死后細(xì)菌學(xué)檢測(cè)在死因鑒定中的作用初探

黃鴻江　張彬云

武宣縣公安局，廣西　武宣　545900

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死后細(xì)菌學(xué)檢測(cè)在死因鑒定中的作用初探

黃鴻江張彬云

武宣縣公安局，廣西武宣545900

摘要：目的：評(píng)價(jià)死后細(xì)菌學(xué)檢測(cè)在死因鑒定中的作用。方法：取健康SD大鼠30只，10只采用頸椎脫臼法處死納入A組，10只制作缺氧缺血模型20min確認(rèn)死亡納入B組，10只注射金黃色葡萄球菌納入C組，不給于治療，待死亡，分別在死后3、6、9日，取后肢深部肌肉，采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)ATP水平，另取30只SD大鼠，同法處死，分別在死后第1-10日，采樣取后肢深部肌肉、肝臟、脾臟、腎臟組織，進(jìn)行細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)鏡檢。結(jié)果：以ATP濃度對(duì)數(shù)值作為橫坐標(biāo)，以相對(duì)發(fā)光單位的對(duì)數(shù)值作為橫坐標(biāo)，呈一元線性方程Y=0.815X+9.015，R2=0.998，P<0.01；A組、B組、C組死后第3日、6日、9日ATP組間與組內(nèi)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；普通培養(yǎng)、厭氧培養(yǎng)，A組、B組、C組肌肉、肝臟、脾臟、腎臟細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性出現(xiàn)時(shí)間、優(yōu)勢(shì)菌類型差存在差異。結(jié)論：死后細(xì)菌學(xué)檢測(cè)可用于死因鑒定中，ATP、細(xì)菌培養(yǎng)與鑒定等都可作為死因判斷依據(jù)，但檢測(cè)結(jié)果受觀察時(shí)間等因素影響，同時(shí)是否適用于野外大型動(dòng)物死亡尚無(wú)明確定論。

關(guān)鍵詞：死因；細(xì)菌學(xué)檢查；司法鑒定

死因鑒定是司法鑒定的基礎(chǔ)工作，是法醫(yī)學(xué)鑒定需解決的關(guān)鍵問(wèn)題，重要性僅次于死亡時(shí)間。但需注意的是，死亡24h之內(nèi)，尸體尚未發(fā)生腐敗，但死亡24h后，尸體便逐年開(kāi)始腐敗，出現(xiàn)各種晚期尸體現(xiàn)象，出現(xiàn)各種細(xì)菌滋生、繁殖，尸體組織形態(tài)逐漸崩解、內(nèi)源性化學(xué)物質(zhì)不斷降解，難以建立相應(yīng)的死后細(xì)菌學(xué)檢查體系。目前尚無(wú)一個(gè)確切、完整、系統(tǒng)的“法醫(yī)微生物學(xué)”概念與理論，但法醫(yī)學(xué)、微生物交叉融合內(nèi)容已較豐富。

一、材料與方法

(一)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與材料

取健康SD大鼠30只，雌雄不限，體重150-200g，隨機(jī)分為10組，其中10只采用頸椎脫臼法處死納入A組，10只制作缺氧缺血模型20min確認(rèn)死亡納入B組，10只注射金黃色葡萄球菌納入C組，不給于治療，待死亡。分別在死后3、6、9日，取大鼠尸體，按照無(wú)菌操作要求，取后肢深部肌肉，準(zhǔn)確稱量成若干份，每份100mg，編號(hào)放入滅菌EP管，-70℃凍存待測(cè)。設(shè)備采用TD-20/20Luminometer、ATP、APyrase等與相關(guān)檢測(cè)試劑盒。另取30只SD大鼠，同法處死，分別在死后第1-10日，采樣取后肢深部肌肉、肝臟、脾臟、腎臟組織。

(二)方法

1.檢測(cè)組織中微生物ATP

取樣本0.10g 2ml無(wú)菌均漿器中，加入0.9ml 4℃無(wú)菌生理鹽水，均漿，收集5ml放入無(wú)菌EP管中，1ml無(wú)菌生理鹽水振洗，3次，混勻3000r/min離心5min。取離心后樣品上層清洗50μl檢測(cè)管內(nèi)，加入50μ Triton X-100與腺苷三磷酸雙磷酸酶混合液，37℃賦予10min，沸水水浴1min，加入100μl BacTier-GloTM檢測(cè)液，孵育5min，檢測(cè)發(fā)光值，以無(wú)菌生理鹽水作為空白，計(jì)算ATP標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.菌種培養(yǎng)鑒定

獲得均漿，接種，以分區(qū)劃線法接種于培養(yǎng)皿中，每份樣品接種2份，分別在37℃有氧條件和37℃無(wú)氧條件下培養(yǎng)24h。采用接種環(huán)刮培養(yǎng)菌落，涂抹在栽載玻片中央，酒精燈烤制細(xì)菌涂片，采用Granm染色法染色，油鏡下觀察細(xì)菌形態(tài)。

(三)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

二、結(jié)果

(一)微生物ATP

以ATP濃度對(duì)數(shù)值作為橫坐標(biāo)，以相對(duì)發(fā)光單位的對(duì)數(shù)值作為橫坐標(biāo)，呈一元線性方程Y=0.815X+9.015，R2=0.998，P<0.01。A組：死后第3日、6日、9日，-Log([ATP])分別為(10.63±0.14)%、(7.81±0.11)%、(8.17±0.12)%，B組則為(7.82±0.15)%、(6.17±0.12)%、(7.52±0.20)%，C組則為(12.7±1.27)%、(10.6±6.42)%、(11.8±6.20)%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

(二)菌種培養(yǎng)鑒定

普通培養(yǎng)，A組與B組1-3日，肌肉、肝臟、脾臟、腎臟均無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，C組脾臟、腎臟細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性。均厭氧培養(yǎng)后，A組3-10日組織均有細(xì)菌長(zhǎng)出，主要為G-小桿菌，死后7-10日出現(xiàn)G+大桿菌，B組3-5日組織有細(xì)菌長(zhǎng)出，6-10日見(jiàn)G-小桿菌，C組組織見(jiàn)金黃色葡萄糖球菌，3-5日出現(xiàn)桿菌。

三、討論

從本次研究結(jié)果來(lái)看，不同死因大鼠在不同時(shí)間段得到的不同后肢深部組織微生物ATP含量存在顯著差異，不同死因大鼠在不同時(shí)間段得到的不同組織細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性出現(xiàn)時(shí)間、優(yōu)勢(shì)菌結(jié)果存在一定差異，反映死因、死亡時(shí)間對(duì)微生物的繁殖存在顯著影響，不僅影響微生物含量還影響微生物含量。但需注意的是，受死亡環(huán)境、尸體所在環(huán)境、尸體大小等因素影響，不同類型尸體腐敗速度、細(xì)菌類型定然存在差異，該法是否可作為野外死亡人的死因鑒定尚存在異議，但在發(fā)現(xiàn)較早、醫(yī)院死亡及時(shí)冷凍的尸體死因鑒定中有一定價(jià)值。

[參考文獻(xiàn)]

[1]趙子琴.法醫(yī)病理學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2009.

中圖分類號(hào)：D919.4

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：2095-4379-(2016)16-0150-01

作者簡(jiǎn)介：黃鴻江(1978-)，男，壯族，廣西武宣人，本科，武宣縣公安局，法醫(yī)師(初級(jí))，研究方向：法醫(yī)學(xué)。