纖維蛋白原基因FGG10034C＞T基因多態性與缺血性腦卒中的關系的研究

李順霞 徐會圃 崔艷芳 任金來 彭新國 紀冰

纖維蛋白原基因FGG10034C＞T基因多態性與缺血性腦卒中的關系的研究

李順霞 徐會圃 崔艷芳 任金來 彭新國 紀冰

目的 探討纖維蛋白原基因FGG10034C＞T基因多態性與缺血性腦卒中的關聯性，尋找缺血性腦卒中的遺傳易感性因素，以期從分子水平闡明缺血性腦卒中的發病機制。方法 回顧性收集100例臨床診斷為缺血性腦卒中(IS)的患者資料作為病例組及101例健康查體者的臨床資料作為對照組，應用聚合鏈反應-限制性片段長度多態性（PCR-RFLP）進行基因多態性分析。結果 FGG10034C＞T位點T/T基因型及T等位基因在缺血性腦卒中組出現的頻率(分別為14%、33.5%)明顯高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論 纖維蛋白原基因FGG10034C＞T位點與缺血性腦卒中有關聯，可能是一個遺傳學的危險因素。

纖維蛋白原基因；多態性；缺血性腦卒中

隨著生活水平的提高，腦血管疾病、心臟病、惡性腫瘤成為人類的三大致死疾病，腦血管疾病因其高發病率、高致殘率、高致死率的“三高”嚴重威脅人們的生活質量和健康水平。近期的流行病學研究表明,在中國腦卒中的發病率約為110～180／10萬；年死亡率約為80～120／10萬，而這一數據在近年來仍有上升的趨勢[1-2]。缺血性腦卒中(ischemic stroke，IS)的發病率占急性腦血管病的75%，是腦血管意外中最常見和最嚴重的一類。許多流行病學資料和研究表明，缺血性腦卒中有一定家族聚集性，有卒中陽性家族史者較同年齡、同性別同等危險因素下的陰性家族史者更易患腦卒中。血漿纖維蛋白原(fibrinogen，Fib)水平增高是缺血性心血管疾病發生發展的一個獨立危險因素[3]。其編碼區的單核苷酸多態性（single nucleotide polymorphism，SNP）所致纖維蛋白原結構和功能的異常與血栓性疾病密切相關。本實驗研究纖維蛋白原FGG10034基因多態性與缺血性腦卒中的關系，為腦血管病的防治提供依據。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2010年1月～2012年1月濱州醫學院附屬醫院臨床診斷為缺血性腦卒中的100例患者作為IS組，所收集臨床患者均由CT或MRI確診。再選取同時期同年齡組的101例健康查體者的臨床資料作為對照組。所有病例均排除出凝血障礙性疾病，近期嚴重感染，輸血，近期內的手術，服用激素或免疫抑制劑。其中IS組平均年齡（59.63±5.80）歲，男69例，女31例；對照組平均年齡（61.09±6.50）歲，男67例，女34例，2組患者一般資料比較差異無統計學意義，具有可比性。

1.2 研究方法

1.2.1 DNA的提取 抽取靜脈血2mL，EDTA-2K抗凝。采用碘化鉀法從人全血中抽提基因組DNA。

1.2.2 引物合成及PCR Primer5.0軟件設計引物。選擇大連寶生物公司合成。限制性內切酶KpnI對擴增產物進行酶切。

1.3 統計學方法 所有數據應用SPSS17.0統計軟件處理，計量資料“x±s”表示，采用t檢驗。χ2檢驗比較FGG基因各危險因素在IS及對照組間的分布差異，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

纖維蛋白原基因FGG10034C＞T位點經Taq DNA聚合酶擴增101例正常對照和100例缺血性腦卒中病例標本，結果均能擴增出91bp的基因片段，經限制性內切酶KpnI酶切后，CC基因型結果顯示2條色帶，分別為42BP和49bp。而TT基因型缺少酶切位點不能被剪切，在3%瓊脂糖凝膠電泳后只有一條91bp的色帶如圖1。

圖1 FGG片段酶切結果

3 討論

Fib是由肝細胞合成分泌的一種糖基化蛋白，不僅參與凝血過程及血栓形成，還可以直接作用于血管內皮細胞，導致內皮細胞功能障礙，增加血管的通透性，使液體和蛋白漏出[4]。一個纖維蛋白原單位由Aα、Bβ和γ三對對稱排列的肽鏈組成，這3對肽鏈分別由由位于第四號染色體的長臂(q23"～q32)上的3個不連續的單拷貝基因FGA，FGB、FGG編碼，長約50kb。Fib基因的轉錄增加其中一條鏈的mRNA的轉錄都可以增加其他兩條鏈mRNA的轉錄，即可增加Fib分子的合成和分泌。

纖維蛋白原基因FGG的總長度約為1314kb，FGG有多個位點存在SPN，國內研究最多的是AαThr312Ala和

BβArg448Lys。對血栓形成性疾病，如心肌梗死、肺栓塞、慢性血栓栓塞性肺動脈高壓等研究較多，腦梗死及其它部位栓塞的相關研究較少。目前國內關于FGG基因多態性位點與血栓性疾病的論著較少。Cheung[5]發現，FGG基因多態性是IS，心肌梗死（MI）等血栓性疾病的保護因素，而Mannial等[6]研究結果則提示FGG基因的多態性是缺血性腦卒中的高危因素。另有研究[7]提示，FGG鏈的N308K可以通過影響Fib形成原纖絲的能力，這一影響可能通過影響D：D和A：fl部分的相互作用而實現。在

2007年，Grünbacher G等的研究結果證實纖維蛋白原FGG基因10034C＞T基因多態性與深靜脈血栓有關聯性很強[8]；而此后Babak Bahadori等得出的實驗結果則提示FGG基因10034位點基因多態性與外周動脈疾病無關[9]。國外尚沒有FGG基因

10034C＞T與缺血性腦卒中相關性的一致結論。

本實驗對纖維蛋白原基因FGG10034C＞T位點多態性分布的檢測結果,對照組CC基因型所占比列約為61.3%，與國外研究的60.9%，相比略高，可能和測量方法不同有關，也可能與基因的種族及地區有關但大體與以往的研究報道的檢測結果一致[9]。基因型中TC型分布較少，約34.7%，TT型約4.0%。對次等位基因的分布進行分析的結果顯示，C等位基因在正常對照組分布顯略高于缺血性腦卒中組，而T等位型基因在缺血性腦卒中組分布顯著高于對照組（P＜0.01），對不同基因型的分析結果顯示，T等位基因與TT基因型均與缺血性腦卒中存在一定的相關性，而CC基因型與缺血性腦卒中無關聯性，說明纖維蛋白原FGG基因10034位點C基因突變為T基因與缺血性腦卒中有關聯性。

目前學術界一直認為IS是環境因素與多組基因多態性及各種危險因素共同作用的結果，單基因多態性的研究往往不能完整解釋多組基因多態性的表型效應，因此缺血性腦卒中和纖維蛋白原基因多態性的關聯性研究還需進一步的研究討論。

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Objective To explore the relationship between the polymorphism of fibrinogen gene FGG10034C ＞ T and ischemic stroke, looking for genetic susceptibility factors of ischemic stroke, in order to elucidate the pathogenesis of ischemic stroke based on molecular level. Methods Fibrinogen gene FGG10034C ＞ T polymorphism was determined by PCR-RFLP in 100 cases of ischemic stroke and 100 controls selected form Binzhou medical school affiliated hospital. Results The frequencies of FGG10034 T/T genotype and T allele in the groups of ischemic stroke group were 14.0%and 33.5%, which were significantly higher than control group (P＜ 0.05). Conclusion There is correlation between the fibrinogen FGG10034 C＞T polymorphism and ISFGG10034 C＞T may be a gnetic risk factors of stroke.

Fibrinogen gene; Polymorphism; Ischemic stroke

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.4.012

濱州醫學院校級科技計劃項目 （BY2011KZ08）

山東 256600 濱州醫學院 (李順霞 徐會圃 崔艷芳 任金來 彭新國 紀冰）