南陽地區(qū)無償獻血人群梅毒抗體篩查試驗方法學評價及結果分析

劉桂曄河南省南陽市中心血站檢驗科，河南南陽　473000

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南陽地區(qū)無償獻血人群梅毒抗體篩查試驗方法學評價及結果分析

劉桂曄
河南省南陽市中心血站檢驗科，河南南陽473000

［摘要］目的調查2012—2014年南陽地區(qū)無償獻血者TP抗體篩查陽性情況及人群分布特征，探討雙試劑TP抗體篩查試驗方法的質量評價。方法2012—2014年南陽地區(qū)無償獻血者血清標本采用兩種ELISA試劑進行篩查，對結果進行分析，并調查TP抗體陽性人群分布特點；留取經TPPA確證的95例陽性標本，81例陰性對照標本，同時進行雙試劑TP抗體篩查試驗，通過篩查試驗與金標準的一致性檢驗對雙試劑TP抗體篩查試驗方法進行評價。結果2012—2014年南陽市無償獻血TP抗體陽性率為0.29%。TP抗體陽性率逐年升高，2014年與2012年TP抗體陽性率差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。2012—2014年獻血人群TP抗體陽性分布：男女性差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），各年齡段TP抗體陽性率差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），個體人群TP抗體陽性率顯著高于學生團體和軍人團體，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），非穩(wěn)定工作人群TP抗體陽性率顯著高于穩(wěn)定工作者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。雙試劑TP抗體篩查試驗靈敏度為94.7%，特異度為93.8%，總符合率為94.3%。雙試劑TP抗體篩查試驗與確證試驗（TPPA）一致性檢驗中，一致性非常好，差異有統(tǒng)計學意義（Kappa=0.886，P＜0.001）。結論根據(jù)南陽市獻血人群分布特點，選擇低危人群，引導他們成為血液制品的主要來源，同時，提高實驗室篩查試驗效能保證輸血安全。

［關鍵詞］梅毒抗體；酶聯(lián)免疫法；方法學評價；梅毒螺旋體凝膠凝集試驗；一致性檢驗

梅毒是我國法定報告的乙類傳染病，由梅毒螺旋體（treponema pallidum，TP）感染引起，可通過性接觸、垂直傳播、血液傳播等多種途徑傳播，我國獻血法規(guī)定，TP是各地采供血機構必檢的病原體之一。目前檢測TP的方法有多種，最準確的就是梅毒螺旋體凝膠凝集試驗（TPPA），但是這種方法操作復雜，實驗條件要求嚴格，且成本高，基層實驗室應用較少。實驗室開展較多的檢測方法主要是快速血漿反應素試驗（RPR）和酶聯(lián)免疫法檢測TP抗體，RPR檢測特異性較差，影響因素較多，目前各地采供血機構檢測TP抗體主要采用兩種不同試劑酶聯(lián)免疫法。該文主要研究2012—2014年南陽地區(qū)無償獻血者TP抗體篩查陽性情況及人群分布特征，并對雙試劑TP抗體篩查試驗的方法進行評價，現(xiàn)報道如下。

1　對象與方法

1.1研究對象

研究對象為南陽市無償獻血者251 092人次，其中男性150 862人次，女性100 230人次，年齡18～55歲，現(xiàn)場采集3 mL全血，離心提取血清待檢。為評價梅毒抗體篩查試驗方法的效能，留取經梅毒螺旋體凝膠凝集試驗（TPPA）確證的陽性標本95例，陰性標本81例，-80℃冷凍保存，統(tǒng)一對其進行梅毒抗體篩查試驗。

1.2試劑

TP抗體檢測試劑：初檢及復檢均采用國產酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑盒（試劑一，珠海麗珠；試劑二，北京萬泰）。TPPA確證試劑盒。

1.3方法

1.3.1 TP抗體篩查試驗雙試劑，均采用酶聯(lián)免疫法，檢測過程和結果判定均嚴格按照試劑盒說明書及實驗室SOP文件進行，分別測定樣本吸光度值（S）及對照樣本的臨界值（CO）。

1.3.2 TP確證試驗梅毒螺旋體凝膠凝集試驗，檢測過程和結果判定參照試劑盒說明書及實驗室SOP文件進行。

1.4結果判斷

TP抗體篩查試驗兩種ELISA法均以S/CO≥1為單一試驗方法陽性，雙試劑TP抗體篩查試驗結果判斷標準：當雙試劑試驗結果均為陽性時，判斷為TP抗體陽性；當只有一種試劑結果為陽性，對該標本用該試劑進行雙孔檢測，如果雙孔均為陽性或有一孔陽性即判為TP抗體陽性；當雙試劑試驗結果為陰性時，判為TP抗體陰性；TPPA以操作說明書判定的陽性為陽性。

1.5診斷方法學評價

TPPA確證陽性組試驗結果陽性的為真陽性（TP），結果陰性的為假陰性（FN），TPPA確證陰性對照組中，診斷試驗陽性的為假陽性（FP），診斷試驗陰性的為真陰性（TN）。敏感度=（TP/（TP+FN））×100%，特異度=（TN/ （TN+FP））×100%，陽性預測值=（TP/（TP +FP））×100%，陰性預測值=（TN/（TN + FN））×100%，總符合率=（（TN+ TP）/（TN + FN+ TP +FP））×100%。

1.6統(tǒng)計方法

統(tǒng)計學分析采用SPSS 17.0軟件，陽性率比較采用χ2檢驗，診斷試驗方法學評價，采用篩查試驗與確證試驗的一致性檢驗。

2　結果

2.1 2012—2014年南陽市無償獻血者TP抗體篩查結果

2012—2014年南陽市無償獻血人數(shù)總數(shù)為251 092人次，TP抗體陽性率為0.29%。2012—2014年TP抗體陽性率逐年上升，分別為0.25%、0.29%、0.31%，見表1。

表1　2012—2014年南陽市無償獻血者TP抗體篩查陽性情況

2.2不同獻血人群TP抗體陽性分布

2.2.1 2012—2014年獻血人群TP抗體陽性性別分布2012—2014年獻血人群中男性150862人次，女性100230人次，男女TP抗體陽性率分別為0.35%、0.20%，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=43.379，P＜0.05），見表2。

2.2.2 2012—2014年獻血人群TP抗體陽性年齡分布2012—2014年獻血人群TP抗體陽性年齡分布如表2所示，TP抗體陽性以26～35歲和36～45歲年齡段居多，但各年齡段TP抗體陽性率差異無統(tǒng)計學意義（χ2=7.255，P＞0.05）。

2.2.3 2012—2014年獻血人群不同獻血組織方式TP抗體陽性分布2012—2014年獻血人群中學生團體獻血25 081人次，軍人團體21 088人次，個體人群204 923人次，TP抗體陽性率分別為0.19%、0.16%、0.31%，個體人群TP抗體陽性率顯著高于學生團體和軍人團體，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

2.2.4 2012—2014年獻血人群不同工作狀況TP抗體陽性分布2012—2014年獻血人群中穩(wěn)定工作者獻血163 895人次，非穩(wěn)定工作者87 197人次，TP抗體陽性率分別為0.25%、0.36%，非穩(wěn)定工作人群TP抗體陽性率顯著高于穩(wěn)定工作者，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=25.793，P＜0.05），見表2。

2.3雙試劑TP抗體篩查試驗方法學評價

2.3.1雙試劑TP抗體篩查試驗基本指標評價在疾控中心留取金標準（TPPA）診斷為陽性的95例樣本中，雙試劑TP抗體篩查試驗為陽性者有90例，5例兩種方法檢測均為陰性；在TPPA診斷為陰性的81例樣本中，雙試劑TP抗體篩查試驗為陽性者有5例，76例兩種檢測方法均為陰性，見表3。雙試劑TP抗體篩查試驗靈敏度為94.7%，特異度為93.8%，陽性預測值為94.7%，陰性預測值為93.8%，總符合率為94.3%。

表2　2012—2014年不同獻血人群TP抗體陽性分布

2.3.2雙試劑TP抗體篩查試驗與確證試驗一致性檢驗

評價雙試劑TP抗體篩查試驗的診斷價值，采用待評價的診斷試驗方法與金標準的一致性檢驗。雙試劑TP抗體篩查試驗與確證試驗（TPPA）一致性檢驗中，說明雙試劑TP抗體篩查試驗與確證試驗一致性非常好，差異有統(tǒng)計學意（Kappa=0.886，P＜0.001）。見表3。

表3　TP抗體篩查試驗評價

3　討論

我國獻血法規(guī)定，梅毒螺旋體感染是各地采供血機構必檢的病原體，根據(jù)吳曉雪［2］對溫州市無償獻血者血液報廢原因的分析，梅毒抗體陽性引起的血液報廢占總采血量的0.58%，居血液感染性報廢原因首位。

2012—2014年南陽市無償獻血人數(shù)總數(shù)為251 092人次，TP抗體陽性率為0.29%。TP抗體陽性率低于北京市［3］、廣州市［4］、張掖市［5］等地，其原因可能與南陽市屬于農業(yè)大市、流動人口較少有關。另外，近年來，南陽市血液中心積極開展無償獻血知識講座和安全宣傳教育，招募低危獻血員成為固定獻血者，屏蔽梅毒抗體陽性獻血者，都在降低獻血人群梅毒抗體陽性率方面起著積極作用。

2012—2014年獻血人群TP抗體陽性分布：男女性差異有統(tǒng)計學意義，男性陽性率高于女性，該研究中，雖然TP抗體陽性以26～35歲和36～45歲年齡段居多，但各年齡段TP抗體陽性率差異無統(tǒng)計學意義。不同獻血組織方式，TP抗體陽性率也不同，個體人群TP抗體陽性率顯著高于學生團體和軍人團體，這與學生和軍人有較好的生活和飲食習慣、受過高等教育或嚴格的約束有關。非穩(wěn)定工作人群TP抗體陽性率顯著高于穩(wěn)定工作者，這與工作環(huán)境、接觸人群密切相關。軍人、學生、穩(wěn)定工作人員是低危獻血人群，這與余加宏等［6］的結論一致。

目前檢測TP的方法有多種，實驗室開展較多的檢測方法主要是RPR和酶聯(lián)免疫法檢測TP抗體，RPR檢測由于特異性較差，目前僅應用于健康體檢篩查，目前各地采供血機構檢測TP抗體主要采用兩種不同試劑酶聯(lián)免疫法。該研究雙試劑TP抗體篩查試驗靈敏度、特異度、陰性預測值、陽性預測值、總符合率均較高，雙試劑TP抗體篩查試驗與確證試驗一致性非常好，有統(tǒng)計學意義，這與王宋興等［7］對兩種梅毒抗體檢測試劑的質量評價結論相仿。也有研究者［8］指出，梅毒檢測方法應根據(jù)梅毒感染階段不同而變化，理論上可行，實施較為困難。

綜上所述，獻血前梅毒感染篩查是獻血前檢查的重要組成部分，采供血機構要充分做好感染篩查工作，同時對獻血人群進行分析，引導低危獻血人群成為無償獻血人群的主體。

［參考文獻］

［1］Gabriela BG，Mary LK，Lori MN，et al. Untreated maternal syphilis and adverse outcomes of pregnancy：a systematic review and meta-analysis［J］.Bulletin of the World Health Organization，2013，91（3）：217-26.

［2］吳曉雪.2007-2011年溫州市無償獻血者血液報廢回顧性分析［D］.合肥：安徽醫(yī)科大學公共衛(wèi)生學院，2013.

［3］張莉，袁矅，孫莉，等.北京市無償獻血人群梅毒抗體篩查結果調查［J］.中國醫(yī)藥導報，2014，11（23）：94-97.

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［5］韓銀.張掖市2005-2011年無償獻血人群梅毒感染情況分析［J］.甘肅醫(yī)藥，2014，33（1）：44-45.

［6］余加宏，沈軍，卜坤，等.114736人次蚌埠地區(qū)無償獻血者血液檢測結果調查分析［J］.安徽醫(yī)學，2014，35（8）：1148-1151.

［7］王宋興，曾勁峰，古醒輝，等.兩種TP抗體檢測試劑的質量評價［J］.國際檢驗醫(yī)學雜志，2014，35（7）：930-931.

［8］丁國良，商發(fā)奎，延義芹，等.采供血機構對梅毒螺旋體檢測的最佳方案探討［J］.國際輸血與血液學雜志，2014，37（3）：222-225.

Test Method for Screening Blood Donors in Nanyang Population Analysis and Evaluation Results of Syphilis Antibody

LIU Gui-ye
Blood Screening Test Department，the Blood Center of Nanyang City，Nanyang，Henan Province 473000 China

[Abstract]Objective To investigate from 2012 to 2014 in Nanyang blood donors TP antibody positive and population distribution，quality evaluation and test method for TP double antibody screening reagent. Methods The serum samples of two kinds of ELISA reagents for blood donation screening methods from 2012 to 2014 in Nanyang，the results were analyzed，and the investigation of TP antibody positive population distribution characteristics；95 positive specimens left from TPPA confirmed，81 negative control samples，and double reagent TP antibody screening test，the consistency test screening test and evaluation of the gold standard test method for TP double antibody screening reagent. Results The Nanyang 2012—2014 blood donation TP antibody positive rate was 0.29%. The positive rate of TP increased year by year，the difference was statistically significant in 2014 and 2012 TP antibody positive rate（P＜0.05）. 2012—2014 blood distribution of positive TP antibody group：men and women have statistically significant difference（P＜0.05），there was no significant difference in the age，the positive rate of TP antibody（P＞0.05），the positive rate of TP antibody was significantly higher than that of individual student groups and military groups，the difference was statistically significant（P＜0.05），the rate of positive TP antibody was significantly higher than that of non steady working population stability of workers，the difference was statistically significant（P＜0.05）. Double reagent TP antibody screening test sensitivity was 94.7%，specificity was 93.8%，the total coincidence rate was 94.3%. Double reagent TP antibody screening test and confirmatory test（TPPA）consistency test（Kappa = 0.886，P＜0.001），very good consistency，was statistically significant. Conclusion According to the distribution characteristics of blood donors in Nanyang City，choose a low risk population，and guide them to become the main source of blood products，at the same time，improve the efficiency of laboratory screening test to ensure the safety of blood transfusion.

[Key word]Syphilis antibody；ELISA；Method evaluation；Treponema pallidum gel agglutination test；Consistency test

收稿日期：（2015-09-27）

［基金項目］南陽市中心血站科技發(fā)展基金項目（2013GG098）。

DOI：10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.01.108

［中圖分類號］R759.1

［文獻標識碼］A

［文章編號］1672-5654（2016）01（a）-0108-03