細菌雙雜交系統的改進

王俊陽，王為善，趙華，楊克遷 天津科技大學　生物工程學院，天津　300457 中國科學院微生物研究所 微生物資源前期開發國家重點實驗室，北京　000

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細菌雙雜交系統的改進

王俊陽1，王為善2，趙華1，楊克遷2
1 天津科技大學生物工程學院，天津300457
2 中國科學院微生物研究所 微生物資源前期開發國家重點實驗室，北京100101

王俊陽, 王為善, 趙華, 等. 細菌雙雜交系統的改進. 生物工程學報, 2016, 32(2): 231–240.

Wang JY, Wang WS, Zhao H, et al. The modified bacterial two-hybrid system. Chin J Biotech, 2016, 32(2): 231–240.

摘 要:解析蛋白質之間的相互作用，對理解調控和代謝等生物學過程具有重要意義。其中基于互補腺苷酸環化酶功能的細菌雙雜交系統是一種研究蛋白質之間相互作用的有效手段。本文在利用該系統時發現存在假陽性高的缺陷。進一步報告基因活性分析表明產生假陽性的原因是不同克隆的生理狀態影響了LacZ的輸出，即lacZ啟動子除了受cAMP信號分子的控制，還受到其他調控蛋白的直接或間接的調控。為了降低生理因素對報告基因的影響，我們向該系統引入用多拷貝lacZ啟動子控制的gfp報告基因。這不僅通過增加lacZ啟動子的數量，弱化了生理因素的影響；還實現了第二個報告基因gfp與lacZ同時報告蛋白質之間的相互作用情況，提高了輸出的準確性。系統的實驗驗證表明，我們改進的細菌雙雜交系統的靈敏性確實得到大幅提高。

關鍵詞:細菌雙雜交系統，靈敏性，蛋白質相互作用，改進

Received: April 5, 2015; Accepted: May 21, 2015

Supported by: National Natural Science Foundation of China (Nos. 31400034, 31130001), the Ministry of Science and Technology of China (No. 2013CB734001).

國家自然科學基金 (Nos. 31400034, 31130001)，國家科技部基金 (No. 2013CB734001) 資助。

網絡出版時間：2015-06-08網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/11.1998.Q.20150608.1423.004.html

基于腺苷酸環化酶的細菌……