顯色培養(yǎng)基與SS培養(yǎng)基對(duì)從業(yè)人員肛拭標(biāo)本及食品中沙門菌檢測(cè)的對(duì)比分析

徐妍，馬智龍，楊娟，蔡震江蘇省泰州市疾病預(yù)防控制中心，江蘇泰州　225300

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顯色培養(yǎng)基與SS培養(yǎng)基對(duì)從業(yè)人員肛拭標(biāo)本及食品中沙門菌檢測(cè)的對(duì)比分析

徐妍，馬智龍，楊娟，蔡震
江蘇省泰州市疾病預(yù)防控制中心，江蘇泰州225300

［摘要］目的對(duì)比分析顯色培養(yǎng)基與SS培養(yǎng)基對(duì)從業(yè)人員肛拭標(biāo)本及食品中沙門菌檢測(cè)的靈敏性和特異性。方法將2 739份從業(yè)人員肛拭樣品及297份食品增菌后分別接種顯色培養(yǎng)基和SS培養(yǎng)基分離培養(yǎng)，結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果2 739份肛拭樣品中，顯色培養(yǎng)基挑選紫色疑似菌落72株，檢出沙門菌15株，SS培養(yǎng)基挑選疑似菌落43株，檢出沙門菌17株，敏感性分別為88.24%和100.00%，特異性分別為97.91%和99.04%；297份食品中，顯色培養(yǎng)基挑選紫色疑似菌落44株，檢出沙門菌36株，SS培養(yǎng)基挑選疑似菌落42株，檢出沙門菌36株，敏感性均為100.00%，特異性分別為96.93%和97.70%。結(jié)論SS培養(yǎng)適用于從業(yè)人員肛拭標(biāo)本及基層大量的日常檢測(cè)工作；顯色培養(yǎng)基適用于食品及突發(fā)公共衛(wèi)生事件的快速檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中，培養(yǎng)基的應(yīng)用應(yīng)根據(jù)檢測(cè)樣品的種類來選擇。

［關(guān)鍵詞］沙門菌；顯色培養(yǎng)基；SS培養(yǎng)基；肛拭標(biāo)本；食品

沙門菌是腸桿菌科的重要致病菌屬，也是引起細(xì)菌性食物中毒的主要致病菌之一［1］，對(duì)其分離目前常以對(duì)樣品進(jìn)行選擇增菌后，使用選擇性分離培養(yǎng)基進(jìn)行病原菌分離鑒別。上世紀(jì)90年代后期國外研發(fā)和應(yīng)用了對(duì)特定菌酶底物的顯色培養(yǎng)基［2］。許多學(xué)者研究表明顯色培養(yǎng)基具有高敏感性和特異性，且具有操作簡便、快速、易于識(shí)別等特點(diǎn)［3-5］。為對(duì)比顯色培養(yǎng)基與SS培養(yǎng)基在不同樣品中檢測(cè)沙門菌的敏感性和特異性，該文對(duì)該市公共場(chǎng)所及飲食行業(yè)從業(yè)人員2 739份肛拭樣品及297份肉及其制品類食品樣品，同時(shí)采用顯色培養(yǎng)基和SS培養(yǎng)基進(jìn)行沙門氏菌檢測(cè)對(duì)比。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1標(biāo)本來源從業(yè)人員肛拭樣品2 739份從泰州市

2015年5—7月公共場(chǎng)所及飲食行業(yè)從業(yè)人員用無菌采便棒采集所得；肉及其制品類食品樣品共297份從泰州市集貿(mào)市場(chǎng)和超市購買，置于2～8℃采集箱中于4 h內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。

1.1.2培養(yǎng)基、生化試劑及診斷血清亞硒酸鹽胱氨酸增

菌液（SC）、SS瓊脂、三糖鐵瓊脂及其他鑒定用的生化培養(yǎng)基均由北京路橋技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)；沙門氏菌屬診斷血清購自寧波天潤生物藥業(yè)有限公司；科瑪嘉沙門氏菌顯色培養(yǎng)基由鄭州博賽生物科技股份有限公司提供；VITEK2革蘭氏陰性細(xì)菌鑒定卡購自法國梅里埃公司。所有培養(yǎng)基、試劑及診斷血清均在有效期內(nèi)使用。

1.1.3檢測(cè)儀器法國梅里埃公司VITEK2全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)。

1.2方法

1.2.1肛拭樣品的增菌、分離培養(yǎng)依據(jù)國標(biāo)WS 271-2007《感染性腹瀉診斷標(biāo)準(zhǔn)》，將采集的肛拭子標(biāo)本放入SC增菌液中，36℃24 h增菌培養(yǎng)后，用接種環(huán)分別取增菌液一環(huán)，劃線接種于SS平板和顯色平板，于36℃培養(yǎng)24 h。

1.2.2食品樣品的增菌、分離培養(yǎng)參照GB4789.4—2010《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》的方法，稱取25 g（mL）樣品放入盛有225 mL的無菌均質(zhì)杯中前增菌，移取1 mL混合物轉(zhuǎn)種于10mLSC增菌液內(nèi)，36℃24 h增菌培養(yǎng)后，用接種環(huán)分別取增菌液一環(huán)，劃線接種于SS平板和顯色平板，于36℃培養(yǎng)24 h。

1.2.3菌株的篩選在SS培養(yǎng)基上挑取無色半透明、中等大小、圓形扁平、邊緣光滑中心帶黑色的菌落；在顯色培養(yǎng)基上按說明挑取顏色為紫色的菌落。

1.2.4菌株的鑒定將兩種分離瓊脂平板上挑取的疑似菌落分別接種腸道鑒別生化管，初篩符合者（甘露醇+、葡萄糖+、尿素-、蔗糖-、動(dòng)力+、電基質(zhì)-、硫化氫+）用VITEK2全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)進(jìn)行鑒定，對(duì)鑒定為沙門氏菌的菌株用沙門氏菌屬診斷血清進(jìn)行玻片凝集實(shí)驗(yàn)判定結(jié)果。

2　結(jié)果

2.1從業(yè)人員肛拭樣品檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

2 739份肛拭樣品中，沙門氏菌顯色培養(yǎng)基挑選紫色疑似菌落72株，檢出沙門菌15株，假陽性菌落經(jīng)鑒定主要為非發(fā)酵菌（銅綠假單胞菌、嗜麥牙寡養(yǎng)食單胞菌和施氏假單胞菌）；SS培養(yǎng)基挑取疑似菌株43株，檢出沙門菌17株，假陽性菌落經(jīng)鑒定為變形桿菌、粘質(zhì)沙雷氏菌、產(chǎn)堿普羅威登斯菌和楊氏檸檬酸桿菌。敏感性分別為88.24%和100.00%，特異性分別為97.91%和99.04%，見表1。

表1　兩種培養(yǎng)基分離肛拭樣品中沙門菌的檢測(cè)結(jié)果

2.2食品樣品檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

297份食品中，顯色培養(yǎng)基挑選紫色菌落44株，檢出沙門菌36株，假陽性菌落經(jīng)鑒定為銅綠假單胞菌和施氏假單胞菌；SS培養(yǎng)基挑選疑似菌落42株，檢出沙門菌36株，假陽性菌落經(jīng)鑒定為變形桿菌和弗氏檸檬酸桿菌。敏感性均為100%，特異性分別為96.93%和97.70%，見表2。

表2　兩種培養(yǎng)基分離食品中沙門菌的檢測(cè)結(jié)果

3　討論

用顯色培養(yǎng)基鑒定微生物是一種新的微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)，該技術(shù)以生化反應(yīng)為基礎(chǔ)，通過在培養(yǎng)基中加入細(xì)菌特異性酶的顯色底物，直接根據(jù)菌落顏色對(duì)菌種做出鑒定［6］。相比較傳統(tǒng)的培養(yǎng)基，顯色培養(yǎng)基快速，靈敏，高效，在我國現(xiàn)行的食品安全衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中，已引入多種顯色培養(yǎng)基作為分離培養(yǎng)基［7］，顯色培養(yǎng)基開始逐漸進(jìn)入我國的食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。但本次實(shí)驗(yàn)表明：科瑪嘉顯色培養(yǎng)基在檢測(cè)從業(yè)人員肛拭標(biāo)本時(shí)，并沒有有效地提高檢測(cè)效率。

由表1可以看出，對(duì)從業(yè)人員肛拭樣品的對(duì)比實(shí)驗(yàn)中，SS培養(yǎng)基的敏感性和特異性明顯高于科瑪嘉顯色培養(yǎng)基，原因可能是肛拭樣品中雜菌較多，污染量大，且嗜水氣單胞菌和銅綠假單胞菌等非發(fā)酵菌可能存在與沙門菌相同的酶，在顯色培養(yǎng)基上也呈現(xiàn)紫色，表現(xiàn)出與沙門氏菌相同的性狀而無法區(qū)別，這樣大量的非發(fā)酵菌所表現(xiàn)出的假陽性，干擾了目標(biāo)菌的檢測(cè)，造成篩選效率過低，從而影響了顯色培養(yǎng)基檢測(cè)的敏感性、特異性。而SS培養(yǎng)基為強(qiáng)選擇性培養(yǎng)基，能較強(qiáng)的抑制腸道非病原細(xì)菌及大腸桿菌的生長，故在檢測(cè)此類樣品時(shí)，選用抑制性較強(qiáng)的SS培養(yǎng)基為好。

由表2可以看出，食品樣品的對(duì)比實(shí)驗(yàn)中，科瑪嘉顯色培養(yǎng)基與SS培養(yǎng)基檢測(cè)結(jié)果顯示，二者的敏感性都是100%，特異性也無顯著性差異，原因可能是食品相對(duì)比較干凈，雜菌少，干擾小。但是，在對(duì)食品樣品的檢測(cè)過程中，傳統(tǒng)的鑒定方法首先都要進(jìn)行純培養(yǎng)，再將細(xì)菌鑒定至種，一般需要72～120 h，耗時(shí)較長。而顯色培養(yǎng)基最大的優(yōu)點(diǎn)是省去了對(duì)菌株進(jìn)行純培養(yǎng)的步驟，可以直接通過菌落顏色對(duì)菌株進(jìn)行分離和初步鑒別，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的過程中，可將點(diǎn)種沙門菌顯色培養(yǎng)基與三糖鐵結(jié)合起來，這一過程一般只需要48～72 h，縮短了檢測(cè)周期，效率得到了提升，且操作簡單，無需其他特殊儀器，此方法為實(shí)驗(yàn)室快速檢測(cè)時(shí)，能及時(shí)給出檢測(cè)報(bào)告提供了可能。故在食品及突發(fā)公共衛(wèi)生事件的檢驗(yàn)中建議使用顯色培養(yǎng)基進(jìn)行沙門菌檢驗(yàn)。

該次試驗(yàn)表明SS選擇性培養(yǎng)基在從業(yè)人員肛拭標(biāo)本的沙門菌檢測(cè)中，敏感性、特異性明顯高于顯色培養(yǎng)基，并且使用成本大大低于顯色培養(yǎng)基，適合基層大量的日常檢測(cè)工作；顯色培養(yǎng)基是近年來開發(fā)的新型快速檢測(cè)技術(shù)，適合食品及突發(fā)公共衛(wèi)生事件的快速檢測(cè)。所以在實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中，培養(yǎng)基的應(yīng)用應(yīng)根據(jù)樣品的種類甄別選擇。

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The Comparisons of The Chromogenic and the SS Mediums Indetecting Salmonella from Employees’Anal Swab and Food

XU Yan，MA Zhi-long，YANG Juan，CAI Zhen.
Center for Disease Control and Prevention，Taizhou city，Taizhou，Jiangsu Province，225300，China

［Abstract］Objective To compare the sensitivities and specificities of the chromogenic and the SS mediums in detecting salmonella from employees and food. Methods 2 739 employees’anal swab and 297 food samples were separately inoculated into the chromogenic and the SS mediums after pre -enrichment，and compared the sensitivities and specificities of salmonella in the two kinds of mediums. Results Among the 2 739 anal swab samples，72 suspected colonies and 15 salmonella strains were found using the chromogenic mediums whereas the corresponding numbers for using the SS mediums were 43 and 17. Thus 88.24% vs 100.00%（sensitivities）and 96.10% vs 99.04%（specificities）were found respectively using the chromogenic and the SS mediums separately. Again，among the 297 food samples，44 suspected colonies and 36 salmonella strains were found using the chromogenic mediums whereas the corresponding numbers for using the SS mediums were 42 and 36.Thus 100.00% vs 100.00%（sensitivities）and 96.93% vs 99.04%（specificities）were found respectively using the chromogenic and the SS mediums separately. Conclusion SS mediums were preferred for the routine detections for the employees’anal swabs while the chromogenic mediums were preferred for the rapid detection in the public healthy emergency.And it depends on types of samples to choose the kind of mediums.

［Key words］Salmonella；Chromogenic medium；SS culture medium；Anal swab specimens；Food

收稿日期：（2015-10-13）

［通訊作者］馬智龍（1964-），男，江蘇泰州人，主任技師，主要從事病原細(xì)菌的研究工作。

［作者簡介］徐妍（1976-），女，江蘇泰州人，本科，副主任技師，主要從事病原細(xì)菌的研究工作。

DOI：10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.02.095

［中圖分類號(hào)］R155

［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］A

［文章編號(hào)］1672-5654（2016）01（b）-0095-03