胃癌患者血清中性粒細胞明膠酶相關載脂蛋白水平及臨床意義

林建姣， 劉 艷， 胡紅松， 萬彥彬， 陳春林

深圳市龍崗區人民醫院消化內科，廣東 深圳 518172

胃癌患者血清中性粒細胞明膠酶相關載脂蛋白水平及臨床意義

林建姣， 劉 艷， 胡紅松， 萬彥彬， 陳春林

深圳市龍崗區人民醫院消化內科，廣東 深圳 518172

目的 探討胃癌患者外周血中中性粒細胞明膠酶相關載脂蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL)與其侵襲、轉移及預后的關系。方法 收集深圳市龍崗區人民醫院2011年1月-2012年6月40例胃癌患者和28名健康體檢者的血清標本，通過酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測血清NGAL水平。分析血清NGAL水平與胃癌臨床病理參數的關系；通過受試者ROC曲線分析確定血清NGAL與癌胚抗原(CEA)診斷胃癌的診斷性能。通過多因素分析，明確血清NGAL水平與胃癌患者預后的關系。結果 胃癌患者血清NGAL水平明顯高于健康對照者。血清NGAL水平與Lauren’s分型、淋巴結轉移、浸潤深度、遠處轉移及TNM分期有關(P<0.05)。NGAL取12.51 ng/ml作為血清診斷胃癌的最佳截點值，其靈敏度為84%，特異度為90%。NGAL陽性和陰性患者生存期中位數分別為12個月和27個月，差異有統計學意義(P<0.05)。結論 血清NGAL水平與胃癌的發生、浸潤和轉移相關,用于胃癌早期篩查、預后評估有重要的臨床應用價值。

胃癌；中性粒細胞明膠酶相關載脂蛋白；診斷；預后

胃癌是全球高發的惡性腫瘤之一,近年來，探索新的胃癌相關血清學指標和腫瘤標記物，反映胃癌的生物學特點，提高胃癌的診斷率和生存率成為研究的熱點。中性粒細胞明膠酶相關載脂蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL)又名Lipocalin-2，24p3。它在多種惡性腫瘤中表達異常，在腫瘤的增殖、侵襲及轉移過程中起著重要的作用[1]。在胃癌的早期診斷、病情監測及預后評價方面均有潛在的臨床價值，但NGAL作為一種無創的臨床生物學指標，在胃癌臨床研究中仍需進一步探討及明確。本研究采用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測外周血NGAL水平，旨在探討其對胃癌的診斷及預后的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 研究對象選取2011年1月-2012年6月在深圳市龍崗區人民醫院胃鏡及術后病理均證實的胃癌標本40例作為試驗組(包括乳頭狀腺癌、管狀腺癌、印戒細胞癌、黏液腺癌)，入選標本術前均未進行放化療及其他抗腫瘤治療，術后行常規放化療，其中男21例，女19例，年齡25～78歲，平均年齡(55.6±1.31)歲，另選取同期健康體檢者28名作為對照組，無心、肺、肝、腎等重要臟器疾病，無系統性炎癥性疾病，無全身急慢性感染性疾病，肝腎功能正常且行胃鏡檢查陰性。其中男18名，女10名，年齡28～70歲，平均年齡(52.2±1.35)歲，兩組受試者性別、年齡比較差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。隨訪時間截至2015年5月。研究方案經醫院倫理委員會批準。本研究所有患者均知情同意。

1.2 方法抽取受試者清晨空腹外周靜脈血3～5 ml置于抗凝管中，室溫靜置30 min，4 min，3 000 r/min離心后取血(離心半徑13.5 cm)，-80 ℃保存。按照NGAL ELISA試劑盒(上海依科賽生物制品有限公司)說明書所述步驟操作，讀取吸光度值，繪制標準曲線，計算血清NGAL 濃度。

2 結果

2.1 試驗組與對照組血清NGAL水平胃癌和健康對照組血清NGAL水平分別為(16.32±3.17)ng/ml、(8.34±4.13)ng/ml，兩組比較差異有統計學意義(t=8.157，P<0.01)。

2.2 胃癌患者血清NGAL水平與臨床病理特征的關系胃癌患者NGAL水平與Lauren’s分型、淋巴結轉移、浸潤深度、遠處轉移及TNM分期均具有相關性(P<0.05)，而與腫瘤大小、年齡、性別及分化程度無相關性(P<0.05，見表1)。

表1 血清NGAL水平與胃癌患者臨床病理特征的關系

2.3 血清NGAL、CEA對胃癌的診斷價值血清NGAL、CEA水平曲線下面積(AUC)分別為0.916 和0.749。12.51 ng/ml為血清NGAL 截點值時，Yonden指數(靈敏度+特異度-1)最大，為0.74，其篩查胃癌的靈敏度為84%，特異度為90%；而CEA篩選胃癌的靈敏度為68%，特異度為67.5%(見圖1)。根據TNM分期進一步分層分析，結果顯示，對于Ⅰ期胃癌患者， 血清NGAL的靈敏度明顯高于CEA(P<0.05)，但對于Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期患者，血清NGAL的靈敏度與CEA 的差異無統計學意義(P>0.05，見表2)。

圖1 NGAL和CEA篩查胃癌的ROC曲線

表2 不同分期胃癌患者NGAL 陽性率與CEA陽性率 [n(%)]

2.4 血清NGAL與胃癌患者預后的關系NGAL陽性和陰性患者中位生存時間分別為12個月和27個月，差異有統計學意義(P=0.02，見圖2)。單因素生存分析結果顯示，NGAL是胃癌患者的獨立預后因素(P=0.004)。

注：1：NGAL陽性組；2：NGAL陰性組。

3 討論

近年來，惡性腫瘤發病率已逐年上升，并成為威脅生存的第二大死亡原因。惡性腫瘤的早期發現與其預后密切相關，因此尋求無創、敏感度高及特異性高的理想腫瘤標志物意義重大。研究表明，NGAL不僅在感染性疾病、腎臟疾病及皮膚病等多種良性疾病中發揮重要作用，它在甲狀腺癌、乳腺癌[2]、卵巢癌[3]、子宮內膜癌、結直腸癌[4]、肺癌、肝癌、膽管癌、食管癌、胃癌[5]及胰腺癌中均表達異常。

NGAL在腫瘤侵襲、轉移中的作用機制尚不完全明確，NGAL作用于MMPs(基質金屬蛋白酶)/TIMPs(組織金屬蛋白酶抑制因子)，通過NGAL/MMP9結合體延長MMP的蛋白水解活性，促進其降解細胞基底膜，進而介導腫瘤細胞浸潤和轉移[6-7]，還通過促進上皮-間質轉化(epithelio-mesenchymal transition，EMT)改變腫瘤微環境，從而在腫瘤的侵襲和轉移中發揮作用[8-9]。NGAL在胃癌中的高表達與H.pylori感染密切相關，有研究[10]表明，NGAL陽性的胃黏膜上皮細胞附近，H.pylori呈簇狀分布，H.pylori的某些亞型可以誘導產生NGAL，并能與Fe3+高親和力結合，介導Fe3+的轉運，從而上調鐵易感基因的表達，促進腫瘤細胞的增殖和活化，為H.pylori及NGAL共同促進胃癌發生這一觀點提供了良好的支持[11]。本研究發現，胃癌患者血清中NGAL水平高于健康對照者，對胃癌的診斷具有較高的靈敏度；另外，胃癌患者NGAL水平與Lauren’s分型、淋巴結轉移、浸潤深度、遠處轉移及TNM分期相關。這與Wang等[5]結論一致，提示NGAL水平增高與胃癌的惡性程度及病情嚴重程度呈正比，提示胃癌生物學惡性程度高、侵襲性強、預后不良，可以作為胃癌患者評估病情嚴重程度的新指標。

本研究通過ROC工作曲線分析示，血清NGAL檢測診斷胃癌的最佳切點值為12.51 ng/ml，具有較高的靈敏度(84%)和特異度(90%)，且在Ⅰ期胃癌患者陽性率更高，比CEA明顯有優勢。生存分析顯示，NGAL陰性患者生存情況優于陽性患者(P<0.05)；胃癌患者血清中NGAL的高水平表達提示其在早期診斷及預后判斷中有較重要的價值。

綜上所述，血清NGAL檢測作為胃癌患者早期篩查和療效評估的方法，具有廣闊的應用前景，為胃癌的診治提供更積極、合理的治療方案。鑒于我院相當部分胃癌患者在發現及診斷胃癌時已錯過治療的黃金時期，且部分患者為外來流動人口，加上本研究樣本量相對小，時間跨度小，尚需擴大樣本量、延長隨訪時間及多中心研究等進一步驗證。

[1]Candido S, Maestro R, Polesel J, et al. Roles of neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL) in human cancer [J]. Oncotarget, 2014, 5(6): 1576-1594.

[2]Bauer M, Eickhoff JC, Gould MN, et al. Neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL) is a predictor of poor prognosis in human primary breast cancer [J]. Breast Cancer Res Treat, 2008, 108(3): 389-397.

[3]Cho H, Kim JH. Lipocalin2 expressions correlate significantly with tumor differentiation in epithelial ovarian cancer [J]. J Histochem Cytochem, 2009, 57(5): 513-521.

[4]Bousserouel S, Kauntz H, Gosse F, et al. Identification of gene expression profiles correlated to tumor progression in a preclinical model of colon carcinogenesis [J]. Int J Oncol, 2010, 36(6): 1485-1490.

[5]Wang HJ, He XJ, Ma YY, et al. Expressions of neutrophil gelatinase-associated lipocalin in gastric cancer: a potential biomarker for prognosis and an ancillary diagnostic test [J]. Anat Rec (Hoboken), 2010, 293(11): 1855-1863.

[6]Kubben FJ, Sier CF, Hawinkels LJ, et al. Clinical evidence for a protective role of lipocalin-2 against MMP-9 autodegradation and the impact for gastric cancer [J]. Eur J Cancer, 2007, 43(12): 1869-1876.

[7]Nuntagowat C, Leelawat K, Tohtong R. NGAL knockdown by siRNA in human cholangiocarcinoma cells suppressed invasion by reducing NGAL/MMP-9 complex formation [J]. Clin Exp Metastasis, 2010, 27(5): 295-305.

[8]Jawhari AU, Buda A, Jenkins M, et al. Fascin, an actin-bundling protein, modulates colonic epithelial cell invasiveness and differentiation in vitro [J]. Am J Pathol, 2003, 162(1): 69-80.

[9]Yang J, Bielenberg DR, Rodig SJ, et al. Lipocalin 2 promotes breast cancer progression [J]. Proc Nail Acad Sci U S A, 2009, 106(10): 3913-3918.

[10]Wang Z, Fan P, Gu H, et al. Expression of neutrophil gelatinase-associated lipocalin in gastric mucos infected with Helicobacter pylori and its clinical significance [J]. Journal of Lanzhou University (Medical Sciences), 2012, 38(4): 1-5. 王卓, 樊平, 谷弘, 等. 中性粒細胞相關載脂蛋白在感染幽門螺桿菌的胃黏膜中的表達情況及其臨床意義[J]. 蘭州大學學報(醫學版), 2012, 38(4): 1-5.

[11]Krewulak KD, Vogel HJ. Structural biology of bacterial iron uptake [J]. Biochim Biophys Acta, 2008, 17(78): 1781-1804.

(責任編輯：馬 軍)

The clinical significance and level of serum neutrophil gelatinase-associated lipocalin in human gastric cancer

LIN Jianjiao, LIU Yan, HU Hongsong, WAN Yanbin, CHEN Chunlin

Department of Gastroenterology, Longgang District People’s Hospital of Shenzhen, Shenzhen 518172, China

Objective To explore the clinical significance of serum neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL) levels in human gastric cancer.Methods Serum NGAL level was determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in 40 gastric cancer patients and 28 healthy controls who were collected from the Longgang District People’s Hospital of Shenzhen from Jan.2011 to Jun. 2012. The relationship of serum NGAL level and clinical pathological features in gastric cancer patients was examined, and then its diagnostic performance for screening gastric cancer was evaluated byROCcurve between NGAL and CEA. Otherwise, Cox survival analysis was performed to examine the relationship between serum NGAL level and prognosis in human gastric cancer.Results Serum NGAL level in patients with human gastric cancer was significantly higher than that in healthy controls (P<0.01), and it was correlated with Lauren’s classification, lymph node metastasis, vascular invasion, distant metastasis and the TNM stage of gastric cancer. Furthermore, when the optimal cut-off point of serum NGAL level for diagnosing gastric cancer was 12.51 ng/ml, the sensitivity and specificity were 84% and 90%.Conclusion The potential of serum NGAL level as an early marker and its ability to predict the prognosis of patients with gastric cancer are estimated.

Gastric cancer; Neutrophil gelatinase-associated lipocalin; Diagnosis; Prognosis

10.3969/j.issn.1006-5709.2016.06.012

林建姣，碩士，主治醫師，研究方向：胃腸腫瘤。E-mail: linjeana@126.com

劉艷，碩士，副主任醫師，研究方向：胰腺疾病及胃腸腫瘤。E-mail: 793467870@qq.com

R735.2

A

1006-5709(2016)06-0642-04

2015-07-16