慢性乙型肝炎患者血清中顆粒溶素的變化及臨床意義

柴曉哲 張雪華

慢性乙型肝炎患者血清中顆粒溶素的變化及臨床意義

柴曉哲 張雪華

目的 探討慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B,CHB）患者血清中顆粒溶素含量變化的臨床意義。方法 利用酶聯(lián)免疫法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）測定20例CHB患者和40例健康人血清中顆粒溶素含量的變化，并進行相關(guān)性分析。結(jié)果 CHB組血清中顆粒溶素含量明顯高于健康對照組（P＜0.01）。相關(guān)性分析表明，CHB組血清中顆粒溶素水平與乙肝患者HBV-DNA、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alanine aminotransferase,ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase,AST)水平均無明顯相關(guān)性。結(jié)論 顆粒溶素可能參與CHB的疾病進程，這為研究CHB的病情監(jiān)控和有效治療提供了新的線索。

慢性乙型肝炎；顆粒溶素；ELISA

乙型肝炎是一個嚴重的公共衛(wèi)生問題。全球60億人口中，約一半人口生活在高流行區(qū)，約20億人證明有感染，3～4億人為慢性感染，據(jù)估計全世界每年有超過100萬人死于肝炎引發(fā)的肝癌[1-2]。中國是乙肝病毒的高流行區(qū)之一，其年發(fā)病數(shù)約66萬例，仍然是一個不可小覷的公共衛(wèi)生問題。

顆粒溶素(granulysin, GRA)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種重要的溶細胞顆粒蛋白，屬于皂素樣蛋白(SAPLIP)家族成員，與穿孔素和顆粒酶共同表達于細胞毒性T淋巴細胞和自然殺傷細胞中，參與多種免疫反應(yīng)[3]。現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)，GRA與多種感染性疾病如結(jié)核桿菌感染、病毒感染、細菌感染性疾病中具有非常重要的作用[4]。有研究證實GRA基因表達水平與急性乙型肝炎患者血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase,AST)呈正相關(guān)[3]，提示GRA表達與急性乙型肝炎疾病進程相關(guān)，檢測GRA有助于監(jiān)測患者體內(nèi)細胞免疫,目前GRA與慢性乙型肝炎病毒變化尚未見報道，GRA在慢性乙型肝炎病毒患者中的表達尚未闡明。有鑒于此，我們研究了慢性乙型肝炎（CHB）患者血清中GRA含量的變化，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 CHB組選擇2012年8月～2013年7月在蘇州市第五人民醫(yī)院住院的20例CHB患者，男16例，女4例，年齡27～63歲，平均年齡（41.30±11.04）歲。診斷標準參照2010年中華醫(yī)學會肝病學分會、感染病學分會聯(lián)合修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》[5]。納入標準：符合慢性乙型肝炎診斷標準者。排除標準：所有患者均排除了甲、丙、丁、戊型肝炎病毒重疊感染以及伴有心、腎、肺、內(nèi)分泌、血液、免疫、代謝及胃腸道嚴重原發(fā)病者或精神病患者；合并其他病毒性肝炎或肝硬化、肝癌患者；免疫性肝病患者；長期飲酒史且每周飲酒折合酒精量超過40克者。健康對照組為40例健康體檢者，其中男30例，女10例，年齡26～69歲，平均年齡（40.80±9.79）歲。2組性別、年齡等比較差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性。

1.2 觀察指標 空腹采集靜脈血5 mL，離心得到血清，放-80℃存放備用。采用酶聯(lián)免疫法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）試劑盒（CUSABIO，產(chǎn)品編號CSB-E 00936 h）檢測CHB患者和健康人血清中GRA的含量。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 14.0軟件進行統(tǒng)計學分析。計量資料采用“s”表示，組間比較采用t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。同時用Pearson法對GRA水平和HBV-DNA、ALT、AST的相關(guān)性進行分析。

2 結(jié)果

2.1 CHB組和健康對照組血清中GRA含量的變化CHB組血清中GRA的含量為（30.68±18.80）ng/mL，顯著高于健康人對照組的（9.32±6.07）ng/mL，差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.003)。此外，統(tǒng)計學結(jié)果表明，大三陽組和小三陽組HBVDNA、ALT、AST和GRA含量比較差異無統(tǒng)計學意義。見表1。

表1 CHB組中血清中GRA含量的變化

2.2 相關(guān)性分析 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，GRA與乙肝患者HBV-DNA、血清ALT、AST水平均無明顯相關(guān)性（HBVDNA：P=0.816；ALT：P=0.888；AST：P=0.826）。

3 討論

顆粒溶素是存在于人類細胞毒性T淋巴細胞和自然殺傷細胞胞漿顆粒中的溶細胞蛋白質(zhì)分子,它是在研究效應(yīng)T淋巴細胞表達時通過負雜交方法而發(fā)現(xiàn)的[4-5]。T細胞受體激活后3～5天,靜止T淋巴細胞轉(zhuǎn)變?yōu)檩o助性T細胞和細胞毒性T細胞,此時GRA開始表達。GRA定位于胞質(zhì)顆粒中,具有溶解酶活性,可以溶解細菌、病毒、真菌、寄生蟲等多種病原體，是參與機體細胞免疫的重要效應(yīng)分子。

在乙肝病毒感染后，肝臟乙肝病毒的清除主要依靠體內(nèi)免疫毒性細胞，而這個過程常常通過兩個獨立的通路：凋亡通路和穿孔素通路[6]。穿孔素通路的主要毒性顆粒成分包括穿孔素、GRA和顆粒酶。GRA主要存在于細胞毒性T細胞和自然殺傷細胞中，并且能夠促進炎癥反應(yīng)[3]。顆粒溶素損傷細胞的機制可能是當顆粒溶素和靶細胞帶負電荷的線粒體膜脂質(zhì)結(jié)合導(dǎo)致溶解活性發(fā)生，并誘導(dǎo)細胞色素C的釋放和線粒體功能的下降[4]。近年來，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，GRA在多種感染性的疾病如多發(fā)性肌炎、皮肌炎、急性乙型肝炎中起重要的作用[7]。錢垮等研究發(fā)現(xiàn)，急性期乙肝患者PBMC顆粒溶素表達水平顯著高于體檢健康者和HBV攜帶者緩解期患者[3]，但尚未見CHB患者中GRA水平的研究。我們對20例CHB患者和40例健康人血清中的GRA水平進行了檢測，結(jié)果顯示，CHB患者中GRA的水平顯著高于健康人，提示GRA高表達不僅存在于急性乙型肝炎中，在CHB中GRA也發(fā)揮了一定的作用。異常升高的GRA可能與肝臟細胞中攜帶負電荷的線粒體膜脂質(zhì)結(jié)核，從而釋放細胞色素C，導(dǎo)致肝臟細胞線粒體功能的降低。同時，我們也發(fā)現(xiàn)，CHB患者中GRA水平與乙肝患者HBV-DNA、血清ALT、AST水平均無明顯相關(guān)性，這可能與我們的樣本量較小有關(guān)。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2016.5.007

2012年蘇州市科教興衛(wèi)項目 （kjxw 2012031）

江蘇 215007 蘇州市第五人民醫(yī)院 （柴曉哲 張雪華）