沙利度胺對潰瘍性結腸炎療效的實驗研究

夏婷婷+徐洪雨

【摘要】 目的 通過檢測大鼠血清中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的濃度， 觀察沙利度胺治療由2， 4， 6-三硝基苯磺酸（TNBS）誘導的潰瘍性結腸炎（UC）的療效。方法 21只TNBS結腸炎動物模型， 隨機分為模型組、柳氮磺吡啶組及沙利度胺組， 每組7只。模型組不給予干預、沙利度胺組給予沙利度胺200 mg/（kg·d）、柳氮磺吡啶組給予柳氮磺吡啶100 mg/（kg·d）， 測定大鼠血清中TNF-a的濃度， 探討沙利度胺對UC的療效。結果 沙利度胺組大鼠腹瀉次數減少， 部分有隱血陽性， 一直未出現肉眼血便。沙利度胺組、柳氮磺吡啶組、模型組大鼠TNF-a的濃度分別為（19.51±8.06）、（40.88±14.24）、（115.32±9.60）pg/ml， 沙利度胺組降低血清TNF-α濃度的幅度高于柳氮磺吡啶組， 差異有統計學意義（P<0.01）。結論 沙利度胺治療UC有效， 能顯著減輕結腸炎癥， 降低TNF-α濃度強于柳氮磺吡啶。

【關鍵詞】 沙利度胺；柳氮磺吡啶；2， 4， 6-三硝基苯磺酸；潰瘍性結腸炎

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.14.211

Experimental research of curative effect by thalidomide for ulcerative colitis XIA Ting-ting， XU Hong-yu. Department of Gastroenterology， Hulun Buir City Peoples Hospital， Hulun Buir 021000， China

【Abstract】 Objective To observe curative effect by thalidomide for 2，4，6-trinitro-benzene-sulfonic acid （TNBS）-induced ulcerative colitis （UC） by detecting serum tumor necrosis factor-α （TNF-α） concentration in rats. Methods TNBS colitis animal model was made， and 21 rats were randomly divided into model group， sulfasalazine group and thalidomide group， with 7 rats in each group. No intervention was taken in model group. Thalidomide group received thalidomide by 200 mg/（kg·d）， and sulfasalazine group received sulfasalazine by 100 mg/（kg·d）. Detection was made on serum TNF-α concentration to investigate curative effect by thalidomide for UC. Results Thalidomide group had reduced diarrhea times， and some rats had positive occult blood， without any visible bloody stools. TNF-α concentrations in thalidomide group， sulfasalazine group and model group were respectively （19.51±8.06）， （40.88±14.24）， （115.32±9.60） pg/ml. Thalidomide group had higher reducing degree of serum TNF-α concentration than sulfasalazine group， and the difference had statistical significance （P<0.01）. Conclusion Thalidomide is effective in treating UC， and it can remarkably relieve colitis. It shows better effect in reducing TNF-α concentration than sulfasalazine.

【Key words】 Thalidomide； Sulfasalazine； 2，4，6-trinitro-benzene-sulfonic acid； Ulcerative colitis

UC是一種病因不明的直腸和結腸慢性非特異性炎癥性疾病。其病因和發病機制尚不清楚， 目前大多學者認為免疫異常是其發病的主要原因， 受到國內外學者們的重視， 已經成為臨床研究的重點之一， 隨著對細胞因子研究的進展， 人們發現細胞因子TNF-α與UC的發病密切相關。沙利度胺作為一種免疫調節劑， 目前認為是腫瘤壞死因子TNF-α的特異性調節藥物， 所以沙利度胺可通過抑制這種因子的作用而治療UC。本研究通過研究治療前后UC大鼠的血清中TNF-α的表達情況， 進而探討沙利度胺治療UC的療效， 及腫瘤壞死因子在發病機制中的作用及臨床意義， 現報告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料

1. 1. 1 實驗動物清潔及健康成年雄Wistar大鼠， 平均體質量（250±20）g， 由哈爾濱醫科大學動物實驗中心提供及飼養。

1. 1. 2 實驗試劑TNBS購自美國Sigma 公司；沙利度胺購自常州制藥廠有限公司；柳氮磺吡啶購自上海信誼嘉華藥業有限公司；大鼠TNF-αELISA 試劑盒購自欣博盛生物科技有限公司。

1. 1. 3 實驗儀器保溫箱（上海儀器總廠）；濕盒及通風柜， 光學顯微鏡， 低溫冰箱：臺式離心機， 450-酶標儀。

1. 2 實驗方法

1. 2. 1 造模及分組 清潔及健康成年雄性Wistar大鼠21只， 隨機分為模型組、柳氮磺吡啶組及沙利度胺組， 每組7只。模型組不給予干預、沙利度胺組給予沙利度胺200 mg/（kg·d）、柳氮磺吡啶組給予柳氮磺吡啶100 mg/（kg·d）。建立TNBS結腸炎動物模型[1]：三組大鼠實驗前禁食（不禁水） 24 h， 實驗時腹腔注射10%的水合氯醛（0.3 ml/100 g體質量） 使大鼠麻醉， 而后將一直徑2.0 mm、長約12 cm 的硅膠管用石蠟油潤滑， 由肛門插入大鼠體內約8 cm， 緩慢注入含100 mg/kg TNBS 的0.25 ml無水乙醇溶液， 提起大鼠尾部， 倒置10 min， 使造模劑充分滲入大鼠腸腔內。造模后使動物保持平躺， 自然清醒， 自由飲食。

1. 2. 2 檢測方法 用ELISA法記錄三組大鼠血清中TNF-α含量進行比較。

1. 3 統計學方法 采用SPSS18.0統計學軟件對數據進行統計分析。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2. 1 大鼠一般狀況 造模后第1天即出現肉眼血便， 模型組一直有血便及腹瀉， 食欲不振、 毛色粗糙、 體質量開始下降。沙利度胺組大鼠腹瀉次數減少， 部分有隱血陽性， 一直未出現肉眼血便， 食欲恢復、 毛色光滑、 體質量逐漸增加。實驗后， 沙利度胺組與柳氮磺吡啶組大鼠體質量優于實驗前（P<0.01）；柳氮磺吡啶組與沙利度胺組大鼠體質量比較， 差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

表1 三組大鼠實驗前后體質量比較（ x-±s， g）

組別 例數 實驗前 實驗后

模型組 7 249.8±0.5 232.8±0.4

沙利度胺組 7 222.9±0.3 253.7±0.6a

柳氮磺吡啶組 7 229.7±0.4 249.9±0.4ab

注：與實驗前比較， aP<0.01；與沙利度胺組比較， bP>0.05

2. 2 組織病理改變 模型組鏡下可見腺管排列紊亂或消失， 黏膜及黏膜下層血管高度擴張充血， 大量炎細胞浸潤， 浸潤黏膜下或固有層， 部分浸潤全層， 以中性粒細胞、淋巴細胞為主。沙利度胺組鏡下黏膜及黏膜淺層僅有少量中性粒細胞、淋巴細胞浸潤， 組織損傷較輕， 炎癥程度較模型組明顯減輕。柳氮磺吡啶組可見黏膜消失或部分消失， 腺體排列紊亂， 炎性細胞浸潤， 但較模型組有所減輕。

2. 3 血清TNF-α在各組表達 沙利度胺組、柳氮磺吡啶組、模型組TNF-a的濃度分別為（19.51±8.06）、（40.88±14.24）、（115.32±9.60）pg/ml， 沙利度胺組降低血清TNF-α濃度的幅度高于柳氮磺吡啶組， 差異有統計學意義（P<0.01）。見表2。

表2 血清中TNF-α在各組的表達比較（ x-±s， pg/ml）

組別 例數 TNF-α

模型組 7 115.32±9.60

沙利度胺組 7 19.51±8.06a

柳氮磺吡啶組 7 40.88±14.24ab

注：與模型組比較， aP<0.01；與沙利度胺組比較， bP<0.01

3 討論

沙利度胺最初作為一種鎮靜劑和止吐劑用于臨床， 后來因發現其有較強的致胎兒海豹樣畸形作用而被禁止使用， 直至1997 年Wettstein 等[2]報道了1例皮質類固醇治療無效的克羅恩病患者經沙利度胺治療獲得改善后受到重視， 隨后出現沙利度胺治療UC的個案報導及更多的實驗研究。

有相關學者[3]通過對內鏡下活動期UC患者的腸黏膜TNF-α的分泌量研究發現， 活動期UC患者腸黏膜TNF-α數量顯著高于非活動期， TNF-α與炎癥程度密切相關。鄒莉波等[4]檢測TNBS結腸炎模型大鼠血清TNF-α含量時， 發現均顯著高于正常對照組， 且與疾病嚴重程度成正相關。近年來已有研究用ELISA法檢測UC患者的結腸TNF-α的釋放程度， 發現活動期UC患者平均TNF-α明顯高于對照組（非活動期患者）。其中應用5-氨基水楊酸（5-ASA）治療癥狀緩解者的TNF-α顯著下降， 治療無效者TNF-α濃度仍高， 提示腸腔內TNF-α數量可以作為UC患者的炎癥活動性指標[5]。本實驗說明柳氮磺吡啶為治療UC的有效藥物。而目前雖然已有沙利度胺用于IBD 患者及動物模型的報道， 但其確切的機制和療效目前仍未有定論， 有待于進一步研究。

目前一些針對細胞因子失衡的免疫調節藥物的治療已經在動物模型上取得了較好的效果。UC發病機制尚不明確， 一般認為是多環節、多因素相互作用的結果。促炎細胞因子及抑炎細胞因子失衡機制的研究無疑為研究UC的發生、發展提供了理論依據， 且有利于研制新藥及開發更有效的臨床治療手段。

本研究證實大鼠應用沙利度胺治療后， 顯著改善UC的癥狀， TNF-α的濃度明顯低于模型組和柳氮磺吡啶組（P<0.01）， 表明沙利度胺具有減輕腸黏膜水腫， 對抗炎性細胞浸潤， 發揮抗炎的作用。實驗顯示沙利度胺與柳氮磺吡啶在減輕結腸炎癥、降低TNF-α活性及減少TNF-α的合成等方面有顯著差異， 但在升高大鼠體質量方面無顯著差異性， 因為柳氮磺吡啶主要通過抑制TNF-α及其他因子的表達而發揮作用。依據UC大鼠血清TNF-α濃度治療前后的變化， 可推斷沙利度胺對UC的治療， 可通過抑制TNF-a的表達而發揮作用。這種因子的濃度可能作為診斷UC病情活動的生物學指標， 為臨床上UC的診斷提供一定的理論依據。

腸道組織大體觀察亦可發現沙利度胺治療組黏膜損傷較輕， 說明沙利度胺可作為一種新藥治療UC。沙利度胺對UC治療有效， 沙利度胺是通過降低TNF-α活性及減少TNF-α的合成而發揮作用的， 其他的作用方式可能是次要的， 這為其臨床應用價值提供了一定的理論依據。沙利度胺雖為免疫調節劑， 但是其不抑制正常免疫， 副作用可通過減量或停藥或服用相關藥物減輕， 病情復發后再次用藥依然見效。藥物的有效性需大量臨床實驗進一步研究證實， 常規藥物治療無效的患者， 試用沙利度胺會得到意外的效果。希望大家繼續努力研制新藥， 減少不良反應。

綜上所述， 沙利度胺治療UC有效， 能顯著減輕結腸炎癥， 降低TNF-a濃度強于柳氮磺吡啶。

參考文獻

[1]Togawa J， Nagase H， Tanaka K， et al. Lactoferrin reduces colitis in rats via modulation of the immune system and correction of cytokine imbalance. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol， 2002， 283 （1）：187-195.

[2]Wettstein AR， Meagher AP. Thalidomide in Crohns disease. Lancet， 1997， 350（9089）：1445.

[3]Dong ZZ， Yao DF， Wu W， et al. Delayed hepatocarcinogenesis through antiangiogenic intervention in the nuclear factor-kappa B activation pathway in rats. Hepatobiliary Pancreat Dis Int， 2010， 9（2）：169-74.

[4]鄒莉波， 劉艷， 先宇飛， 等 .復方青黛顆粒治療UC的機制.沈陽醫科大學學報， 2006， 23（2）：119-122.

[5]Desreumaux P， Uhosh S. Review article： mode of action and delivery of 5-aminosalicylic acid-new evidence. Aliment Pharmacol Ther， 2006， 24（Suppl 1）：2-9.

[收稿日期：2016-01-28]