MACC1、HGF、c-Met蛋白在胃癌組織中的表達及意義

谷光福,朱正秋

1.徐州醫學院研究生學院, 江蘇 徐州 221000; 2.徐州醫學院附屬醫院腫瘤內科

MACC1、HGF、c-Met蛋白在胃癌組織中的表達及意義

谷光福1,朱正秋2

1.徐州醫學院研究生學院, 江蘇 徐州 221000; 2.徐州醫學院附屬醫院腫瘤內科

目的 探討胃癌組織中結腸癌轉移相關基因-1 (metastasis-associated in colon cancer-1， MACC1)、肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor， HGF)、肝細胞生長因子受體(mesenchymal epithelial transition factor， c-Met)的表達與臨床病理參數的關系及其意義。方法 應用免疫組化方法檢測129例胃癌患者手術切除的癌組織及癌旁正常組織中MACC1、HGF、c-Met的表達情況，分析其與胃癌臨床病理參數之間的關系及在胃癌組織中表達的相關性。結果 MACC1、HGF、c-Met在胃癌組織中的表達顯著高于癌旁正常組織(P<0.05)。MACC1在胃癌組織中的表達與性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤部位、有無淋巴結轉移、有無腹膜轉移、總生存時間(OS)、無病生存時間(DFS)無關(P>0.05)，而與腫瘤浸潤深度、TNM分期、組織分化程度顯著相關(P<0.05)。HGF在胃癌組織中的表達與性別、年齡、腫瘤部位、有無腹膜轉移無關(P>0.05)，而與腫瘤大小、浸潤深度、有無淋巴結轉移、TNM分期、組織分化程度、OS(5年)、DFS(5年)顯著相關(P<0.05)。c-Met在胃癌組織中的表達與性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤部位、有無腹膜轉移無關(P>0.05)，而與腫瘤浸潤深度、有無淋巴結轉移、TNM分期、組織分化程度、OS(5年)、DFS(5年)顯著相關(P<0.05)。在胃癌組織中，MACC1與HGF的表達呈正相關(r=0.182,P<0.05)，MACC1與c-Met的表達呈正相關(r=0.508,P<0.05)，HGF與c-Met的表達呈正相關(r=0.523,P<0.05)。結論 MACC1、HGF、c-Met在胃癌組織中的表達顯著升高，三者與胃癌的發生、發展密切相關，可能協同參與胃癌的進程。

胃癌； MACC1； HGF； c-Met； 免疫組化

在我國，胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，2012年我國胃癌發病率和死亡率分別占惡性腫瘤的第2位和第3位[1]。胃癌早期多無明顯自覺癥狀，發現時多已是中、晚期,導致治療效果較差，探尋新的治療措施刻不容緩。除了改進原有的傳統治療措施，近年來靶向治療已成為國際上的研究重點，尋找合適的腫瘤治療靶點已經成為可能治愈惡性腫瘤的希望，在乳腺癌、肺癌、淋巴瘤等惡性腫瘤中已經有許多靶向治療藥物，而針對胃癌有效的靶向治療藥物卻很少。結腸癌轉移相關基因-1(matastasis-associated in colon cancer-1,MACC1)肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)、肝細胞生長因子受體(mesenchymal-epithelial factor,c-Met)與胃癌的發生、發展、復發、轉移可能存在相關性，而3種蛋白與胃癌臨床病理的相關性研究較少，本試驗采用免疫組化技術檢測胃癌組織及其癌旁正常組織中MACC1、HGF、c-Met蛋白的表達，分析其與胃癌臨床病理之間的關系，并分析三者在胃癌組織中表達的相關性。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選取2009年 1 月-2010 年 12 月于徐州醫學院附屬醫院外科行根治性手術的胃癌患者手術切除標本。納入標準：無合并其他惡性腫瘤或者胃癌復發后再次手術者，臨床病理資料完整，術前未行放化療及其他抗腫瘤治療，無腫瘤殘存，手術病理診斷明確為胃癌，可以完成隨訪。共收集129例患者納入研究，男89例，女40例。年齡23～85歲，中位年齡59歲。

1.2 主要試劑 MACC1兔多克隆抗體、HGF兔多克隆抗體、c-Met兔單克隆抗體購自美國 abcam公司，兔SP 免疫組化檢測試劑盒、DAB顯色試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 實驗方法 通過組織芯片行免疫組化實驗，組織芯片在徐州醫學院病理教研室老師的指導協助下制作完成。采用免疫組化SP法進行檢測，具體實驗操作步驟按照試劑盒說明書進行。

1.4 免疫組化結果判定 所有結果均由2位有經驗的病理科醫師閱片后，取得一致意見得出。每張切片高倍鏡(400×)下隨機選取10個視野，每個視野計數100個細胞，計算陽性細胞百分比，然后求其平均值。MACC1陽性主要定位于細胞質，少量位于細胞核；c-Met陽性定位于細胞膜、細胞質；HGF陽性定位于細胞質。判斷標準[2]：(1)細胞著色程度判定(染色深淺需與背景著色相對比)：0分(不著色)，1分(淡黃色)，2分(棕黃色)，3分(棕褐色)；(2)陽性細胞所占的百分比判定：0分(無陽性細胞表達)，1分(陽性細胞≤10%)，2分(陽性細胞11%～50%)，3分 (陽性細胞51%～75%)，4分(陽性細胞>75%)。根據兩項評分之積，≤3分為陰性表達，>3分為陽性表達。用 PBS 代替一抗作為陰性對照，用已知陽性組織切片作為陽性對照。

1.5 統計學分析 采用 SPSS 19.0 統計軟件，率的比較使用 Pearson χ2檢驗。胃癌組織中MACC1、HGF、c-Met蛋白表達之間的相關性采用列聯相關性分析。α=0.05為檢驗水準，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 免疫組化檢測胃癌及癌旁正常組織中MACC1、HGF、c-Met蛋白的表達 胃癌組織及癌旁正常組織中MACC1陽性表達率分別為80.6%(104/129)和31.8%(41/129)，差異有統計學意義(P=0.000)；胃癌組織及癌旁正常組織中HGF陽性表達率分別為79.8%(103/129)和45.7%(59/129)，差異有統計學意義(P=0.000)；胃癌組織及癌旁正常組織中c-Met陽性表達率分別為82.9%(107/129)和24.8%(32/129)，差異有統計學意義(P=0.000)(見圖1)。

圖1 MACC1、HGF、c-Met蛋白在胃癌組織及癌旁正常組織中的表達(200×) A:癌旁正常組織MACC1蛋白陽性表達;B:胃癌組織MACC1蛋白陽性表達;C:癌旁正常組織HGF蛋白陽性表達;D:胃癌組織HGF蛋白陽性表達;E:癌旁正常組織c-Met蛋白陽性表達;F:胃癌組織c-Met蛋白陽性表達

Fig 1 The expressions of MACC1, HGF and c-Met proteins in gastric cancer tissues and adjacent normal tissues(200×) A: positive expression of MACC1 protein in adjacent tissues; B: positive expression of MACC1 protein in gastric cancer tissues; C: positive expression of HGF protein in adjacent normal tissues; D: positive expression of HGF protein in gastric cancer tissues; E: positive expression of c-Met protein in adjacent normal tissues; F: positive expression of c-Met protein in gastric cancer tissues

2.2 MACC1、HGF、c-Met蛋白在胃癌組織中的表達與臨床病理參數之間的關系 MACC1在胃癌組織中的表達與性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤部位、有無淋巴結轉移、有無腹膜轉移、OS(5年)、DFS(5年)無關(P>0.05)，而與腫瘤浸潤深度、TNM分期、組織分化程度顯著相關(P<0.05)；HGF在胃癌組織中的表達與性別、年齡、腫瘤部位、有無腹膜轉移無關(P>0.05)，而與腫瘤大小、浸潤深度、有無淋巴結轉移、TNM分期、組織分化程度、OS(5年)、DFS(5年)顯著相關(P<0.05)；c-Met在胃癌組織中的表達與性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤部位、有無腹膜轉移無關(P>0.05)，而與腫瘤浸潤深度、有無淋巴結轉移、TNM分期、組織分化程度、OS(5年)、DFS(5年)顯著相關(P<0.05)(見表1)。

表1 胃癌組織中MACC1、HGF、c-Met蛋白的表達與臨床病理參數的關系[例數(%)]

Tab 1 The relationship of the expressions of MACC1, HGF and c-Met protein with the clinicopathological parameters in gastric cancer tissues[n(%)]

臨床病理參數例數MACC1陰性陽性P值HGF陰性陽性P值c?Met陰性陽性P值性別 男8921(23．6)68(76．4)0．07120(22．5)69(77．5)0．32816(18．0)73(82．0)0．677 女404(10．0)36(90．0)6(15．0)34(85．0)6(15．0)34(85．0)年齡(歲) <606515(23．1)50(76．9)0．28413(20．3)52(80．0)0．96514(21．5)51(78．5)0．172 ≥606410(15．6)54(84．4)13(20．0)51(79．7)8(12．5)56(87．5)腫瘤大小(cm) <56314(22．2)49(77．8)0．42519(30．2)44(69．8)0．00613(20．6)50(79．4)0．291 ≥56611(16．7)55(83．3)7(10．6)59(89．4)9(13．6)57(86．4)浸潤深度 T1+T22912(41．4)17(58．6)0．00114(48．3)15(51．7)0．00014(48．3)15(51．7)0．000 T3+T410013(13．0)87(87．0)12(12．0)88(88．0)8(8．0)92(92．0)淋巴結轉移 無4111(26．8)30(73．2)0．14416(39．0)25(61．0)0．00014(34．1)27(65．9)0．000 有8814(15．9)74(84．1)10(11．4)78(88．6)8(9．1)80(90．9)腹膜轉移 無11324(21．2)89(78．8)0．27926(23．0)87(77．0)0．07021(18．6)92(81．4)0．383 有161(6．2)15(93．8)0(0．0)16(100．0)1(6．2)15(93．8)TNM分期 Ⅰ+Ⅱ4815(31．2)33(68．8)0．00917(35．4)31(64．6)0．00117(35．4)31(64．6)0．000 Ⅲ+Ⅳ8110(12．3)71(87．7)9(11．1)72(88．9)5(6．2)76(93．8)組織分化程度 中?高5316(30．2)37(69．8)0．00917(32．1)36(67．9)0．00515(28．3)38(71．7)0．005 低769(11．8)67(88．2)9(11．8)67(88．2)7(9．2)69(90．8)腫瘤部位 其他518(15．7)43(84．3)0．3919(17．6)42(82．4)0．56610(19．6)41(80．4)0．533 胃竇7817(21．8)61(78．2)17(21．8)61(78．2)12(15．4)66(84．6)OS(年) <57212(16．7)60(83．3)0．3817(9．7)65(90．3)0．0016(8．3)66(91．7)0．003 ≥55713(22．8)44(77．2)19(33．3)38(66．7)16(28．1)41(71．9)DFS(年) <57412(16．2)62(83．8)0．2927(9．5)67(90．5)0．0006(8．1)68(91．9)0．002 ≥55513(23．6)42(76．4)19(34．5)36(65．5)16(29．1)39(70．9)

2.3 胃癌組織中MACC1、HGF、c-Met的表達之間的相關性分析 采用列聯相關性分析得出，在129例胃癌組織中MACC1與HGF的表達呈正相關(r=0.182,P<0.05)，MACC1與c-Met的表達呈正相關(r=0.508,P<0.05)，HGF與c-Met的表達呈正相關(r=0.523,P<0.05)。

3 討論

MACC1最早由Stein等[3]在研究結腸癌時發現的一個新的致癌基因，故命名為結腸癌轉移相關因子1，研究發現它可以促進結腸癌細胞的生長、擴散、浸潤及轉移。MACC1主要是通過調控HGF/c-Met信號通路起作用，促進腫瘤增殖和侵襲。國外有研究[4]報道,對174例接受手術治療的結直腸癌患者研究，發現MACC1高表達者更容易發生遠處轉移及預后不良，而低表達者表現出比高表達者更好的無病及總生存期。Phan等[5]研究提示，激活HGF/c-Met信號通路可能增強腎上腺皮質癌生長、腫瘤血管生成、化療抵抗和細胞生存。Zhu等[6]研究提示，MACC1的高表達與食管癌的淋巴結轉移和TNM分期有關，與食管癌的進展和轉移有關。Ge等[7]通過免疫組化檢測結腸癌組織和正常結腸組織得出，MACC1在癌組織中表達明顯高于正常組織，MACC1在結腸癌組織中陽性表達率與淋巴結轉移及腫瘤浸潤深度顯著相關。Li等[8]研究發現，MACC1、HGF及c-Met mRNA在卵巢癌組織中的表達水平顯著高于卵巢良性腫瘤及正常卵巢組織，且在卵巢癌組織中三者之間存在顯著正相關。MACC1在宮頸癌組織中表達高于正常宮頸組織，MACC1表達較高的患者總生存時間較短，MACC1高表達與FIGO分期和淋巴結轉移相關[9]。近年來MACC1在許多腫瘤中已經得到大量的研究，如骨肉瘤[10]、肝細胞癌[11]、腎細胞癌[12]、非小細胞肺癌[13]、膽囊癌[14]等，提示MACC1與多種惡性腫瘤的發生、發展有關。

本試驗主要研究MACC1、HGF、c-Met與胃癌臨床病理之間的關系，免疫組化結果顯示，MACC1、HGF、c-Met蛋白在胃癌組織中的表達顯著高于癌旁正常組織。MACC1在胃癌組織中的表達與腫瘤浸潤深度、TNM分期、組織分化程度顯著相關，HGF的表達與腫瘤大小、浸潤深度、有無淋巴結轉移、TNM分期、組織分化程度、OS(5年)、DFS(5年)顯著相關。 c-Met的表達與腫瘤浸潤深度、有無淋巴結轉移、TNM分期、組織分化程度、OS(5年)、DFS(5年)顯著相關。在胃癌組織中三者的表達成顯著正相關，提示MACC1、HGF、c-Met表達增高對胃癌的發生、發展有協同作用。本試驗結果提示MACC1、 HGF和c-Met的高表達可能與胃癌的發生發展密切相關，且HGF和c-Met的高表達可能提示預后不良。

綜上所述，MACC1、 HGF和c-Met過表達可能參與了胃癌的發生、發展，并可能導致患者的預后不良。本研究可能為胃癌的診斷、治療及評估預后提供新的方向，并可能為胃癌的新藥研制提供新的靶點。

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(責任編輯：馬 軍)

Expressions and significance of MACC1, HGF and c-Met in gastric cancer tissues

GU Guangfu1, ZHU Zhengqiu2

1.School of Postgraduate, Xuzhou Medical College， Xuzhou 221000; 2.Department of Oncology, the Affiliated Hospital of Xuzhou Medical College, China

Objective To investigate the relationship of the expressions of metastasis-associated in colon cancer-1(MACC1), hepatocyte growth factor (HGF) and mesenchymal epithelial transition factor (c-Met) with the clinicopathological parameters in gastric cancer tissues and their significance.Methods The expressions of MACC1, HGF and c-Met in 129 specimens of gastric cancer tissues and adjacent normal tissues were detected by immunohistochemical method.The relationship of the expressions of MACC1, HGF and c-Met with the clinicopathological parameters and their correlations in gastric cancer tissues were analyzed.Results The expressions of MACC1, HGF and c-Met in gastric cancer tissues were significantly higher than those in adjacent normal tissues (P<0.05). The expression of MACC1 in gastric cancer tissues was not related with gender, age, tumor size, tumor location, lymph node metastasis, peritoneal metastasis, OS (5 years), DFS (5 years)(P>0.05), but related with the depth of tumor invasion, TNM stage, histological differentiation (P<0.05). The expression of HGF in gastric cancer tissue was not related with gender, age, tumor location, peritoneal metastasis (P>0.05), but related with tumor size, the depth of tumor invasion, lymph node metastasis,TNM stage, histological differentiation, OS (5 years), DFS (5 years)(P<0.05). The expression of c-Met in gastric cancer tissues was not related with gender, age, tumor size, tumor location, peritoneal metastasis (P>0.05), but related with the depth of tumor invasion, lymph node metastasis,TNM stage, histological differentiation, OS (5 years), DFS (5 years)(P<0.05). In gastric cancer, the expressions of MACC1 and HGF were positively correlated (r=0.182,P<0.05), the expressions of MACC1 and c-Met were positively correlated (r=0.508,P<0.05), the expressions of HGF and c-Met were positively correlated (r=0.523,P<0.05). Conclusion The expressions of MACC1, HGF and c-Met in gastric cancer were significantly increased, closely related to the occurrence and development of gastric cancer, and they might cooperatively participate in the malignant progression of gastric cancer.

Gastric cancer; MACC1; HGF; c-Met; Immunohistochemistry

江蘇省衛生廳基金(H201323)

谷光福，碩士研究生，研究方向：消化道腫瘤的綜合防治。E-mail：498618923@qq.com

朱正秋，教授，研究方向：消化道腫瘤的綜合防治。E-mail：js82880999@126.com

10.3969/j.issn.1006-5709.2016.11.006

R735.2

A

1006-5709(2016)11-1229-04

2016-03-04