血清AFP、TK1、DKK1聯合檢測對原發性肝癌的診斷價值

李祚品，張平安

(武漢大學人民醫院，湖北 武漢 430000)

?

血清AFP、TK1、DKK1聯合檢測對原發性肝癌的診斷價值

李祚品，張平安

(武漢大學人民醫院，湖北 武漢 430000)

[摘要]目的探討血清甲胎蛋白(AFP)、胸苷激酶1(TK1)、分泌型蛋白Dikkopf-1(DKK1)聯合檢測診斷原發性肝癌(PHC)的價值。方法選擇84例PHC患者作為PHC組，50例良性肝病患者作為良性肝病組，50例健康體檢者作為對照組，檢測3組血清AFP、TK1、DKK1水平并進行組間比較。結果PHC組血清AFP、TK1、DKK1水平均顯著高于良性肝病組和對照組(P均<0.05)；三項指標聯合檢測診斷PHC的靈敏度、特異度均顯著高于各單項指標檢測結果(P均<0.05)。結論血清AFP、TK1、DKK1聯合檢測診斷PHC的靈敏度、特異度均較高，對臨床診斷PHC有重要的參考價值。

[關鍵詞]原發性肝癌；甲胎蛋白；胸苷激酶1；分泌型蛋白Dikkopf-1；腫瘤標志物

原發性肝癌(PHC)是臨床上常見的惡性腫瘤之一，其發病隱匿、病情進展快、惡性程度高、臨床病死率高，即使行根治性切除術術后5年內仍有超過50%的患者出現復發轉移[1]。一旦出現復發轉移，PHC患者的近期隨訪存活率極低[2]。由于PHC早期癥狀及體征不明顯，待發現時大部分患者已經為中晚期，錯過了最佳治療時機，而早期確診、早期治療能夠有效延長PHC患者的生存期。單項指標檢測的靈敏度、特異度不高，易出現誤診、漏診，多種標志物的聯合檢測能夠有效提高檢測的靈敏度、特異度，為PHC的臨床診斷提供可靠依據。甲胎蛋白(AFP)、胸苷激酶1(TK1)、分泌型蛋白Dikkopf-1(DKK1)均是PHC的血清標志物，但各單項指標檢測診斷PHC的靈敏度、特異度較低，故本研究分析了三項指標聯合檢測對PHC的診斷價值，現報道如下。

1臨床資料

1.1一般資料選擇2013年1月—2014年12月在我院住院治療的84例PHC患者作為PHC組，診斷符合《原發性肝癌診療規范(2011年版)》[3]相關標準，且均經病理組織學檢查確診，男52例，女32例；年齡34～65(55.7±14.7)歲。選擇同時期于我院就診的50例良性肝病患者作為良性肝病組，男31例，女19例；年齡32～66(56.4±14.1)歲；肝硬化17例，肝炎16例，脂肪肝9例，肝血管瘤8例。另選擇同時期于我院健康體檢者50例作為對照組，男32例，女18例；年齡33～64(56.1±14.2)歲。3組性別、年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經醫院醫學倫理學委員會同意批準，且患者知情同意并簽訂知情同意書。

1.2檢測方法PHC患者和良性肝病患者均在治療之前進行采血，以避免藥物治療對試驗結果準確性、客觀性產生干擾。抽取試驗對象空腹靜脈血4 mL置于帶有惰性分離膠的真空采血管中，靜置30 min后，以4 000 r/min離心10 min，置于冰箱中恒溫(-25 ℃)保存。血清AFP水平采用Dxl800 Access化學發光免疫分析系統檢測，檢測所需試劑盒由羅氏診斷產品(上海)有限公司提供；TK1采用CIS-1型化學發光數字成像分析儀檢測，檢測所需TK1細胞周期分析試劑盒由深圳華瑞同康公司提供；DKK1采用DNM-9602G酶聯分析儀檢測，檢測所需ELISA試劑盒由上海撫生公司提供。以上項目的檢測操作均嚴格依照試劑盒說明書進行。

1.3陽性判定①AFP<10.0 ng/mL為正常，超過上述范圍則判定為陽性；②TK1<2.0 pmol/L為正常，超過上述范圍則判定為陽性；③DKK1<2.0 ng/mL為正常，超過上述范圍則判定為陽性。

2結果

2.13組血清AFP、TK1、DKK1水平比較PHC組血清AFP、TK1、DKK1水平顯著高于良性肝病組和對照組(P均<0.05)。見表1。

表1　3組血清AFP、TK1、DKK1水平比較

注：①與良性肝病組比較，P<0.05；②與對照組比較，P<0.05。

2.23組血清AFP、TK1、DKK1陽性表達情況比較血清AFP、TK1、DKK1聯合檢測的陽性率高于單項指標檢測結果(P<0.05)。見表2。

2.3血清AFP、TK1、DKK1聯合檢測診斷PHC的價值三項指標聯合檢測診斷PHC的靈敏度、特異度均顯著高于各單項指標檢測結果(P均<0.05)。見表3。

3討論

PHC是臨床病死率很高的惡性腫瘤之一，男性發病率約為女性的3倍，且年齡越大其發病風險越高。超過80%的PHC患者存在長期的慢性肝臟疾病的基礎病患，且約有九成的肝硬化患者會最終發展為PHC[4]。由于PHC惡性程度高且病情隱匿，早期診斷、早期治療是提高PHC患者生存時間的關鍵和重點。目前，臨床上用于診斷PHC的方法較多，但大多存在難以逾越的局限性，很難為PHC的臨床診斷提供準確、可靠的依據。肝組織活檢病理檢查是PHC臨床診斷方法準確性最高的一種，但肝臟穿刺的出血風險、腫瘤種植以及患者不適等均限制該方法無法在臨床中獲得大范圍推廣[5]。B超篩查，MR、CT聯合檢查也是目前臨床上用于診斷PHC的常用方法，作為一種無創檢查方式，其檢測結果具有一定可靠性，但影像學結果的判定需要熟練掌握生理解剖知識以及豐富的臨床經驗，即醫師水平的高低是影響影像學結果可靠性和準確性的重要因素[6]。

表2　3組血清AFP、TK1、DKK1陽性

注：①與良性肝病組比較，P<0.05；②與對照組比較，P<0.05；③與本組其他3項指標比較，。

表3　血清AFP、TK1、DKK1聯合檢測診斷

注：①與3項聯合比較，P<0.05。

蛋白組學、免疫學以及基因表達等學科的發展為癌癥的篩查提供了新的途徑，不少血清學標志物均已經被用于腫瘤的診斷。AFP是目前臨床上用于診斷PHC使用范圍最廣的血清學標志物，且血清AFP濃度與腫瘤的尺寸存在正相關關系，即血清AFP濃度越高，則意味腫瘤的尺寸可能越大，直徑<30 mm與直徑>30 mm的肝腫瘤的AFP診斷敏感性分別為25%和52%[7]。但也有大量的臨床研究結果顯示，血清AFP的PHC診斷敏感性、特異性不高，不少肝硬化、肝炎等非肝臟腫瘤患者的血清AFP水平也存在異常升高現象[8-9]。本研究結果顯示，血清AFP診斷PHC的敏感度、特異度、準確性均不高，這與上述論述基本一致。因此，為提高PHC診斷的準確，需要敏感度較高的其他血清標志物進行聯合檢測，提高輔助診斷可靠性。

TK1是DNA合成的關鍵酶，與細胞增殖存在密切關聯[10]。腫瘤形成的第一步便是腫瘤細胞的過度增殖，而由于TK1與細胞增殖存在密切關聯，檢測TK1濃度變化情況便可以發現惡性細胞增殖風險[11]。對于健康人群而言，血清TK1的水平極低或趨近于無，所以，檢測血清TK1能夠用于篩查惡性增殖性病變以及治療后治療效果的評價。本研究結果顯示，PHC組血清TK1水平均顯著高于良性肝病組、對照組。表明血清TK1是一種極具潛力的腫瘤篩查標志物。但TK1的臨床應用也存在一定的局限性[12]：如TK1對多種惡性腫瘤均呈高表達狀態，PHC患者單獨檢測TK1的敏感性不高，無法成為PHC的首選診斷指標；患者身體情況的個體差異會導致細胞增殖速率的不同，某些患者的細胞增殖速率較低，則血清TK1水平也較低，易出現假陰性，造成漏診；另外月經期、妊娠期等細胞處于增殖狀態的特殊時期，血清TK1水平也有異常升高，易出現假陽性，造成誤診。因此，有必要聯合其他敏感度較高的血清標志物進行聯合檢測以解決TK1癌譜較廣的問題。

DKK1是一個已知的經典Wnt信號通路負調節蛋白，它在細胞增殖、分化、存活以及細胞凋亡、細胞動力等各種過程中均發揮著非常重要的作用[13]。Wnt信號通路不僅參與胚胎的發育、生長及平衡調整，也與肺癌、結腸癌、乳腺癌、甲狀腺癌、前列腺癌、肝癌等多種惡性腫瘤存在密切的關聯[14]。但是，DKK1既是腫瘤抑制劑，也是腫瘤激活劑，導致其在不同類型的腫瘤中有著不同的表達：在結腸癌、宮頸癌等惡性腫瘤中的表達水平下降，而在多發性骨髓瘤、食管癌、乳腺癌、肺癌、腎母細胞瘤、肝母細胞瘤、肝癌等惡性腫瘤中的表達又會升高[15]。本研究結果顯示，DKK1對PHC的診斷有著良好的臨床指導意義，PHC組血清DKK1水平明顯高于其他組。

綜上所述，血清AFP、TK1、DKK1聯合檢測診斷原發性肝癌的靈敏度、特異度均較高，對臨床診斷有重要的參考價值。

[參考文獻]

[1]馬曉路，談綺文，彭穎斐，等. 血清DDK1水平對肝細胞癌(HCC)患者預后判斷的臨床價值[J]. 復旦學報：醫學版，2014，41(5)：589-595；623

[2]陸再英，鐘南山. 內科學[M]. 7版. 北京：人民衛生出版社，2008：457-462

[3]中華人民共和國衛生部. 原發性肝癌診療規范(2011年版)[J]. 臨床腫瘤學雜志，2011，16(10)：929-946

[4]中華醫學會肝病學分會，中華醫學會感染病學分. 慢性乙型肝炎防治指南[J]. 中華內科雜志，2006，45(2)：162-170

[5]王強，謝躍文，夏潔. 血清TK1、AFP、CEA聯合檢測在原發性肝癌診斷中的臨床價值[J]. 國際檢驗醫學雜志，2013，34(9)：1101-1102

[6]顧麗華，朱勇根，徐海峰. 血清三酰甘油、低密度脂蛋白與肝癌的相關性分析[J]. 現代中西醫結合雜志，2014，23(18)：1991-1992

[7]李清茹，桑士標，袁 航，等. 血清胸苷激酶1檢測對惡性腫瘤診斷及療效評估的意義[J]. 中華核醫學雜志，2009，29(4)：271-273

[8]田福洲. 肝癌腫瘤標記物[J]. 世界華人消化雜志，2010，8(4)：440-441

[9]Peng SY，Chen WJ，Lai PL，et al. High alpha-fetoprotein level correlates with high stage，early recurrence and poor prognosis of hepatocellular carcinoma：significance of hepatitis virus infection，age，p53 and beta-catenin mutations[J]. Int J Cancer，2004，112：44-50

[10] 陸奎英，崔素芬，徐亮，等. 重組DKK1及pCMV-HA2/DKK1重組質粒對宮頸癌細胞體外增殖作用的影響[J]. 臨床檢驗雜志，2012，30(11)：898-901

[11] 陳志恒，王雅琴，朱小玲，等. 血清胸苷激酶1在健康體檢中的應用[J]. 中華健康管理學雜志，2011，5(6)：349-352

[12] 羅冰，劉國瑞，嚴孝嶺，等. 評價胸苷激酶 1 和多種惡性腫瘤相關物質檢測腫瘤的價值[J]. 臨床檢驗雜志，2010，28(5)：341-342

[13] Kanke F，Kumada T，Toyoda H，et al. Reference change values for lens culinaris agglutinin-reactive α-fetoprotein and des-γ-carboxy prothrombin in patients with chronic hepatitis C[J]. Clin Chem Lab Med，2012，50(5)：957-960.

[14] 李說. 連續線狀排列125I粒子條聯合金屬支架+TACE治療肝癌門靜脈主干癌栓實驗及臨床研究[D]. 上海：復旦大學，2009：5-7

[15] 趙云鵬，高春芳. 糖組學研究在肝病中的應用進展[J]. 第二軍醫大學學報，2007，28(5)：538-541

[收稿日期]2015-05-17

[中圖分類號]R735.7

[文獻標識碼]B

[文章編號]1008-8849(2016)01-0094-03

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.01.036

[通信作者]張平安，E-mail:zhangpinggan@aliyun.com