血清抗M型磷脂酶A2受體抗體與成人特發性膜性腎病危險性的相關性研究*

延安大學附屬醫院腎內科(延安716000)

劉　延　楊小娟

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血清抗M型磷脂酶A2受體抗體與成人特發性膜性腎病危險性的相關性研究*

延安大學附屬醫院腎內科(延安716000)

劉延楊小娟

摘要目的：探討血清中抗M型磷脂酶A2受體抗體和成人特發性膜性腎病的相關性，以及抗體滴度和患者嚴重程度的關系。方法：本次研究收集了128例患者，半定量檢測被試者血清中抗M型磷脂酶A2受體抗體，定量檢測被試者血清中抗M型磷脂酶A2受體抗體。結果：血清中抗M型磷脂酶A2受體抗體在特發性膜性腎病病人血液中特異性存在，完全緩解和部分緩解患者血清中抗M型磷脂酶A2受體抗體明顯減少。結論：血清中抗M型磷脂酶A2受體抗體的存在或許可作為成人特發性膜性腎病的生物學標記物并用于評估病情。

主題詞腎小球腎炎, 膜性@抗M型磷脂酶A2受體抗體

特發性膜性腎病(Idiopathic membranous nephropathy, IMN)不同于繼發性膜性腎病(Secondary membranous nephropathy, SMN)是在成人中導致腎病綜合征的常見原因。近年來，對膜性腎病病理學的研究有了比較深入的研究， Beck等發現人腎小球足細胞膜上表達的M型磷脂酶A2受體(M-type receptor of secretory phospholipase A2，PLA2R)是成人IMN患者體內主要的自身靶抗原，雖然足細胞上的其他一些自身抗原，譬如超氧化物歧化酶和α-烯醇化酶等也可能參與了特發性膜性腎病的發生，但M型PLA2R的重要性已得到了公認。我們對成年IMN患者和SMN患者血清中的血清抗M型PLA2R抗體進行了檢測，以確定其與成人特發性膜性腎病危險性的相關性。

對象與方法

1對象本研究收集了我院2010年3月至2015年3月IMN患者及SMN患者。所有患者均經過腎穿刺活檢，尿蛋白均≥3.5 g。本研究中包括IMN患者103例,其中男53例，女50例，平均年齡54.3±8.4歲。SMN組患者25例，其中男16例，女9例，平均年齡59.1±6.5歲。兩組一般情況無顯著差異(P<0.05)，具有可比性。

2方法所有入組對象空腹采集靜脈血，低溫離心機中4℃，3000 rpm離心得血清。

血清抗PLA2R抗體半定量檢測：采用western blot進行半定量檢測。血清樣品加上上樣緩沖液，混勻，100℃煮5min。將制備的血清蛋白樣品80V下跑30min，120V下120min。再將分離膠上的蛋白轉至硝酸纖維素膜上，然后用抗體檢測。以GAPDH作為內參計算分析各條帶的灰度。

血清抗PLA2R抗體定量檢測：采用ELISA進行定量檢測。在用純化的重組PLA2R包被的微孔板上依次加入已知濃度的標準品和待檢樣品，再加入生物素標記的抗 IgG 抗體。在酶標儀下讀取吸光光度值。通過標準曲線讀取血清樣品中的人抗M型磷脂酶A2受體抗體(Anti-PLA2R)的濃度。

3統計學方法采用Graphpad進行數據分析。計算組間統計學差異采用ttest檢驗，P?0.05時認為有統計學差異。

結果

1IMN患者治療前、治療后血清抗PLA2R抗體半定量分析膜性腎病緩解標準我們采用了“改善全球腎臟病預后組織”公布的標準[1]：尿蛋白<0.3 g為完全緩解，<3.5 g為部分緩解。按上述標準將特發性膜性腎病患者分為完全緩解組、部分緩解組和未緩解組。其中完全緩解組21例，部分緩解組48例。所有血液樣品均用western blot進行檢測，western blot的結果分為IMN患者治療前、完全緩解IMN患者治療后、部分緩解IMN患者治療后以及未緩解IMN患者治療后四組來進行統計。完全緩解組和部分緩解組相比治療前都有統計學差異，而未緩解組相比治療前并無統計學差異。以上結果表明完全緩解組和部分緩解組的病人的血清抗PLA2R抗體相比治療前有明顯減少，而未緩解組的血清抗PLA2R抗體并無明顯變化。

2IMN患者以及SMN患者治療前、治療后血清抗PLA2R抗體定量分析ELISA的結果分為完全緩解IMN患者治療前、完全緩解IMN治療后、部分緩解IMN治療前、部分緩解IMN治療后、未緩解IMN治療前、未緩解IMN治療后、完全緩解SMN治療前、完全緩解SMN治療后、部分緩解SMN治療前、部分緩解SMN治療后、未緩解SMN治療前以及未緩解SMN治療后一共十二組來進行統計。結果顯示：完全緩解組、部分緩解組以及未緩解組患者血清中的抗PLA2R抗體相比治療前都有明顯減少，但在未緩解組中治療后滴度仍保持在較高的水平。而在繼發性膜性腎病患者血清中一直很少檢測到抗PLA2R抗體。以上結果提示我們血清抗PLA2R抗體和特發性膜性腎病嚴重程度的相關性，見附表。

附表　治療前后血清抗PLA2R抗體滴度的比較

討論

特發性膜性腎病作為很常見的誘發腎病綜合征的疾病，它的臨床檢驗還多數依賴于組織活檢，這樣的檢驗方式創傷大，給患者造成較大的損傷和不便。血清中抗M型磷脂酶A2受體抗體在特發性膜性腎病中是否特異存在以及抗M型磷脂酶A2受體抗體表達水平和尿蛋白水平以及疾病預后可能都有一定的相關性[2～6]。但是國內這方面的數據并不充分[7]，我們取得我院腎內科特發性膜性腎病和繼發性膜性腎病的患者血液樣本，應用半定量的方法證明了血清中抗M型磷脂酶A2受體抗體在特發性膜性腎病病人血液中的特異性存在，并發現完全緩解和部分緩解病人血清中抗M型磷脂酶A2受體抗體明顯減少。而運用定量檢測，我們進一步證實了抗M型磷脂酶A2受體抗體的表達與特發性膜性腎病的直接相關性。我們還發現，治療后未緩解組患者血清中的抗體滴度明顯高于完全緩解組和部分緩解組的患者，這為我們預測患者的病情以及設計更有效更適合患者的治療方案提供了思路。

參考文獻

[1]Chadban SJ. KHA-CARI guideline: KHA-CARI adaptation of the KDIGO Clinical Practice Guideline for the Care of Kidney Transplant Recipients[J]. Nephrology (Carlton)， 2012，17(3):204.

[2]Hoxha E. Phospholipase A2receptor autoantibodies and clinical outcome in patients with primary membranous nephropathy[J]. J Am Soc Nephrol,2014,25(6):1357.

[3]Kanigicherla D. Anti-PLA2R antibodies measured by ELISA predict long-term outcome in a prevalent population of patients with idiopathic membranous nephropathy[J]. Kidney Int,2013,83(5):940.

[4]Bech AP. Association of anti-PLA(2)R antibodies with outcomes after immunosuppressive therapy in idiopathic membranous nephropathy[J]. Clin J Am Soc Nephrol, 2014,9(8):1386.

[5]Segarra-Medrano A. Evolution of antibody titre against the M-type phospholipase A2receptor and clinical response in idiopathic membranous nephropathy patients treated with tacrolimus[J]. Nefrologia,2014,34(4):491-7.

[6]Hofstra JM. Antiphospholipase A2receptor antibody titer and subclass in idiopathic membranous nephropathy[J]. J Am Soc Nephrol,2012,23(10):1735.

[7]楊永超，劉曉青，馬寶梅，等.葉傳蕙教授治療特發性膜性腎病經驗[J].陜西中醫，2015，36(1)：78-80.

(收稿：2015-12-05)

The correlation of anti-phospholipase A2receptor antibodies with idiopathic membranous nephropathy in adult

Department of Nephrology,Affiliated Hospital of Yan′an University(Yan′an 716000)

Liu Yan

ABSTRACTObjective: To assess the correlation between Anti-M-type receptor of secretory phospholipase A2 and idiopathic membranous nephropathy. Methods: This study collected 128 cases from2010 to 2015 and detect Anti-M-type receptor of secretory phospholipase A2. Results: Anti-M-type receptor of secretory phospholipase A2 can be detected in patients' serum instead of normal people. And in recovered patients, the amount of anti-M-type receptor of secretory phospholipase A2 decreased obviously. Conclusion: Anti-M-type receptor of secretory phospholipase A2 may be a biomarker of idiopathic membranous nephropathy, and it may also be used to evaluate patients' condition.

KEY WORDSGlomerulonephritis,membranous@M-type receptor of secretory phospholipase A2

【中圖分類號】R692.6

【文獻標識碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.04.005

*陜西省延安市科學技術研究發展計劃項目(2012KW-12)