化染色、抗原修復等， 且效果突出， 特別是EDTA快速脫鈣、微波-低溫硝酸等技術對最大化地保留脫鈣組織的抗原性做出了重要的貢獻[3， 4]， 而光波+微波脫鈣到底對免疫組化染色抗原性的實際影響在文獻報道中鮮見。

本組研究中光波-微波組合Ⅱ脫鈣時間在集中脫鈣方法中是最短的， 而室溫下的骨組織與切片呈現出淡黃色， 脫鈣時間最長。就免疫組化染色效果來說， 室溫條件下的脫鈣組織最差， 微波、光波條件下的脫鈣組織相對較好， 光波+微波組合Ⅰ、光波+微波組合Ⅱ條件下的脫鈣組織最好， 主要是因為微波與光波的雙重作用促使了骨組織的鈣鹽的反應速度進一步加快， 使得過去的常規脫鈣方法少至數小時多則幾天的反應時間大大縮短以致在短時間內便可完成， 因而最大化地保留了抗原性， 提高了免疫組化染色的效果。

在光波+微波-硝酸脫鈣的應用過程中應注意如下幾方面：①微波與光波的雙重作用會使得脫鈣液溫度在短時間內迅速升高， 因此結合預冷降溫措施可很好地減輕溫度對抗原性的影響[5]。②不宜使用金屬容器盛裝脫鈣液， 且要保證充足的脫鈣液量， 通常情況上要達到標本的20～30倍左右， 并要更換1～2次新液。③骨組織厚薄適宜， 5 mm左右為最宜， 以防脫鈣時間過長而損及組織形態結構、影響染色效果。

綜上所述， 8%硝酸光波+微波組合脫鈣時間要明顯短于微波、光波及室溫脫鈣， 且具有良好的免疫組化染色效果。

參考文獻

[1]楊傳紅， 賴晃文， 唐云， 等.微波快速脫鈣及其脫鈣液的選擇. 臨床與實驗病理學雜志， 2010， 12（4）：357-358.

[2]劉海芳. HE染色切片褪色后免疫組化染色方法研究.中國現代醫生， 2011， 49（17）：81-82.

[3]熊正文， 李宏偉， 黃勇， 等.骨組織脫鈣技術及在免疫組化染色中的應用研究.中國比較醫學雜志， 2011， 14（3）：175-178.

[4]熊正文， 朱光君， 黃勇， 等.骨組織的脫鈣及其免疫組織化學染色技術探討.中國組織化學與細胞化學雜志， 2010， 11（3）： 347-349.

[5]張緒斌， 熊正文， 張華東.骨組織脫鈣技術及其應用.醫學理論與實踐， 2011， 24（11）：1264-1267.

[收稿日期：2015-12-24]