前列腺癌患者血清人腺激肽釋放酶2水平檢測的臨床價值

蕭結容，閔　玲，楊素冰，張其超

(廣州醫科大學附屬腫瘤醫院檢驗科，廣東廣州510000)

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·論著·

前列腺癌患者血清人腺激肽釋放酶2水平檢測的臨床價值

蕭結容，閔玲，楊素冰，張其超

(廣州醫科大學附屬腫瘤醫院檢驗科，廣東廣州510000)

摘要:目的探討血清人腺激肽釋放酶2(hK2)的檢測對于前列腺癌(PCa)患者早期診斷、預后判斷和治療手段的臨床價值。方法選取2015年1～12月期間于廣州醫科大學附屬腫瘤醫院就診的25例PCa患者和25例前列腺增生(BPH)患者及25例健康男性作為研究對象，通過酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、放射免疫分析法(RIA)對hK2和前列腺特異性抗原(PSA)水平進行檢測。另隨機選取進行過根治性前列腺全切術的PCa組患者12例，檢測并分析其手術前后hK2水平。 該文所得數據采用統計學軟件SPSS21.0建模處理。結果PCa組、BPH組和健康組的hK2水平分別為(75.5±24.5)ng/L、(23.3±5.8)ng/L和(22.2±3.56)ng/L，PCa組明顯高于BPH組和健康組，差異均具有統計學意義(P<0.05)；hK2檢測PCa的特異度、準確度分別為89%和78%，25例PCa患者術后的hK2水平[(34.4±10.5)ng/L]與術前[(80.2±24.5)ng/L]相比較顯著下降，差異有統計學意義(P<0.05)。結論hK2診斷PCa患者能有效提高其檢測特異度，減少患者不必要的活檢率，為患者的早期臨床檢測、預后判斷和治療提供了新的方向，前景值得進一步挖掘。

關鍵詞:前列腺癌；人腺激肽釋放酶2；前列腺特異性抗原；臨床價值

前列腺癌(PCa)是男性生殖系統較常見的惡性腫瘤，隨著年齡的增長患病的概率越大，早期癥狀不明顯，使得早期診斷工作困難重重。目前，臨床上進行PCa早期診斷尚未有萬全之策，因此懷疑患有PCa的患者在沒有病理診斷的情況下，必須承受前列腺活體組織檢查之苦。近年來，隨著醫療手段的不斷進步，研究人員為發現準確度高、特異度強與PCa相關的分子生物學指標而不斷做出努力，成為相關學者聚焦的重點。相關研究顯示，與前列腺特異性抗原(PSA)一樣，由前列腺上皮細胞產生的存在于血循環或組織中的人組織激肽釋放酶(KLKs)出現異常及其與惡性腫瘤的形成和發展之間的關系這一課題，越來越引發相關學者的激烈討論[1]。KLKs分泌至循環系統中的血清人腺激肽釋放酶2(hK2)，極大可能促進PCa增長[2]，因此，對于PCa的篩選、分期和研究的準確度、特異度而言，正確檢測hK2變得尤為重要。然而，現階段對于此診斷方法爭議較大，尚未成熟[3]。本研究通過hK2聯免疫定量分析法來檢測PCa、前列腺增生(BPH)患者和健康人的血清hK2水平，對血清hK2水平和PCa的相關性進行探討，為PCa的早期診斷、預后判斷和治療提供有力依據。現將研究結果報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選取2015年1～12月期間于廣州醫科大學附屬腫瘤醫院就診的PCa患者25例(PCa組)、BPH患者25例(BPH組)及健康男性25例(健康組)作為研究對象。PCa組年齡60～82歲，平均年齡(69.3±5.2)歲，且根據2002年PCa AJCC分期標準，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期分別為2例、4例、7例和12例；BPH組患者25例，年齡53～80歲，平均年齡為(66.2±2.5)歲，且均符合以下標準：(1)PCa和BPH患者均進行病理診斷已證實；(2)均在直腸指診檢查前或檢查后的1周、活檢后2周進行采血；未因前列腺疾病而接受治療；(3)均未接受過前列腺疾病的相關治療。健康組年齡55～85歲，平均年齡為(70.8±7.6)歲。各組年齡間比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法分別抽取各組清晨空腹靜脈血5 mL，3 h內分離血清，收集后集中檢測hK2和PSA。另隨機選取進行過根治性前列腺全切術的Pca組患者12例，檢測并分析其手術前后的hK2水平。hK2檢測通過酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、hK2單克隆抗體(hK2mAb)、hK2多克隆抗體(hK2pAb)、放射免疫分析法(RIA)、辣根過氧化物酶(HRP)標記抗IgG進行。操作步驟如下：組分配制的試劑盒，置于室溫平衡30 min，加入50 μL hK2標準品，準備好空白對照組(10 g/L BSA/PBS)。稀釋hK2 pAb 100 μL，每孔1∶2 000稀釋量，37 ℃培育1 h；洗滌3次，加入1∶8 000稀釋的HRP標記抗IgG每孔100 μL，均通過37 ℃培育1 h并洗滌3次。底物液每孔加入100 μL，避光顯色15 min后每孔加入2.0 mol/L H2SO450 μL并終止反應，酶標儀450 nm波長讀取各孔吸光度(A)值，根據曲線圖繪制標準曲線。PSA檢測方法為RIA，使用試劑盒為PSARIAkit藥盒,廠家為天津九鼎醫學生物工程有限公司,PSA正常參考值小于4.0 ng/mL，使用儀器為SN-695B型智能放免γ檢測儀,廠家為上海核所日環光電儀器有限公司。

1.3統計學處理所有數據均采用SPSS21.0統計軟件進行建模處理，相關分析方法采用均數t檢驗、方差分析、χ2檢驗和雙變量，計數資料采用列聯表計算比值比(OR)及其95%CI描述，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1各組hK2水平檢測結果比較PCa組、BPH組和健康組的hK2水平分別為(75.5±24.5)ng/L、(23.3±5.8)ng/L和(22.2±3.56)ng/L，PCa組分別明顯高于BPH組和健康組，差異具有統計學意義(t=0.688，P<0.05)。15例進行過根治性前列腺全切術的PCa患者在術前后需分別檢測血清hK2水平3次，PCa患者術前和術后的血清hK2分別為(80.2±24.5)ng/L和(34.4±10.5)ng/L，其中術后有12例呈明顯下降趨勢，3例無明顯變化，差異有統計學意義(t=5.258，P<0.05)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期PCa患者血清hK2水平分別為(76.2±24.6)ng/L、(65.2±33.5)ng/L、(82.2±22.8)ng/L和(83.2±25.5)ng/L，差異均無統計學意義(P>0.05)。BPH組和PCa組的血清PSA水平分別為(8.99±4.87)ng/mL和(43.5±28.3)ng/mL，可知上述兩組的PSA水平均比正常參考值(<4.0 ng/mL)略高，其中PCa組的PSA水平明顯高于PPH組，差異有統計學意義(t=7.380，P<0.05)。

表1　PCa患者血清hK2和 PSA 水平檢測的診斷價值[%(n/n)]

通過比值比和95%CI得到hK2水平較高者患PCa的相對危險度，計算后顯示與hK2水平低的患者相比，相對較高的PCa患者的相對危險度為15.45(95%CI：3.82～63.15，P<0.05)。通過血清hK2診斷后，PCa的ROC曲線下面積為0.657(95%CI：0.622～0.881)，標準誤為0.064。由此可得，對于PCa的篩選、分期和研究的準確度、特異度而言，正確檢測hK2變得尤為重要。

3討論

大量研究顯示，在循環系統中PSA和hK2可共存，兩者在核苷酸序列上具有80%的同源性，都可由前列腺的上皮細胞表達且表達量最高[2,4-5]，其他組織相對較低，也許著兩者之間存在著某種功能關系。大膽推測hK2極大可能促進PCa增長，成為PCa發病途徑中不可或缺的因素。本研究PCa組大幅度高于BPH組和健康組，且BPH組hK2與健康組比較差異無統計學意義(P>0.05)。hK2的升高可能使PCa的危險性增高，對PCa的診斷有較高的準確度。研究中顯示只用PSA檢測PCa，優點在于靈敏度高，但特異度較低。相比雖然PCa組hK2升高的陽性率較低。PCa預后關系著患者到生活質量，成為臨床關注的焦點。hK2對于PCa病理分級和分期評估指標存在重要指導作用。本研究顯示，分期后的PCa組中血清hK2水平比較差異無統計學意義(P>0.05)，而且與分期無明顯的相關性。產生這一結果與相關報道不相符[6-10]，研究人員探討后總結原因主要有以下幾點：(1)hK2檢測存在不同方式，有一定關聯；(2)各組人員入組時的不同個體存在一定差異；(3)PCa的分期均為臨床分期，可能導致分期誤差。由于種種因素，使得研究結果未達到預期，也可能產生不同的新理論，都應在日后不斷證實，加強相關研究的準確度。

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Clinical value of human kallikrein 2 detection on patients with prostate cancer

XiaoJierong,MinLing,YangSubing,ZhangQichao

(DepartmentofClinicalLaboratory,theAffiliatedCancerHospitalofGuangzhouMedicalUniversity,Guangzhou,Guangdong510000,China)

Abstract:ObjectiveTo study the clinical value of human kallikrein 2 detection on the early diagnosis,prognosis and therapeutic means of patients with prostate cancer.Methods25 patients with prostate cancer and 25 patients with benign prostatic hyperplasia who were treated in affiliated hospital of Guangzhou Medical University between January 2015 and December 2015 were selected as research objects.Their human kallikrein 2 and prostate specific antigen level were detected by ELISA and RIA.25 cases of prostatic cancer after operation of our hospital in synchronization were randomly selected as research objects and their human kallikrein 2 level was detected and analysed.All the data was modeling processed by SPSS21.0.ResultsHuman kallikrein 2 level of PCa group,BPH group and healthy group was(75.5±24.5)ng/L,(23.3±5.8)ng/L and(22.2±3.56)ng/L respectively,which of PCa group was higher than that of BPH group and healthy group.The difference had statistical significance(P<0.05).The specific and accuracy of hK2 detecting PCa was 89% and 78%.Compared with before operation[(80.2±24.5)ng/L],hK2 level of 25 patients with prostate cancer[(34.4±10.5)ng/L] significantly decreased and the difference had statistical significance(P<0.05).ConclusionOn diagnosing prostate cancer,human kallikrein 2 can improve specific detection,reduce unnecessary detected rate and provide the new direction for early clinical detection,prognosis and therapy.It deserves further promotion.

Key words:prostate cancer;human kallikrein 2;prostate specific antigen;clinical value

(收稿日期：2015-12-25)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.09.012

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)09-1186-02

作者簡介：蕭結容，女，主管技師，主要從事臨床生化與免疫檢驗研究。