鼻敏康顆粒對肺氣虛變應性鼻炎大鼠IL-4、IL-12的影響

孫晉茜，毋桂花（山西中醫學院，山西太原030024）

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鼻敏康顆粒對肺氣虛變應性鼻炎大鼠IL-4、IL-12的影響

孫晉茜，毋桂花
（山西中醫學院，山西太原030024）

摘要目的：探討鼻敏康顆粒對肺氣虛變應性鼻炎（AR）大鼠白細胞介素4（IL-4）、白細胞介素12（IL-12）水平的影響，從而分析鼻敏康顆粒的作用機制。方法：建立肺氣虛變應性鼻炎大鼠模型，采用酶聯免疫吸附實驗檢測大鼠鼻黏膜中IL-4、IL-12的含量，觀察鼻敏康顆粒對鼻黏膜T淋巴細胞的影響。結果：與模型對照組比較，西藥組與中藥治療組IL-4水平均降低，IL-12水平均升高，差異具有統計學意義（P＜0.05，P＜0.01）。結論：鼻敏康顆粒可下調肺氣虛AR大鼠鼻黏膜IL-4水平、上調IL-12水平，通過平衡細胞因子水平發揮療效。

關鍵詞變應性鼻炎；鼻敏康顆粒；肺氣虛；IL-4；IL-12

變應性鼻炎（allergic rhinitis，AR）屬IgE介導的I型變態反應，以發作性噴嚏、流涕和鼻塞為主要癥狀［1］。AR本身雖非嚴重的致命性疾病，但因其病情反復，若長期不愈，可導致變應性鼻竇炎、鼻息肉、哮喘和慢性支氣管炎等一系列呼吸道并發癥，嚴重影響人們的健康和生活質量［2-3］。所以，如何提高AR的防治水平，減少復發頻率，已引起社會各界的廣泛關注，成為迫切需要解決的社會問題。中藥制劑治療AR療效肯定，但作用機制尚未明確。為進一步研究鼻敏康顆粒治療AR的機制，本文從細胞因子水平入手，以肺氣虛型AR大鼠為研究對象，觀察鼻敏康顆粒對大鼠鼻黏膜白細胞介素4（IL-4）、白細胞介素12（IL-12）水平的影響，為鼻敏康顆粒的臨床應用提供實驗依據和支持，現報道如下。

1材料與方法

1.1實驗材料

1.1.1實驗動物由中國人民解放軍軍事醫學科學院實驗動物中心提供，雌雄各半，SD大鼠60只，2月齡，體質量（200±20）g，以標準大鼠飼料喂養。

1.1.2儀器和藥物超凈工作臺（型號：SW-CJ-1F），顯微鏡（型號：Olympus AX80），煙熏箱（100 cm ×85 cm×85 cm，容積為72 L）。卵白蛋白（OVA）（美國SIGMA公司生產，北京索萊寶科技有限公司分裝），脂多糖（LPS）（美國Sigma公司生產），Al（OH）3粉末（廣州化學試劑廠生產），PBS（磷酸鹽緩沖液）（上海亨代勞生物有限公司），甲醛溶液、戊二醛（上海化學試劑公司生產），試劑盒（上海森雄科技實業有限公司），紅金龍香煙（湖北中煙工業有限責任公司）。鼻敏康顆粒（山西醫科大學第一附屬醫院制劑室提供，江陰天江藥業有限公司生產），氯雷他定片（山西中醫學院附屬醫院藥房提供，上海先靈葆雅制藥有限公司生產）。

1.2實驗方法

1.2.1分組大鼠自由喂養1 w后，將大鼠按體質量隨機分為4組，每組15只，即空白組、模型對照組（肺氣虛+AR模型）、中藥治療組（鼻敏康顆粒）、西藥組（氯雷他定）。

1.2.2造模先建立肺氣虛模型，再進行AR鼻炎模型的復制。

肺氣虛模型的建立：參照教材《實用中醫證候動物模型學》“煙熏肺氣虛造模法”［4］，具體如下：除空白組不作處理外，其余組（模型對照組、中藥治療組和西藥組）分別于第1天將LPS 200 μg/200 μL注入大鼠氣管內，第2～13天每日上午將大鼠置于容積72 L煙熏箱內用紅金龍牌香煙熏0.5 h；第14天時再次注入同樣劑量LPS，第15～28天每日上午同樣方法煙熏大鼠0.5 h。觀察大鼠的食量、活動量均減少，體質量增幅減輕，蜷縮拱背，呼吸急促，頻發性咳嗽，行動遲緩等提示造模成功。

AR鼻炎模型的復制：參照目前國內“卵白蛋白注射及鼻腔黏膜刺激造模法”［5］，結合預實驗，確定最佳方式如下：①基礎致敏：以0.3 mg OVA+30 mg Al（OH）3作佐劑，配入1 mL NaCl制備成的混懸液對大鼠行腹腔注射基礎致敏，隔日1次（即第1天，第3天，第5天，第7天，第9天，第11天，第13天），共7次；②激發（強化致敏）：從第14天開始，以1%OVA滴鼻，每次50 μL，1次/d，連續14 d。空白組以生理鹽水腹腔注射及滴鼻處理，方法及步驟不變。

1.2.3給藥全身致敏造模結束后予以藥物治療，西藥組和中藥治療組根據“實驗動物人鼠劑量換算方法計算用藥量”，分別給予大鼠成人等效量的10倍灌胃（10g/kg），每日1次，連續7 d。空白組和模型對照組用同等劑量生理鹽水灌胃。

1.2.4鼻黏膜分離處理及檢測各組大鼠在滴鼻結束后，麻醉（10%水合氯醛腹腔注射）游離上頜骨，沿鼻中線將鼻腔剪開，充分暴露鼻中隔，剝取鼻黏膜并稱重。加入一定量的PBS（pH=7.4），用勻漿器將標本勻漿充分。離心20 min左右（2 000～3 000轉/min）。收集上清，分裝后一份檢測IL-4含量、IL-12含量，其余冷凍備用。

1.3統計學方法

采用SPSS19.0統計軟件，計數資料用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2結　果

各組大鼠鼻黏膜IL-4、IL-12含量比較，結果見表1。

表1　大鼠鼻黏膜IL-4、IL-12含量比較　（?±s）

由表1可見，與模型對照組比較，中藥治療組與西藥組IL-4含量降低，IL-12含量升高，差異有統計學意義（P＜0.05，P＜0.01），且中藥治療組的療效較西藥組更顯著。

3討　論

變應性鼻炎（AR）又稱過敏性鼻炎，是耳鼻喉科的常見病、多發病。現代醫學認為引起疾病的直接原因是變應原，同時還與遺傳、環境因素相關。目前其發病機制尚未完全闡明，大量研究表明Th1/Th2的平衡在機體免疫調節中起關鍵性作用，Thl/Th2細胞失衡是AR發病的生物學基礎［6］。IL-4由活化的Th2細胞產生，被公認為是參與AR發生過程中最重要的細胞因子，它可通過刺激B細胞生長促進IgE的合成，激活中性粒細胞和巨噬細胞的協調影響IgE分泌，加強Th2的促炎癥功能，導致變態反應炎癥。IL-12是由單核細胞、B淋巴細胞對細胞內寄生物發生反應而產生的一種異源二聚體分子，具有廣泛的免疫活性，并能促進炎性組胺釋放減少，是AR發病過程中重要的抗炎因子，最終抑制AR發生［7-8］。因此，細胞因子水平變化在AR發生過程中起著不同的調節作用。

變應性鼻炎根據臨床癥狀與祖國醫學的“鼻鼽”“鼻嚏”相類似，中醫認為本病多由臟腑虧損，正氣虛弱，腠理疏松，外邪侵襲所致。風寒之邪乘虛犯鼻，肺氣失宣，氣不攝津，津水外溢，而致鼻癢、噴嚏、流清涕，因此其病變部位在肺。劉華平等［9］搜集整理“萬方數據庫”關于AR的相關文獻，對該病的辨證進行頻數統計分析，納入的102篇文獻中以肺氣虧虛型最多。鼻敏康顆粒是導師毋桂花副教授多年總結的有效經驗方，由黃芪、防風、白術、白芷、藿香、陳皮、

蟬蛻、細辛、五味子組成，方中黃芪為君益氣固表，臣以白術補氣健脾，防風、白芷散風通竅，細辛溫肺化飲、宣通鼻竅，佐用蟬衣搜風止癢，五味子斂肺止涕，甘草調和諸藥，共奏補益肺脾、祛風止癢之功。本方應用整體觀念與專病專方結合，突出了中醫藥治療肺氣虛變應性鼻炎的優勢。

本實驗結果顯示：模型對照組大鼠鼻黏膜IL-4含量檢測值較空白組高，IL-12含量檢測值較空白組低，這種改變提示AR的發生可能與IL-4升高、IL-12水平降低有關，證實了鼻黏膜中Th1/Th2細胞平衡遭到破壞，Th1/Th2細胞分泌的炎性因子比例失調是導致AR發病的主要因素之一。而中藥可下調鼻黏膜IL-4水平，上調IL-12水平，且略優于西藥。鼻敏康顆粒從鼻黏膜細胞因子水平的角度出發，通過平衡Th1/Th2細胞水平，達到治療AR的目的，為鼻敏康顆粒臨床應用提供了一定的實驗依據。

參考文獻

［1］中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志編輯委員會，中華醫學會耳鼻咽喉科分會.變應性鼻炎診治原則和推介方案［J］.中華耳鼻咽喉科雜志，2005，40 （3）：166-167.

［2］Bousquet N，Khaltaev A A.Allergic rhinitis and its impact on Asthma（ARIA）2008［J］.Allergy，2008（63）：8-160.

［3］門九章，李孝波.麻芥沖劑治療大鼠變應性鼻炎的實驗研究［J］.山西中醫學院學報，2007，8（1）：20.

［4］陳小野.實用中醫癥候動物模型學［M］.北京：北京醫科大學中國協和醫科大學聯合出版社，1993：28.

［5］宋建明，黃秀清，林燕慧，等.變應性鼻炎大鼠模型的建立［J］.吉林大學學報：醫學版，2012，38（6）：1 152-1 155.

［6］魏欣.變應性鼻炎的發病機制［J］.海南醫學，2011，22（10）：8-11.

［7］彭華，陳勇挺，汪建，等.白介素4與白介素12在變應性鼻炎、哮喘和特應性皮炎中的表達及意義［J］.廣東醫學，2010，31（6）：727-728.

［8］魏燕高，肖喜艷，巴云鵬.變應性鼻炎患者血清IL-2、IL-4及IL-12含量及意義［J］.河南醫學研究，2012，21（1）：88-92.

［9］劉華平.過敏性鼻炎-哮喘綜合征中醫證型分布研究初探［J］.中醫藥導報，2011，17（8）：37-38.

（編輯：梁葆朱）

The effects of Biminkanggranules on expressions of IL-4 and IL-12 in nasal mucosas of allergic rhinitis rat models with deficiency of lung-qi

Sun Jinqian，Wuguihua
（Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）

AbstractObjective：To observe the effect of Biminkanggranules on interleukin 4（IL-4），interleukin 12（IL-12）of allergic rhinitis（lung-qi deficiency）rats and analyze the mechanism of Biminkanggranules.Methods：Rat models of allergic rhinitis with lung-qi deficiency were established，and the contents of IL-4 and IL-12 in nasal mucosa of rats were detected by enzyme linked immunosorbent assay.Results：Compared with the modelgroup，IL-4 levels were decreased，IL-12 levels were elevated in Western medicinegroup and Chinese medicinegroup，the difference is statistically significant（P＜0.05，P＜0.01）.Conclusion：Biminkanggranules can down-regulate the level of IL-12 and up-regulate the level of IL-4.It plays the role on allergic rhinitis（lung-qi deficiency）through balancing cytokine levels.

Key wordsallergic rhinitis；Biminkanggranules；lung-qi deficiency；IL-4；IL-12

中圖分類號：R285.5

文獻標識碼：A

文章編號：1671-0258（2016）02-0020-03

［基金項目］山西省自然科學基金（2013011055-6）

［作者簡介］孫晉茜，在讀碩士，E-mail：sjx351452671@qq.com

［通訊作者］毋桂花，副教授，碩士研究生導師，E-mail：wgh0306@163.com