祛瘀接骨飲促進骨折早期愈合中對一氧化氮合成酶的影響*

晏　梅　趙淑婷　李建強　崔永杰　李志東　盧軍利

河北省唐山市人民醫院(唐山 063001)

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祛瘀接骨飲促進骨折早期愈合中對一氧化氮合成酶的影響*

晏梅趙淑婷李建強崔永杰李志東盧軍利

河北省唐山市人民醫院(唐山 063001)

摘要目的： 觀察祛瘀接骨飲在骨折早期愈合過程中對一氧化氮合成酶(NOS)的影響。方法：選擇肱骨干閉合性骨折病例72例，隨機分為兩組，對照組36例，采用西醫保守治療方法，治療組36例在西醫治療基礎上加服祛瘀接骨飲，每日1劑，連續服用21d。兩組在治療期間分別于4d、7d、14d、21d時靜脈采血，分析血清中NOS的活性，比較兩組在骨折早期愈合過程中對NOS的影響。結果：治療組治療期間血清中NOS表達活性明顯高于對照組，且未見明顯不良反應。對照組有患肢因發生劇烈腫脹，頻繁調整夾板松緊度，增加骨折移位、軟組織嵌入、橈神經損傷、骨不愈合等風險。結論：祛瘀接骨飲通過對NOS活性表達的調控，可以減輕肢體腫脹程度，增強骨折斷端成骨能力，促進骨折愈合。

主題詞 骨折愈合/中西醫結合療法一氧化氮合成酶@祛瘀接骨飲

骨折愈合是機體結締組織的一種再生修復過程。一氧化氮合成酶(NOS)是一氧化氮(NO)合成過程中的關鍵酶，是由L-精氨酸(L-Arginine)氧化途徑產生，分兩大類，有三種異構體的同工酶：一類稱原生性NOS(cNOS)包括神經原性(nNOS)和內皮細胞性NOS(eNOS)，另一類稱誘生性NOS(iNOS)。在骨折愈合過程中， NOS在機體內可充當信使、介質和細胞功能調節因子，對多種器官、系統的功能具有重要的調節作用，NO作為一種細胞調節因子，受NOS調節，可介導應力、炎性細胞因子等調節作用， NOS參與合成并釋放的NO既參與骨折愈合過程中血液供應的調節，同時也參與成骨細胞(OB )與破骨細胞(OC)功能的調節，對骨折愈合起著重要的作用。此研究通過觀察祛瘀接骨飲對骨折患者血液中NOS表達的影響，從而探討其促進骨折愈合的可能機制。

臨床資料 選取本院自2011年1月～2013年2月門診治療的肱骨干閉合性骨折患者共72例。對照組：36例，男20例，女16例；年齡13～67歲，平均38.5歲；骨折部位：肱骨干中上段骨折11例，肱骨干中段骨折13例，肱骨干中下段骨折12例。治療組：36例，男17例，女19例；年齡16～66歲，平均40.5歲；骨折部位：肱骨干中上段骨折10例，肱骨干中段骨折13例，肱骨干中下段骨折13例。兩組患者對比，在性別、年齡、骨折原因及骨折部位分布上，無明顯差異，有可比性。

納入標準中醫診斷標準參照尚天裕1995年出版發行的《中國接骨學》診斷標準，所有患者均符合閉合型非粉碎性骨折，段端無明顯移位、分離和血管神經損傷癥狀和體征。

排除標準 患者有高血壓、糖尿病、腦血管病，血常規、肝腎功能明顯異常，血脂代謝紊亂及血液系統基礎疾病患者不在觀察范圍，以去除影響血清中NOS活性的其它因素。

治療方法 治療組：在西醫治療基礎上，采用祛瘀接骨飲，具體方藥為穿山甲、血竭、乳香、沒藥、木香、酒大黃、生地、當歸尾、骨碎補、煅自燃銅、續斷、馬錢子、天花粉各10g， 由唐山市人民醫院中藥制劑科，制備煎煮并提供，每日1劑。對照組：單純西醫骨科治療。兩組療程均為21d。所有患者均常規抗炎、休養、指導功能鍛煉等對癥治療，并在治療過程中的4d、7d、14d、21d分別對患者晨起采靜脈血，測定血清NOS的活性。

檢測方法儀器和試劑:酶標儀由(美國BIOTEK公司提供)； NOS及其異構體酶ELISA試劑盒由(上海恒遠生物科技有限公司提供)應用定性夾心免疫檢測技術，采用酶聯免疫法進行檢測按試劑盒的說明測得NOS和iNOS酶活性，而cNOS酶活性既為NOS酶活性減去iNOS酶活性所得，選定符合標準的骨折患者，在未進行任何治療前的，所取得血清樣本的值，為酶活性的生理值，使用不含熱原和內毒素的試管，分別在4d、7d、14d、21d時靜脈采血，采血前12h禁食，收集血液后，離心10min將血清和紅細胞迅速小心地分離，并取血清于2～8℃冰箱保存待測。

治療結果血清NOS活性的變化對照組和治療組在4d、7d、14d時有非常顯著的差異，見表1。兩組NOS活性均從骨折后4d時開始升高，在14d時達到高峰，隨后降低，在21d時基本恢復到治療前的數值。

血清iNOS活性的變化治療組和對照組比較，7d、21d時有非常顯著差異(P<0.01)。骨折后，兩組iNOS活性都開始上升，在14d達到高峰時，對照組大于治療組，21d時治療組下降快于對照組。

血清cNOS活性的變化治療組與對照組在4d、7d、14d時相比有非常顯著的差異；骨折后兩組cNOS活性均開始上升，在14d時達到峰值，隨后逐漸下降，在21d時下降到骨折后4d的值。

藥物不良反應兩組骨折患者治療前后血常規、肝腎功能均無明顯變化。治療組未見明顯不良反應；對照組患肢劇烈腫脹4例，因組織劇烈腫脹，頻繁調整夾板松緊度，導致骨折斷端軟組織嵌入，而行手術切開復位內固定治療1例，肱骨干中下段骨折，合并橈神經輕度損傷1例，經指導功能鍛煉和營養神經等藥物對癥治療，于傷后4周手背橈側皮膚感覺障礙區基本消失，再無其它不良反應發生。

討論影響骨折愈合的因素眾多，目前為止沒有一種理論可以完全闡釋骨折愈合中的所有問題，骨折發生的早期由于骨折斷端鄰近組織中的血管破裂出血，導致經脈受傷，氣血受阻，積淤不散，腫脹疼痛，一般以活血化瘀為治療原則。我科室在中醫辨證論治原則指導下，根據骨組織愈合的特點組方，研制成祛瘀接骨飲以行氣活血，通瘀導滯，扶正通絡從而達到局部消腫、止痛、促進骨折愈合的目的[1]。組方中自然銅辛苦、平，骨碎補、續斷苦、溫，同歸肝腎經，破積瘀、療折傷、補腎強骨為君藥；均能有效促進成骨細胞的分化、增殖，防止成骨細胞凋亡增加骨密度，保護骨小梁結構，提高骨強度。乳香、木香辛苦、溫，沒藥苦、平，同歸心肝脾經，活血止痛，抗炎健脾、消腫生肌為臣藥；大黃苦寒，歸肝脾經，收澀止血、抗炎逐瘀為佐藥；因其能縮短凝血時間，降低毛細血管通透性，改善血管脆性，能使血小板、纖維蛋白原增加，血管的收縮活性增加，骨痂形成過程中促進成骨細胞分化促進骨折愈合通過影響成骨細胞(OB )與破骨細胞(OC)之間的關系來影響骨折愈合過程[2-4]。當歸尾破血止痛、赤芍涼血、透骨草、馬錢子散瘀消腫為使藥，諸藥共奏祛瘀接骨、消腫、止痛之功[5]。

本臨床觀察顯示：NOS的活性從4d開始兩組均開始增加，在14d時達高峰，而在4d、7d、14d時治療組明顯高于對照組；iNOS的活性，治療組相對對照組都是迅速達到峰值后又迅速降至生理值；cNOS的兩組在14d時達峰值，且治療組高于對照組，以后下降。相關研究表明，在骨折愈合早期低濃度的NO可以促進OB的增值及骨基質分泌功能，還可以促進OC前體向OC轉換和提高OC細胞的活性，促進骨折愈合[6]。但由于細胞因子誘導產生的iNOS產生濃度的NO，高濃度的NO可降低OB的活性，抑制DNA的合成、增殖、抑制堿性磷酸酶活性、骨鈣素產生，對骨折產生負調節作用[7]。本實驗證實祛瘀接骨飲對iNOS的活性影響是上升和下降速度均很快，高濃度的iNOS在體內存在的時間比對照組短，因此也可能是其機制之一。

綜上所述，祛瘀接骨飲能加快骨折局部腫脹消退、鎮痛，促進骨折早期愈合，其促進骨折愈合的機理和NOS的表達有密切關系，由于本組實驗觀察病例數量較小，尚需大樣本實驗進一步探討和研究。

參考文獻

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[7]楊輝，唐成林，長青,等.在大鼠骨骼肌急性損傷修復過程中按摩對神經型一氧化氮合成酶、肝細胞生長因子mRNA表達的影響[J].中國康復醫學雜志,2015,37(3) :224-230.

(收稿2015-11-02；修回2015-12-10)

【中圖分類號】R274.1

【文獻標識碼】A

doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.03.015

*河北省中醫藥管理局中醫藥類科研計劃課題(2015243)