STAGO STA-R全自動血凝儀性能驗證

馬 威

STAGO STA-R全自動血凝儀性能驗證

馬 威

目的 驗證STAGO STA-R全自動血凝儀（簡稱STA-R血凝儀）的系統性能，確定該檢測系統是否穩定、準確、可靠。方法 參照美國臨床和實驗室標準化協會（CLSI）相關文件，選擇凝血酶原時間（PT），活化部分凝血酶時間(APTT)，纖維蛋白原(FIB)，凝血酶時間(TT)對STAGO STA-R檢測系統的不精密度、正確度、攜帶污染率、線性范圍、參考區間等性能指標進行驗證。結果 批內和批間不精密度（CV）小于4%；各檢測項目正確度相對偏倚（SE%）小于1%；攜帶污染率小于5.9%；纖維蛋白原（Fib）檢測線性良好，相關系數為0.9976；可報告范圍（0.6～10.7）g/L；以上該檢測系統結果均至少有95%數據分布在現行生物參考區間內。結論 STAGO STA-R凝血儀性能優良，可以為臨床疾病的診斷、治療和預后觀察提供準確可靠的檢驗結果。

STAGO STA-R全自動血凝儀；性能；驗證

為滿足臨床日益發展的需求，沈陽市兒童醫院檢驗科最近購置第二臺STAGO STA-R全自動血凝儀（鑒與以前同型號血凝儀相區別，以下簡稱2 STA-R），該儀器是專門用于臨床血液凝固狀態分析及抗凝劑監測的設備，對血漿標本采用凝固法、發色底物法及發光免疫法進行測定。根據美國臨床實驗室改進修正法案（CLIA′88）對臨床實驗室質量管理和實驗室認可的要求，實驗室必須對所使用的檢測系統進行性能驗證[1]。參照美國臨床和實驗室標準協會（CLSI）的要求并結合本室具體情況，對該分析系統進行了不精密度、正確度、攜帶污染率、線性范圍、參考區間等性能指標進行了驗證。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 法國Stago公司生產的STA-R全自動血凝儀及配套試劑：特殊清洗液，批號111549；清洗液，批號201034；PT試劑，批號110261；氯化鈣試劑，批號111526；APTT試劑，批號110733；FIB試劑，批號111085；FIB稀釋液，批號110791；TT試劑，批號109728。

PT，APTT，FIB質控品為BIO-RAD公司生產的凝血正常、異常兩個水平質控品：批號分別為78271、78273。

1.2 標本 標本采自本院就診的患者及健康體檢者，用3.2%枸櫞酸鈉（109 mmol/L）真空抗凝管，按1︰9的比例采集全血1.8 mL，3000 r/min離心10 min分離血漿標本。

1.3 方法

1.3.1 質量控制 為保證實驗質量，測試前對儀器進行凈化：通針，清洗沖洗槽，清洗標本抽屜，試劑抽屜及測試平臺等相關維護保養。用相應校準品對FIB進行校準；用BIO-RAD公司血凝質控品對PT、APTT、TT和FIB進行室內質控。

1.3.2 不精密度驗證 按照EP 15-A 2[2]文件要求，使用BIO-RAD凝血正常、異常兩個水平質控血漿，連續測定20次，計算批內不精密度的均值（）、標準差（s）、變異系數（cv);取正常、異常兩個水平質控血漿，每天分別測定兩次，間隔時間大于2 h，連續檢測10 d，共收集20個數據，計算批間不精密度的均值（）、標準差（s）、變異系數（CV)。結果應符合下列要求。見表1。

表1 廠家聲明的批內和批間不精密度

1.3.3 正確度驗證 由于血液實驗室第一臺STA-R(以下簡稱1 STA-R)通過了衛生部的室間質評活動--相對偏倚（SE%）在衛生部室間質評規定范圍（15%）的1/2內為可接受，其檢測結果的準確性可以進行傳遞，因此以1 STA-R為基準儀器，將血液室的2 STA-R為比對儀器與之進行比對。比對20個標本，同一樣本在兩檢測系統之間的檢測時間之差不超過4小時。本實驗室規定允許差值為小于≤1/2 CLIA′88最大允許總誤差。規定的允許誤差：PT 7.5%、APTT 7.5%、FIB 10%。

1.3.4 線性范圍驗證 驗證項目：由于PT、APTT、TT的檢測結果為儀器直接讀取的凝固時間，因此不適合做線性分析；FIB的檢測根據檢測時間換算出濃度，因此只驗證FIB的線性。實驗方法：選取一份接近預期上限的高值全血樣本（H），一份接近預期下限的低值全血樣本（L），將H和L樣品按：5 L、4 L+1 H、3 L+2 H、2 L+3 H、1 L+4 H、5 H關系各自配制混合，形成系列評價樣品。每個樣品重復測定2次，計算均值。將實測值與理論值作比較（偏離應小于10%），計算y=ax+b，驗證線性范圍。要求：a值在（1±0.05）范圍內，相關系數r≥0.975。

表3 批間不精密度實驗結果（n=20）

1.3.5 攜帶污染率驗證 取高濃度血液樣本，混合均勻后連續測定3次，測定值分別為H 1、H 2、H 3；再取低濃度血液樣本，連續測定3次，測定值分別為L 1、L 2、L 3。按公式計算攜帶污染率（%）=（L 1-L 3）/(H 3-H 1)×100%，其中L 1和L 3分別為低值樣本在第一次和第三次測定結果。

1.3.6 生物參考區間驗證 選擇年齡、性別等均勻分布，符合建立生物參考區間的健康體檢者血漿標本20份分別檢測各項目，計算結果落在正常生物參考區間的例數。計算x、s、比率［R（%）]及95%分位數；R(%)＝參考個體落在引用區間的個數／參考個體總數×100%，R(%)≥90%判為驗證結果適用[3-4]。

1.4 統計學方法 本文將所分析的相關數據錄入SPSS 17.0統計學分析軟件進行數據分析與處理，計量資料采用“s”表示，組間比較采用t檢驗；計數資料用例數（n）表示，計數資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不精密度實驗 PT、APTT、FIB批內及批間不精密度結果見表2、表3。在正常及異常兩水平，批內及批間CV值均低于廠家規定的標準，可繼續進行測定。

2.2 正確度實驗 各項目檢測結果(x2)與1 STA-R(x1)相比，SE%均小于3%，符合要求。見表4。

表2 批內不精密度實驗結果（n=20）

表4 正確度實驗結果（n=20）

2.3 線性范圍實驗 FIB呈良好線性相關性。見表5、圖1。

表5 FIB線性檢測結果

圖1 實測值與理論值比較圖

2.4 攜帶污染率實驗 PT、APTT和FIB攜帶污染率分別為5.88%、0.48%、0.10%，均小于廠家規定的≤10%的標準。見表6。

表6 攜帶污染率實驗結果

2.5 生物參考區間實驗 各項目驗證結果R（%)值均大于90%，統計的參考區間均在引用的參考區間范圍內。見表7。

表7 參考區間實驗結果（n=20）

3 討論

隨著本院規模不斷擴大，一臺全自動血凝儀遠遠不能滿足門急診要求，因此本科室新購置了法國Stago公司生產的STA-R型全自動血凝儀。此型號儀器檢測速度達每小時400個，具有自動稀釋、自動再檢、自動連鎖篩選和全自動濃度稀釋分析功能，可同時提供止凝血試驗的直接結果與計算參數結果。在投入臨床應用前應進行性能驗證，以確保結果的及時可信性。由于磁珠凝固法不使用光源系統，就方法學而言不受標本中干擾物質（如黃疸、乳糜、溶血）及試劑本身濃度的干擾，抗干擾能力較強，因此本報告未進行抗干擾驗證［5］。

本研究中，精密度高、重復性好，在精密度驗證試驗血凝三項的CV批內和CV批間均在廠家標稱范圍內，顯示精密度良好，符合要求；正確度實驗，以通過衛生部室間質評的1 STAGO STA-R檢測結果為基準儀器，本檢測系統與基準儀器相對偏倚在1/2 CLIA′88要求的允許范圍內的標本≥80%，驗證通過；攜帶污染率小：各項攜帶污染率均小于10%，符合儀器的性能要求；FIB的線性實驗結果表明，a值在（1±0.05）范圍內，r＞0.975，各檢測系統具有良好的線性；該檢測系統結果均至少有95%數據分布在現行生物參考區間內，驗證合格。

綜上所述，2 STAGO STA-R全自動凝血儀性能優良，可以保證該檢驗系統為臨床疾病的診斷、治療和預后觀察提供準確可靠的檢驗結果。

[1] 叢玉隆，鄧新立．實驗室ISO 15189 認可對學科建設的幾點啟［J］．中華檢驗醫學雜志，2007，30(2):128-131．

[2] Clinical and Laboratory Standards Institute.EP 15-A 2 User verification of performance for precision and trueness;approved guideline-second edition[S].Wayne，PA,UAS:CLSI,2005.

[3] NCCLS.C 28-A 2 How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory:approved guideline[S].Wayne,PA,USA:NCCLS,2000.

[4] 畢波，呂元．定量檢測系統的方法學性能驗證實驗結果的評價［J］．中華檢驗醫學雜志，2007，30(12):1332-1335．

[5] 郝建華，呂斌斌，高旭紅，等．Stago Compact型血液凝固分析儀的抗干擾功能[J]．國外醫學：臨床生物化學與檢驗學分冊，2002，23(3):185-186.

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.5.099

遼寧 110000 沈陽市兒童醫院檢驗科 （馬威）