黑虎泉及白石泉泉水中細菌總數的檢測

遲雙會　陳芳

【摘 要】黑虎泉屬于“泉城”濟南的“七十二名泉”之一，很多游客慕名品嘗。隨著環境污染的加劇，泉水還能飲用嗎？本實驗利用平板菌落計數法測定了黑虎泉泉水、白石泉泉水和黑虎泉直飲水中細菌總數，為泉水的飲用提供參考依據。結果顯示，黑虎泉泉水和白石泉泉水細菌總數超過國家飲用水標準，不適合直接飲用。而黑虎泉直飲水的細菌總數符合國家飲用水標準，可以直接飲用。

【關鍵詞】黑虎泉；白石泉；細菌總數

0 引言

黑虎泉是濟南著名旅游景點，位于黑虎泉西路。明代晏壁在《七十二泉》詩云：“石水府色蒼蒼，深處渾如黑虎藏。半夜朔風吹石裂，一聲清嘯月無光。”諸泉參差錯落不已，泉既匯成河，河復又蘊泉，爭相輝映各得佳趣。泉群附近假山平臺，回廊曲徑，夏日綠樹蔭蔭，鳥語蟬鳴，適宜品茗觀景。附近還有瑪瑙、白石、九女、琵琶、南珍珠、任泉、溪中、苗家、胤嗣、匯波、對波、金虎諸名泉及無名泉一處組成黑虎泉群。早在金代以前，黑虎泉已聞名于世。泉水出于深凹形洞穴，通過3個石雕虎頭泉水噴出，波瀾洶洶，水聲喧喧。每年都會吸引大量游客來此游玩。

隨著越來越多游客的到來，我們發現有很多人直接飲用黑虎泉的泉水。雖然泉水常年恒溫18℃，看起來清澈透明，入口也甘甜。很多濟南當地人去接泉水直接回家喝。2015年，濟南市政府在黑虎泉設置了很多直飲水點，很多游客都會慕名品嘗一下甘甜的泉水。未污染的泉水礦物質含量豐富，有機物含量少，但隨著環境污染的加劇，泉水中可能含有大量來自土壤、塵埃、垃圾和污水的細菌，黑虎泉的水還能直接飲用嗎？

如果泉水中細菌總數超標，可能會引起介水傳染病[1]。根據我國飲用水標準，飲用水中細菌總數每ml不超過100個。我國現行的生活飲用水標準檢驗方法GB5750—85中規定，水樣中細菌總數測定是1ml水樣在普通營養瓊脂培養基中37℃經24小時培養所生長的細菌菌落的總數。細菌總數是評價水質污染程度的主要衛生指標。所測定的細菌總數增多說明水被生活廢棄物污染。

本文利用平板菌落計數法檢測黑虎泉泉水中細菌總數，對黑虎泉泉水、白石泉泉水和黑虎泉的直飲水的細菌總數進行測定，為人們的飲水安全提供理論和實踐依據。

1 實驗方法

1.1 實驗樣品及藥品

黑虎泉泉水、白石泉泉水、黑虎泉直飲水。營養瓊脂

1.2實驗儀器設備

高壓滅菌鍋、超凈工作臺、恒溫培養箱、燒杯、玻璃棒、錐形瓶、電子秤、酒精燈、石棉網、量筒、滴管、打火機、酒精、帶塞試管、吸量管

1.3 實驗方法

1.3.1 實驗方法

采用平板涂布培養計數法進行計數[2]。

1.3.2 取樣

綜合考慮市民飲用的泉水量相對多的位置、人群分布、地理環境等因素后， 按照市民取用泉水的習慣，從黑虎泉、白石泉和黑虎泉直飲水采集泉水樣品共3個。按《生活飲用水標準檢驗方法、水樣的采集和保存》進行水樣的采集、保存和運送。

取樣時必須注意盡量選擇在人們經常喝水的地方。

黑虎泉的取樣點選擇黑虎泉最大的取水點，盛于無菌取樣管內。取樣時動作要輕，盡量避免底泥浮起影響水質。

黑虎泉附近的直飲水取樣，水樣不能太滿，置于取樣的無菌管內，做好標記。

黑虎泉群的白石泉取樣，不要采取有雜質的水源。取完樣后應立即進行記錄，內容包括樣品編號，采樣地點。以免混淆。運輸過程中注意防震，以免樣品損壞而損壞樣品取樣的誤差會影響結果。

1.3.3 梯度稀釋

從10ml黑虎泉原液中取1ml，置于相應的含有9ml無菌蒸餾水試管中得到10-1濃度的稀釋原液，再按上述方法依次做成10-2、10-3等一系列梯度稀釋液。其他樣本也按上述方法操作。

1.3.4 菌落計數

涂布培養后，計數每個平板上的菌落數。可用肉眼觀察，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落總數后，求出同稀釋度的各平板平均菌落數，計算原始樣品中每ml的菌落數，進行報告。

2 實驗結果及分析

采用黑虎泉泉水、白石泉泉水和黑虎泉直飲水三個水樣的10-3稀釋培養液。培養24h后取出，進行菌落計數。計數結果如下表1：

表1

通過上面的表格可以看出，黑虎泉泉水和白石泉泉水的細菌總數分別為113cfu/ml和123cfu/ml，對照生活用水國際GB5749-85中規定的菌落總數不超過100cfu/ml，不符合飲用水標準，不能直接飲用，但是可以經過消毒后飲用。黑虎泉直飲水的細菌總數為82cfu/ml，小于100cfu/ml，可以直接飲用。

本實驗選用涂布法檢驗水中細菌總數。標準平板計數法的缺點是一些需氧菌在營養瓊脂深層不易生長，以及一些對熱敏感的細菌在用熱瓊脂傾注時受熱沖擊致死，造成菌數降低，因此選用涂布法檢驗水中細菌總數。

由于本實驗是一個檢測的實驗，存在一個嚴格滅菌的過程。從采樣，到最后的分析，整個過程不僅不能讓其他雜菌污染，而且還得保證樣品中本身細菌的總數基本不損失。

梯度稀釋時分別將黑虎泉泉水、白石泉泉水和黑虎泉直飲水三個水樣培養24h后稀釋至10-3。根據飲用水標準，稀釋至10-3已經足夠，因為飲用水中細菌總數不超過100個/ml，也就是說稀釋至10-3后菌落數會在100個以內。而我們菌落計數的標準是30-300個之間。若所有稀釋度均不在計數區間。如均大于300，則取最高稀釋度的平均菌落數乘以稀釋倍數報告。如均小于30，則以最低稀釋度的平均菌落數乘稀釋倍數報告。如菌落數有的大于300，有的又小于30，但均不在30-300之間，則應以最接近300或30的平均菌落數乘以稀釋倍數報告。如所有稀釋度均無菌落生長，則應按小于1乘以最低稀釋倍數報告。

3 討論

黑虎泉直飲水符合泉水我國生活用水飲用水的細菌總數標準，可以直接飲用。但黑虎泉泉水和白石泉泉水的細菌總數超標，不能直接飲用。但可以經煮沸法消毒后使用。本實驗由于試驗因此條件的局限性以及操作技術水平的局限，可能存在一些誤差。但是對于泉水的飲用有一定的參考價值。

應用平板計數技術測定水中細菌總數時，由于水中細菌種類繁多，它們對營養和其他生長條件的要求差別很大，不可能找到一種培養基在一種條件下，使水中所有的細菌均能生長繁殖。因此，以一定的培養基平板上生長出來的菌落，計算出來的水中細菌總數僅是一種近似值。水中細菌總數測定是測定水中需氧菌、兼性厭氧菌和異養菌的總數。水中細菌總數可作為判定被檢水樣被有機物污染程度的標志，作為日常檢測的七項指標（色度、濁度、細菌總數、大腸菌群、余氯、鐵、錳）之一的細菌總數，能非常直觀地反映水被細菌污染的程度[3]。細菌數量越多，則水中有機質含量越大。但關于水中其他指標的檢測因為時間和實驗條件的限制我們并沒有進行，以后有時間我們會進行水中大腸菌群的數量的測定，水中大腸菌群數可用來判斷水源是否被糞便污染，并可間接推測水源受腸道病原菌污染的可能。這也是我們評估黑虎泉泉水是否可以安全飲用的標準之一。

【參考文獻】

[1]劉鳳蓮，吳惠忠，許秉忠，齊愛，李雪，盧世勇.寧夏城市飲用水微生物學指標與介水傳染病的相關性[J].環境與健康雜志，2014，31（9）：827-828.

[2]管遠志，王艾琳，李堅.醫學微生物學實驗技術[M].北京：化學工業出版社，2006：84-85.

[3]蔣增輝，王幸艷.介紹幾種新的水中細菌總數檢測方法[J].城市給排水.2005，19（2）：15-16.

[責任編輯：張濤]