MACC1與C-met在食管癌組織中的表達及其臨床意義

楊紹廣

(天津市西青醫院 消化內科，天津300383)

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MACC1與C-met在食管癌組織中的表達及其臨床意義

楊紹廣

(天津市西青醫院 消化內科，天津300383)

我國食管癌的發病率和死亡率分別占全球食管癌發病和死亡人數的53.86%和49.26%[1]，早期診斷、治療對于延長患者的生存期、提高生活質量有著重要的意義。腸癌轉移相關基因1(Metastasis-associated in colon cancer 1，MACCl)是近年發現的與結腸癌浸潤轉移密切相關的基因，在結腸癌組織中表達明顯的升高[2]。研究表明，MACCl與結腸癌、卵巢癌以及肺腺癌等多種腫瘤的生長、轉移以及復發的關系較為密切[3，4]。MACCl是肝細胞生長因子/肝細胞生長因子受體(HGF/C-met)信號轉導通路的調節因子，能夠獨立預測結腸癌形成、轉移。本研究檢測了食管癌組織及癌旁組織中C-met與MACC1的表達，并探討其表達的臨床意義，現報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2013年6月至2015年5月我院病理科保存的診斷為食管癌的病理切片86例，另取癌旁組織(距離食管癌5 cm以上)的切除標本86例。患者術前均未接受過化療、放療以及內分泌治療。其中男52例，女34例；年齡38-77歲，平均(48.6±7.3)歲；根據美國癌癥聯合會(AJCC)2009分段標準：胸上段18例，胸中段42例，胸下段26例；臨床病理分期按照食管癌國際TNM分期標準：Ⅰ期17例，Ⅱ期28例，Ⅲ期31例，Ⅳ期10例；有淋巴結轉移46例，無淋巴結轉移40例。

1.2主要試劑MACCl兔抗人多克隆抗體IgG由美國Sigma公司(稀釋濃度1∶300)生產，C-met兔抗人多克隆抗體IgG由北京博奧森生物技術有限公司(稀釋濃度1∶200)生產，兔超敏二步法免疫組織化學檢測試劑盒以及DAB顯色試劑盒均由北京中杉金橋生物技術有限公司生產。

1.3方法使用免疫組織化學法檢測：將組織進行切片(4 μm)，65℃烘烤照30 min后，二甲苯脫蠟，梯度酒精水化。將組織切片置于pH6.0的檸檬酸鈉緩沖液中，微波抗原修復20 min，室溫下置于3%的過氧化氫甲醇溶液中滅活15 min。使用0.01 m/ml pH7.4的PBS緩沖液沖洗5 min，3次。干燥后，滴加兔抗人MACC1多克隆抗體以及兔抗人C-met多克隆抗體，4℃過夜。PBS沖洗3次，加入生物素化二抗工作液，室溫30 min。干燥后，加入DAB顯色劑，室溫5 min后終止顯色。Mayer氏蘇木精復染2 min，梯度乙醇脫水、樹脂封片。

1.4結果判斷陽性對照用已知MACCl、C-met陽性表達的結腸癌組織切片；陰性空白對照用PBS緩沖液代替一抗。對MACC1、C-met的表達水平進行半定量的評估。顯微鏡下計算陽性表達細胞所占的百分數，并對染色的細胞進行染色程度的得分評判。陽性細胞數<5%時為陰性(-)；5%-25%為(+)；26%-50%為(++)；51%-75%為(+++)；超過75%為(++++)，分別記作0-4分。根據熒光的強度分為陰性(0分)，弱(1分)，中等(2分)以及強烈(3分)。

1.5觀察指標測定組織中MACC1與C-met的表達水平，并分析其與食管癌病理特征的關系。

1.6統計學方法使用SPSS17.0軟件系統分析所有的數據，計數資料采用χ2檢驗；相關性分析采用Spearman秩相關檢驗。若P<0.05則判斷差異有統計學意義。

2結果

2.1觀察組及對照組陽性率食管癌組織標本中MACCl、C-met表達的陽性率均顯著高于癌旁組織，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2MACCl、C-met表達與食管癌臨床病理特征的關系MACCl表達與性別、年齡、腫瘤部位均無關(P>0.05)；與分化程度、浸潤深度、TNM分期和淋巴結轉移有關(P<0.05)。C-met表達與性別、年齡、腫瘤部位和浸潤深度均無關(P>0.05)；與分化程度、TNM分期和淋巴結轉移有關(P<0.05)。見表2。

表1　兩組MACCl、C-met陽性率比較(n/%)

注：與對照組比較，aP<0.05。

表2　MACCl、C-met表達與食管癌臨床病理特征的關系

2.3食管癌組織中MACCl、C-met表達的相關性

Spearman相關分析結果表明，食管癌組織中MACCl、C-met表達呈正相關相關(r=0.356，P=0.001)。見表3。

表3　食管癌組織中MACCl、C-met表達的相關性

3討論

由于食管癌早期的臨床癥狀不典型，就診時往往以處于中晚期，5年存活率僅為10%-20%。因此，尋找與其診斷、預后相關的特異分子指標，對于提高食管癌患者的生存率十分重要。

MACC1是2009年由Stein等發現并命名，其與結腸癌的浸潤轉移密切相關，定位于人染色體7p21.1，含有7個外顯子、6個內含子，MACC1蛋白的功能結構域與細胞的信號傳導和凋亡有關，同時，還能結合MET啟動子，激活HGF/MET信號傳導通路，使得C-met的表達明顯的提高[5，6]。研究表明，在胃癌、卵巢癌、肝癌、腦膠質瘤以及肺癌中，MACCl的表達均異常增高，且與腫瘤的浸潤、轉移有密切的關系。C-met蛋白是一種跨膜蛋白，具有酪氨酸激酶活性，由原癌基因C-met編碼表達，被認為是肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)的唯一受體[7]。HGF廣泛分布于人體組織中，在傷口愈合、胚胎發育以及形態變化中均有著十分重要的作用。當配體HGF較好C-met受體后，激活細胞外β亞基的相應位點，信號傳導入細胞內，激活酪氨酸激酶(PTK)，使得C-met受體自身酪氨酸殘基(Tyr)磷酸化，多種信號通路被啟動，從而促進腫瘤細胞的侵襲與遷移[8，9]。

本研究結果表明，食管癌組織標本中MACCl、C-met表達的陽性率顯著高于癌旁組織標本(P<0.05)；MACCl表達與分化程度、浸潤深度、TNM分期和淋巴結轉移密切相關(P<0.05)；C-met表達與與分化程度、TNM分期和淋巴結轉移有關(P<0.05)。Guo[10]等采用免疫組化法檢測了98例胃癌及癌旁組織中MACC1和C-met蛋白的表達，結果顯示，在原發腫瘤中MACC1和C-met蛋白的陽性率分別為61.22%和59.18%，與癌旁組織相比，均具有顯著性差異(P<0.05)；MACC1和C-met的表達密切相關(P<0.05)；MACC1蛋白在胃癌組織中的表達與腹膜轉移、淋巴結轉移以及肝轉移的存在均有密切的關系(P<0.05)，而與性別、年齡、腫瘤大小及部位、臨床階段或遠處轉移無關(P>0.05)。張瑞濤[11]等研究結果顯示，在卵巢上皮性癌中，MACC1、HGF和C-met蛋白的表達異常升高，與臨床分期、組織分化以及淋巴結轉移相關(P<0.05)；MACC1蛋白的表達與HGF和C-met蛋白的表達呈正相關，HGF蛋白與C-met蛋白表達呈正相關(P<0.05)。MACC1蛋白主要通過作用于C-met啟動序列的Sp1位點，使得C-met的表達上調，增強HGF/C-met信號途徑的級聯放大作用[12，13]。

綜上所述，MACCl、C-met與食管癌的病理過程有著十分密切的關系，可以通過聯合檢測MACCl和C-met的表達作為食管癌的早期診斷、惡性程度評估及預后的臨床指導。

參考文獻：

[1]王建軍,洪強,胡叢崗,等.結腸癌轉移相關基因1蛋白在食管癌組織中的表達及其意義[J].中華醫學雜志,2013,93(32):2584.

[2]Stein U,Walther W,Arlt F,et al.MACC1,a newly identified key regulator of HGF-MET signaling,predicts colon cancer metastasis[J].Nat Med,2009,15(1):59.

[3]Shirahata A,Sakata M,Kitamura Y,et al.MACC 1 as a marker for peritoneal-?disseminated gastric carcinoma[J].Anticancer Res,2010,30(9):3441.

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[5]Arlt F1,Stein U.Colon cancer metastasis:MACC1 and Met as metastatic pacemakers[J].Int J Biochem Cell Biol.2009,41(12):2356.

[6]Stein U,Dahlmann M,Walther W.MACC1-more than metastasis Facts and predictions about a novel gene[J].J Mol Med (Berl),2010,88(1):11.

[7]王興名,郭莉,張志強,等.C-met 在新疆哈薩克族與漢族食管鱗癌組織及血清中的表達及意義[J].天津醫藥,2015,43(1):64.

[8]Lim YC1,Han JH,Kang HJ,et al.Over expression of C-met promotes invasion and metastasis of small oral tongue carcinoma[J].Oral Oncol,2012,48(11):1114.

[9]Matsumura A,Kubota T,Taiyoh H,et al.HGF regulates VEGF expression via the C-met receptor downstream pathways,PI3K/Akt,MAPK and STAT3,in CT26 murine cells[J].Int J Oncol,2013,42(2):535.

[10]Guo T,Yang J,Yao J,et al.Expression of MACC1 and C-met in human gastric cancer and its clinical significance[J].Cancer Cell Int,2013,13(1):121.

[11]張瑞濤,史惠蓉,黃好亮,等.MACC1、HGF和C-met蛋白在卵巢上皮性癌中的表達及其意義[J].南方醫科大學學報,2011,31(9):1551.

[12]張玉鵬,李昭宇,魏洪吉,等.MACC1和C-met蛋白在肝細胞癌組織中的表達研究[J].中華普通外科雜志,2013,28(7):534.

[13]Boardman LA.Over expression of MACC1 leads to downstream activation of HGF/MET and potentiates metastasis and recurrence of colorectal cancer[J].Genome Med，2009,21(4):36.

文章編號：1007-4287(2016)05-0791-03

(收稿日期：2015-09-11)