新疆枸杞種質資源遺傳多樣性的SRAP分析

查美琴，趙玉玲，李　疆*，朱　瑜，羅淑萍，胡　月

新疆枸杞種質資源遺傳多樣性的SRAP分析

查美琴1，趙玉玲2，李疆1*，朱瑜1，羅淑萍1，胡月1

(1新疆農業大學林學與園藝學院，烏魯木齊 830052;2.新疆精河縣枸杞管理中心, 新疆精河 833300)

摘要:利用SRAP分子標記技術對新疆枸杞種質資源遺傳多樣性及親緣關系進行研究，為新疆枸杞種質資源分類和雜交育種提供理論依據。結果顯示：(1)篩選出的12對SRAP引物共擴增出310個位點，其中多態性位點264個，多態性比率平均為84.61%，引物多態性信息含量(PIC)變化范圍為0.76～0.93，平均為0.83；觀測等位基因(Na)、有效等位基因數(Ne)、Nei’s基因多樣性指數(H)、Shannon信息指數(I)平均值分別為1.846 1、1.386 9、0.228 0和0.352 0。(2)聚類分析表明，供試材料間的遺傳相似系數為0.590 3～0.903 2，在遺傳相似性系數為0.70和0.76時，可將30份樣品分別分為2大類和5個亞類；主坐標分析結果和聚類結果基本一致。研究表明，新疆枸杞種質資源遺傳多樣性較豐富，且野生種與栽培品種 (系)間的遺傳差異較大，表現出較遠的親緣關系，而栽培品種(系)間的遺傳差異相對較小，表現出較近的親緣關系。

關鍵詞:枸杞；相關序列擴增多態性(SRAP)；聚類分析；主坐標分析；遺傳多樣性

枸杞(LyciumbarbarumL.)是茄科(Solanaceae)枸杞屬(LyciumL.)的一種多年生落葉灌木[1]。枸杞作為一種藥食同源植物，具有抗腫瘤、軟化血管、防衰老及增強免疫力等藥理作用[2]。全球枸杞屬植物約有80多種，多分布在南美洲南部和北美洲西南部，少數分布于歐亞大陸的溫帶[3]，中國野生自然分布的有7種和3變種，主要分布于西北和華北[4]，新疆作為中國枸杞主產區之一[5]，擁有的種質資源十分豐富。因枸杞屬于常異花授粉植物，多數自交不親和，基因型高度雜合，種子繁育后代容易發生性狀分離，通過營養繁殖方式培育出的無性系新品種(系)在形態上極為接近[6]，加之基因組信息研究薄弱，使得遺傳信息缺乏，遺傳關系模糊不清[7]，優良種質的特性難以在品種(系)間雜交被有效遺傳利用[8]。因此，從DNA水平研究新疆枸杞種質資源的遺傳多樣性，對枸杞種質資源分類、有效利用及優良品種選育具有重要意義。相關序列擴增多態性(Sequence-related amplified polymorphism,SRAP)是Li等開發的一種針對外顯子區域進行擴增的新型分子標記技術[9]，克服了RAPD、RFLP、AFLP等標記技術的一些局限性，具有技術簡便、高效、重復性好、多態性明顯等優點。目前已成功應用于植物種質資源遺傳多樣性和親緣關系分析、圖譜構建、核心種質庫的構建、種質鑒定等方面研究，如中國灌木辣椒[10]、不結球白菜[11]、山藥[12]、南瓜[13]等。近年來，國內外學者對枸杞種質資源遺傳多樣性的研究主要側重于形態分類學[14]、染色體核型分析[15]、同工酶水平[16]等方面，后來，隨著分子生物學的快速發展，分子標記技術成為枸杞種質資源遺傳多樣性研究主要技術手段之一，已有基于PCR的RAPD[17]、ISSR[18]、SSR[19]、SRAP[20]等標記技術的枸杞種質資源遺傳多樣性分析。傳統的枸杞種質資源遺傳多樣性研究方法具有一定的局限性，分子標記直接反映基因組DNA的遺傳變異信息，且該技術的種類日趨完善，檢測范圍日趨擴大，但目前利用SRAP標記技術針對新疆枸杞種質資源遺傳多樣性方面的分析鮮見報道,尤其在分子水平上的研究報道甚少。 本試驗以新疆枸杞種質資源圃栽培品種(系)和野生種共30份樣品為試材，擬采用SRAP標記技術對其遺傳多樣性進行分析，旨在從分子水平上確定新疆枸杞種質間遺傳變異信息及親緣關系，為新疆枸杞種質資源分類、保護和利用枸杞野生資源以及新品種選育提供分子生物學依據。

1材料和方法

1.1供試材料

該試驗所用材料(表1)于2014年7月采自新疆精河縣枸杞管理中心枸杞種質資源圃，共計30個樣品，采摘一年生枝條上的鮮嫩葉片置于寫好編號且放有變色硅膠的自封袋中，帶回實驗室，放室溫下保存備用。

表1　試驗材料編號及名稱

表2　供試SRAP引物序列

1.2方法

1.2.1基因組DNA的提取與檢測采用改良CTAB法提取供試材料基因組DNA[21]，用核酸蛋白儀檢測DNA濃度，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測其完整性和純度，EB染色后，凝膠成像系統觀察并攝影記錄，用ddH2O將DNA濃度稀釋至50 ng/μL后分裝,保存-40 ℃冰箱中備用。

1.2.2引物篩選所用SRAP正反向引物參照Li等公布的引物序列(表2)，由上海生工生物工程有限公司合成，SRAP正反向引物各12條，兩兩組合成144個引物組合，PCR反應相關試劑10×Buffer(含Mg2+)、TaqDNA聚合酶、dNTPs、100 bp DNA marker和ddH2O均購自天根生化科技(北京)有限公司。從供試材料中抽取形態性狀差異較大的枸杞DNA模板5個對144對SRAP引物進行篩選，最終篩選出清晰易辨認、穩定性好、多態性豐富的SRAP引物用于所有DNA樣品擴增。

1.2.3PCR擴增PCR反應在Bio-Rad PCR儀上進行。在25 μL SRAP-PCR反應體系中，含10×Buffer(含Mg2+)2.5 μL，dNTP(10 mmol/L)0.5 μL，DNA模板(50 ng/μL)1 μL，TaqDNA聚合酶(2.5 U/μL)0.4 μL, 正反引物(10 μmol/L) 各0.5 μL，加ddH2O至25 μL。PCR反應程序為：94 ℃預變性5 min, 94 ℃變性1 min,35 ℃復性1 min，72 ℃延伸1 min反應5個循環, 94 ℃變性1 min,50 ℃復性1 min，72 ℃延伸1 min反應35個循環,72 ℃延伸7 min，4 ℃保存。

1.2.4PCR擴增產物的檢測PCR擴增產物與2 μL 6×Loading Buffer混勻后，在6%非變性聚丙烯酰胺凝膠上電泳分離，電極緩沖液為1×TBE，200 V恒電壓電泳約50 min，電泳結束后，銀染法染色顯影，在熒光燈上觀察分析條帶并照相記錄，試驗設定3個重復。

1.3數據的處理與分析

對清晰且易于辨認的譜帶根據分子標記的遷移率及其有無，統計所有的二元數據，按條帶有無賦值，同一位點有帶記為“1”，無帶記為“0”，建立二元原始數字矩陣；利用PIC_CALC Version 0.6軟件計算多態信息含量(PIC)值；運用POPGENE1.32軟件計算擴增產物的多態位點數、多態性百分率(PPB)、觀察等位基因數(Na)、有效等位基因數(Ne)、Nei’s基因多樣性指數(H)和Shannon信息指數(I)等遺傳多樣性參數；利用NTSYS-pc2.1e軟件計算不同枸杞種質間的Jaccard相似性系數(GS)，按非加權成組配對算術平均法(UPGMA)進行聚類分析,通過Tree plot模塊生成親緣關系聚類圖，最后，根據遺傳相似系數進行主坐標分析及繪制三維空間圖和二維平面散點圖以檢驗聚類結果。

2結果與分析

2.1SRAP引物擴增結果分析

M. DL1500；編號1～30同表1圖1　引物組合me4-em8對枸杞所有試材的SRAP擴增No. 1-30 are the same as Table 1Fig.1　SRAP amplification of Lycium barbarum L. germplasm by primer combination me4-em8

Table 3　The statistics of genetic diversity of L. barbarum

2.2遺傳多樣性分析

利用POPGENE1.32軟件對30份枸杞樣品擴增的310個位點進行分析，獲得數據表明：觀測等位基因(Na)介于1.592 6～2.000 0，平均為1.846 1；有效等位基因(Ne)介于1.205 6～1.528 5，平均為1.386 9；Nei′s基因多樣性指數(H)介于0.134 0～0.305 5，平均為0.228 0；Shannon信息指數(I)介于0.224 5～0.457 8，平均為0.352 0。這些研究結果表明，新疆枸杞種質資源遺傳差異較大，遺傳多樣性水平較高。

2.3遺傳相似性分析

利用NTsys-pc2.10e軟件計算SRAP引物產生的所有位點的遺傳相似系數(GS)，30份枸杞樣品兩兩間的遺傳相似系數介于0.590 3～0.903 2之間，平均(GS)值為0.736 1;遺傳相似系數最小的是‘野黑果枸杞’和‘寧杞5號’，相似系數為0.590 3，表明親緣關系最遠;遺傳相似系數最大的是‘1101’和‘1102’，為0.903 2，表明親緣關系最近。總體來說，30份枸杞樣品間遺傳相似系數較低，存在較高的遺傳差異。

2.4聚類分析

基于30份枸杞樣品間的遺傳相似系數，用UPGMA法對30份枸杞樣品進行聚類分析，獲得親緣關系聚類圖(圖2)，在遺傳相似性系數為0.70時，可將供試材料分成2大類。第Ⅰ大類包括野紅果枸杞、野黑果枸杞、野生雪青色果和野生黃果枸杞4個野生種，這說明4個野生種間遺傳差異小，親緣關系近，并以野生雪青色果和野生黃果枸杞之間的親緣關系最近。在相似系數為0.76時，第Ⅱ大類又可細分為5個亞類。首先，大麻葉枸杞一個品種作為第ⅰ亞類；第ⅱ亞類是‘寧杞1號’和‘寧杞5號’2個品種聚在一起；第ⅲ亞類是‘蒙杞1號’和‘白刺枸杞’2個品種被分為一類；第ⅳ亞類包括‘精杞3號’、‘精杞5號’、0901、1016、1017和‘寧杞7號’，其中的‘精杞3號’和‘精杞5號’、1016和1017分別表現出遺傳變異程度低、遺傳背景相近的親緣關系。第ⅴ亞類包括剩余的15個品種，其中，‘精杞1號’和‘精杞4號’、‘精杞8號’和1012、1407和‘寧菜1號’、1018和1021有較近的親緣關系，1101、1102和1103被分為一小類，說明它們遺傳基礎狹窄，遺傳變異小，父本或母本相同。

遺傳相似性系數Genetic similarity coefficient 1～30材料編號同表1圖2　30份枸杞種質的UPGMA聚類分析圖No.1-30 are the same materials as Table 1Fig.2　UPGMA dendrogram for 30 resources of L. barbarum L. based on SRAP data

2.5主坐標分析

基于30份枸杞樣品間的遺傳相似性系數矩陣，利用NTSYS-pc2.10e軟件進行主坐標分析,建立三維空間圖(圖3，A)和平面散點圖(圖3，B)，結果表明，第1、第2 和第3主坐標分別解釋了11.67%、10.11%和7.76%的樣本間相關性。將位置靠近者劃分為一組，30份枸杞樣品被分為2個大組(第Ⅰ、Ⅱ大組)，其中，4個野生種表現出較近親緣關系被單獨劃分為第Ⅰ大組，剩余的26份枸杞樣品作為第Ⅱ大組。根據供試材料在坐標圖中的位置分布，第Ⅱ大組又可細分成Ⅴ個亞組。‘寧杞1號’和1104組成第ⅰ亞組，‘精杞4號’、‘精杞8號’、‘寧杞5號’和‘白刺枸杞’4個樣品被聚為第ⅱ亞組，第ⅲ亞組包括‘精杞1號’、‘精杞3號’、‘精杞5號’、‘精杞7號’、0901、1012、1016、‘寧杞7號’和‘蒙杞1號’共9份栽培品種(系)；1017和1102聚在一起組成第ⅳ亞組；第ⅴ亞組包括1018、1021、1101、1103、1202、1407、‘寧菜1號’、‘柱筒枸杞’和‘大麻葉枸杞’共9份枸杞樣品。與UPGMA法聚類結果相比，2種分析方法在栽培品種(系)間親緣關系研究方面存在一點差異，如‘寧杞1號’和‘寧杞5號’在聚類圖中明顯被聚在一起，而主坐標分析圖中卻沒有被劃分在一組，可見，栽培品種(系)基因型復雜。比較圖2和圖3可知，兩種方法的群組劃分趨向一致，但組群內分析結果相似卻并不完全相同，但主坐標分析能更直觀地反映出30份枸杞樣品的遺傳變異和親緣關系遠近。

A．三維圖； B．平面圖；1～30材料編號表同1圖3　枸杞各試材的SRAP標記主坐標分析圖A.Three-dimensional graph；B.Planar graph；No.1-30 are the same materials as Table 1Fig.3　Principal coordinates analysis of Lycium bararum L. genotypes from SRAP markers

3討論

3.1新疆枸杞種質資源的遺傳多樣性分析

DNA是生物的主要遺傳物質，DNA水平上的遺傳變異大小直接體現該物種在特定環境中遺傳多樣性水平的高低，只有了解種質資源DNA遺傳變異信息及親緣關系，才能有效并合理地利用物種的種質資源和有目的地進行品種選育中的親本選配，從而培育出優良新品種[22]。本試驗采用SRAP分子標記技術對30份枸杞樣品進行遺傳多樣性分析，篩選出12對SRAP引物擴增出264個多態性位點，占84.61%，這充分表明新疆枸杞種質資源具有較為廣泛的遺傳基礎。安魏等在枸杞種質資源的SRAP分析中多態性比率為76.68%[23]，尹躍在枸杞品種(系)分子鑒定及親緣關系分析中多態性比率達87.7%[24]，和本試驗的PPB值相當；多態信息含量(PIC)值大于0.5的標志基因具有高度信息，本試驗平均每對引物的(PIC)值為0.83，屬于高度多態性位點；有效等位基因和Nei’s基因多樣性指數是目前遺傳多樣性研究中應用較為廣泛的一個指數，而且，Nei’s基因多樣性指數也是衡量物種遺傳多樣性的一個重要指標[25]，本試驗供試樣品Nei’s基因多樣性指數(H)介于0.134 0～0.305 5，平均為0.228 0，反映了新疆枸杞種質資源具有較為豐富的基因型，這可能與其常異花授粉的生物學特性有關。另外，本研究遺傳相似系數介于0.590 3～0.903 2之間，平均(GS)值為0.736 1，這也充分說明供試材料間遺傳差異較大，SRAP標記可有效應用于新疆枸杞種質資源的親緣關系分析。

汽輪機軸封間隙的調整是機組重要的檢修內容，間隙調整的質量關系機組能效指標，同時也是涉及汽輪發電機組運行時振動安全的因素之一；文中介紹了不同類型的汽封特點，對應各機組實際情況，需做到合理選用汽封；另外，對汽封間隙的調整進行了說明，希望在汽封維護檢修方面給大家帶來一定的借鑒。

3.2聚類分析和主坐標分析

本試驗采用UPGMA法聚類分析和主坐標分析兩種方法對30份枸杞樣品遺傳多樣性進行分析，兩種分析方法均反映出供試的野生種與栽培品種(系)間的遺傳差異較大，表現出較遠的親緣關系，而栽培品種(系)間的遺傳差異相對較小，表現出較近的親緣關系。一方面，這可能與UPGMA法聚類側重于種質間關系差異的量化分析，提供豐富的數量信息，而主坐標分析則是從多個角度分析不同種質或群體間的關系有關[26]，兩種方法不矛盾。另一方面，這可能與新疆枸杞種質資源在長期進化和人工選擇過程有關，為保留種質的優良特性，栽培品種(系)種苗的繁育主要采用人工選育方式，如利用自然變異選擇突變單株，然后通過實生、分株、硬枝和嫩枝扦插以及組織培養等方式擴大繁殖，從而使不同栽培品種(系)之間基因型類似且高度雜合，導致栽培品種(系)間產生了復雜的遺傳關系，而野生種就地保存了大量的原始種質。從新疆枸杞種質資源遺傳多樣性研究的角度看，今后應進一步擴大分子標記技術應用的范圍，篩選出更多適合于新疆枸杞種質資源遺傳多樣性分析的引物，從DNA水平上更加準確地反映出其種質間的遺傳變異信息及親緣關系遠近，從新疆枸杞產業長遠發展的角度來看，在以后的枸杞種苗的繁育過程中，應注重與不同基因型的野生種進行雜交親本選配，不斷增加基因型的聚合和優良基因型的選擇幾率，這對品種改良和優良品種選育具有較大的利用價值。從整體上看，這兩種分析方法對種質資源進行遺傳多樣性分析是可行的，將兩種方法結合起來使用能使結果更加形象直觀，又更加全面，起到相互補充的作用。

參考文獻:

[1]陳剛,劉津,馬志剛,等.甘肅枸杞屬植物的RAPD分析[J].安徽農業科學,2013,41(4):1 459-1 461.

CHEN G,LIU J,MA Z G,etal.Analysis of wolfberry(LyciumL.)in Gansu by RAPD[J].JournalofAnhuiAgriculturalScience, 2013,41(4): 1 459-1 461.

[2]尚潔,李收,張靠穩.寧夏枸杞遺傳多樣性的RAPD分析[J].植物研究,2010,30(1):116-119.

SHANG J,LI S,ZHANG K W.Genetic diversity analysis ofLyciumbarbarumL.by RAPD [J].BulletinofBotanicalResearch,2010,30(1):116-119.

[3]董靜洲,楊俊軍,王瑛.我國枸杞屬物種資源及國內外研究進展[J].中國中藥雜志,2008,33(18):2020-2027.

DONG J Z,YANG J J,WANG Y.Resources ofLyciumspecies and related research progress[J].ChinaJournalofChineseMateriaMedica, 2008, 33(18):2 020-2 027.

[4]石志剛,郭文林,門惠芹.枸杞不同種質的nrDNA ITS序列分析研究[M].北京:中國林業出版社,2012:1-91.

[5]汪智軍,靳開顏,古麗森.新疆枸杞屬植物資源調查及其保育措施[J].北方園藝,2013,(3):169-171.

WANG Z J,JIN K Y,GU L S.Resource investigation and conservation measures ofLyciumL.in Xinjiang[J].NorthernHorticulture,2013,(3):169-171.

[6]鮑紅春,李小雷,王建平,等.枸杞遺傳多樣性的ISSR分析[J].華北農學報,2014,29(1):89-92.

BAO H C,LI X L,WANG J P,etal.ISSR analysis of genetic diversity of Chinese wolfberry germplasm[J].ActaAgriculturaeBoreali-Sinica, 2014,29(1):89-92.

[7]曲玲,石志剛,焦恩寧,等.枸杞遺傳轉化研究進展[J].北方園藝,2012,(24):187-191.

QU L,SHI Z G,JIAO E N,etal. Advances on transformation of wolfberry[J].NorthernHorticulture,2012,(24):187-191.

[8]李彥龍,樊云芳,戴國禮,等．枸杞種質遺傳多樣性的AFLP分析[J].中草藥,2011,42(4):770-773.

LI Y L,FAN Y F,DAI G L,etal. Analysis of genetic diversity for wolfberry germplasms by AFLP technology[J].ChineseTraditionalandHerbalDrugs,2011,42(4):770-773.

[9]LI G, QUIROS C F.Sequence-related amplified polymorphism (SRAP),a new marker system based on a simple PCR reaction:its application to mapping and gene tagging inBrassica[J].TheoreticalandAppliedGenetics,2001,103:455-461．

[10]陳學軍,周坤華,等.中國灌木辣椒種質遺傳多樣性的SRAP和SSR分析[J].西北植物學報,2012,32(11):2201-2205.

CHEN X J,ZHOU K H,etal. Genetic diversity ofCapsicumfrutescensin China as revealed by SRAP and SSR markers[J].ActaBot.Boreal.-0ccident.Sin.,2012,32(11):2 201-2 205.

[11]單曉政,李英,高素燕,等.不結球白菜分子遺傳圖譜的構建及分析[J].西北植物學報,2009,29(6):1116-1121.

SHAN X Z,LI Y,GAO S Y,etal. Molecular genetic map ofBrassicacampestrisssp.chinensis[J].ActaBot.Boreal.-Occident.Sin.,2009,29(6):1 116-1 121.

[12]劉向宇,霍秀文,楊明,等.山藥種質資源的ISSR分析及初級核心種質庫的構建[J].西北植物學報,2015,35(5):915-921.

LIU X Y,HUO X W,YANG M,etal. Genetic diversity analysis and primary core collection construction in yam(DioscoreaoppositaThunb.) by ISSR marker[J].ActaBot.Boreal.-0ccident.Sin.,2015,35(5):0915-0921.

[13]云天海,鄭道君,謝良商,等.中國南瓜海南農家品種間的遺傳特異性分析和DNA指紋圖譜構建[J].植物遺傳資源學報,2013,14(4):679-685.

YUN T H,ZHENG D J,XIE L S,etal.Analysis of genetic specificity and DNA fingerprinting establishment for the Hainan island landraces ofCucurbitamoschata[J].JoumalofPlantGeneticResources, 2013,14(4):679-685.

[14]袁海靜,安巍,李立會,等.中國枸杞種質資源主要形態學性狀調查與聚類分析[J].植物遺傳資源學報,2013,14(4):627-633.

YUAN H J,AN W,LI L H,etal.The investigation and cluster analysis of main morphological characters for germplasm of Chinese wolfberry [J].JoumalofPlantGeneticResources,2013,14(4):627-633.

[15]簡永興,馬英姿,彭映輝,等.枸杞的染色體核型分析[J].中國中藥雜志,1997,22(9):532-533.

JIAN Y X,MA Y Z,PENG Y H,etal.Analysis of chromosme karyotype ofLyciumchinenseMill.[J].ChinaJournalofChineseMateriaMedica,1997,22(9):532-533.

[16]馬永平,趙海燕,楊少娟.枸杞多種同工酶水平的遺傳多樣性分析[J].安徽農業科學,2010,38(8):4 042-4 043.

MA Y P,ZHAO H Y,YANG S J.Analysis of the genetic diversity of Chinese wolfberry at the levels of various isozyme[J].JournalofAnhuiAgriculturalScience,2010,38(8):4 042-4 043.

[17]張滿效,陳拓,肖雯,等.不同鹽堿環境中寧夏枸杞葉生理特征和RAPD分析[J].中國沙漠,2005,25(3): 391-396

ZHANG M X,CHEN T,XIAO W,etal.Physiological features and RAPD analysis ofLyciumbarbarumleaves in different saline habitats [J].JournalofDesertResearch,2005,25(3):391-396.

[18]思彬彬,王鎮. ISSR-PCR分子標記法鑒別寧杞1號與雄性不育枸杞[J].安徽農業科學,2011,39(14): 8309-8310.

SI B B,WANG Z.Identification of No.1 and male sterility ofLyciumbarbarumL.by ISSR-PCR molecular marker technique[J].JournalofAnhuiAgriculturalScience,2011,39(14):8 309-8 310.

[19]邵千順,高磊,等.利用SSR技術對17份枸杞材料進行遺傳多樣性分析及標準指紋圖譜構建[J].北方園藝,2015,(12):91-95.

SHAO Q S,GAO L,etal.Analysis of genetic diversity and construction of fingerprint ofLyciumbararumL.using SSR technology[J].NorthernHorticulture,2015,(12):91-95.

[20]吳龍軍,門惠芹,尹躍,等.枸杞品種SRAP分析[J].寧夏農林科技,2014,55(12):20-22.

WU L J,MEN H Q,YIN Y,etal.Analysis ofLyciumbarbarumvarieties by using SRAP[J].NingxiaJournalofAgricultureandForestryScienceandTechnology,2014,55(12):20-22.

[21]臘萍,羅淑萍,章建新,等.甜菜總DNA不同提取方法的研究[J].新疆農業大學學報,2006,29(2):43-46.

LA P,LUO S P,ZHANG J X,etal.Studies on different methods of extracting sugar beet total DNA[J].JournalofXinjiangAgriculturalUniversity, 2006,29(2):43-46.

[22]楊祥燕,蔡元保,黃秋偉,等.番木瓜主栽品種SCoT指紋圖譜構建及遺傳變異分析[J].西北植物學報,2013,33(9):1 756-1 761.

YANG X Y,CAI Y B, HUANG Q W,etal. SCoT fingerprints and genetic variations of the papaya (CaricapapayaL.)major cultivars[J].ActaBot.Boreal.-0ccident.Sin.,2013,33(9):1 756-1 761.

[23]安巍,王亞軍,尹躍,等.枸杞種質資源的SRAP分析[J].浙江農業學報,2013,25(6):1 234-1 237.

AN W,WANG Y J,YIN Y,etal.SRAP analysis of wolfberry germplasms[J].ActaAgriculturaeZhejiangensis,2013,25(6):1 234-1 237.

[24]尹躍.枸杞品種(系)分子鑒定及親緣關系分析[D].福州:福建農林大學,2013．

[25]李超,羅淑萍,曾斌,等.新疆核桃種質資源遺傳多樣性的ISSR分析[J].中國農業科學,2011,44(9): 1 871-1 879.

LI C,LUO S P, ZENG B,etal. Analysis of genetic diversity of germplasm resources of walnut (JuglansregiaL.)revealed by ISSR in Xinjiang of China[J].ScientiaAgricultureSinica, 2011,44(9):1 871-1 879.

[26]楊培奎,莊東紅,馬瑞君,等.粵東地區橄欖種質資源遺傳多樣性的ISSR分析[J].中國農學通報,2011,27(24):86-92.

YANG P K,ZHUANG D H,MA R J,etal.The ISSR analysis of genetic diversity ofCanariumalbumL.germplasm resources in eastern Guangdong[J].ChineseAgriculturalScienceBulletin,2011,27(24):86-92.

(編輯:宋亞珍)

Analysis of Genetic Diversity of Germplasm Resources ofLyciumbarbarumL.Revealed by SRAP in Xinjiang of China

ZHA Meiqin1, ZHAO Yulin2,LI Jiang1*, ZHU Yu1, LUO Shuping1, HU Yue1

(1. College of Forestry Science and Horticulture, Xinjiang Agricultural University, Urumqi 830052,China;2.Management Center of Jinghe County Wolfberry , Jinghe, Xinjiang 833300 , China)

Abstract:SRAP markers were used to study the genetic diversity and phylogenetic relationship for providind a theoretical basis for identification and crossbreeding of genetic resources of Lycium barbarum L.in Xinjiang of China. The results are: (1)a total of 310 loci were produced by 12 pairs of SRAP primers, and polymorphic loci were 264 which accounted for 84.61% in the total amplified fragments. The polymorphism information content (PIC) values of these markers varied from 0.76 to 0.93 with an average of 0.83. Mean values of observed number of alleles(Na),effective number of alleles (Ne),Nei’s gene diversity (H) and Shannon’s information index(I) were 1.846 1, 1.386 9, 0.228 0 and 0.352 0.(2)Range of genetic similarity (GS) was 0.590 3 to 0.903 2 among 30 wolfberry samples. Cluster analysis showed that samples could be divided into 2 groups and 5 subgroups accordingly at the GS of 0.70 and 0.76. The principal coordinate analysis and clustering results are basically consistent. Research shows the genetic diversity of germplasm resources of L. barbarum L. in Xinjiang was relatively abundant. The genetic difference between wild species and cultivars (lines) was relatively large,show a distant relationship, and the genetic difference among cultivars (lines) was relatively small, show a close relationship.

Key words:Lycium barbarum L.；sequence-related amplified polymorphism (SRAP)；cluster analysis；principal coordinates analysis；genetic diversity；

文章編號:1000-4025(2016)04-0681-07

doi:10.7606/j.issn.1000-4025.2016.04.0681

收稿日期:2015-10-12;修改稿收到日期:2016-03-24

基金項目:國家林業公益性行業科研專項(201304701-1)；新疆自治區果樹學重點學科基金資助

作者簡介:查美琴(1981-)，女，在讀碩士研究生，主要從事林木生物技術研究。E-mail:zhamq2016@126.com *通信作者:李疆(1959-)，男，教授，博導，主要從事林木種質資源研究。E-mail：lijiangxj@163.com

中圖分類號:Q346+.5

文獻標志碼:A