新生兒缺氧缺血性腦病血清TNF-α和IL-6動態變化及臨床意義

盛紅玲,姜元培，王保剛，張秋業

(1.山東省交通醫院兒科，山東濟南 250031；2.濟南市中心醫院神經外科，山東濟南 250031；3.青島大學附屬醫院兒內科，山東青島 266003)

·論著·

新生兒缺氧缺血性腦病血清TNF-α和IL-6動態變化及臨床意義

盛紅玲1,姜元培2△，王保剛1，張秋業3

(1.山東省交通醫院兒科，山東濟南 250031；2.濟南市中心醫院神經外科，山東濟南 250031；3.青島大學附屬醫院兒內科，山東青島 266003)

摘要:目的探討新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)患者血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)動態變化及臨床意義。方法選取3所醫院收治的新生兒HIE患者98例，按病情嚴重程度分為輕度、中度和重度組，并選擇同期于3所醫院產科分娩的健康新生兒35例作為對照組，對比各組出生后1、3、7 d TNF-α、IL-6水平，同時監測腦血流動力學指標。結果TNF-α、IL-6水平隨著HIE患者病情的加重而上升，且均高于對照組，差異具有統計學意義(P<0.05)；同時，HIE患兒出生后7 d的TNF-α與IL-6水平較出生后1、3 d相比，有顯著降低，中重度組較輕度組相比，腦血流速度明顯減慢；重度組腦血管阻力指數較中、輕度相比有明顯上升，差異具有統計學意義(P<0.05)。結論TNF-α、IL-6的水平與HIE嚴重程度存在相關關系，動態監測其水平變化對早期診斷HIE、評價病情嚴重程度、判斷預后具有重要指導意義。

關鍵詞:缺氧缺血性腦病；腫瘤壞死因子-α；白細胞介素-6

新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)是指各種圍生期窒息導致的胎兒或新生兒腦損傷，是導致新生兒神經系統功能障礙或死亡的主要原因[1-2]。近年來，細胞因子在新生兒HIE中的作用逐漸受到重視[3]，本研究旨在通過監測患兒血清中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)的水平變化，對新生兒HIE的病情嚴重程度與預后進行評估，從而為臨床預測與診斷HIE提供參考依據。

1資料與方法

1.1研究對象選取2013年4月至2015年2月來3所醫院就診的HIE患兒98例，診斷依據與臨床分度標準均符合2004年制訂的新生兒HIE修訂的新標準[4]。其中輕度HIE患兒34例，男19例，女15例，胎齡36～40周，平均胎齡(38.3±1.6)周，出生時體質量2 759～3 542 g，平均體質量(3 263±308)g；中度HIE患兒33例，其中男17例，女16例，胎齡37～40周，平均胎齡(38.6±1.7)周，出生時體質量2 743～3 613 g，平均體質量(3 254±317)g；重度HIE患兒31例，男16例，女15例，胎齡37～41周，平均胎齡(38.9±1.5)周，出生時體質量2 802～3 590 g，平均體質量(3 307±324)g；選擇同期于3所醫院產科分娩的健康新生兒35例作為對照組，胎齡37～40周，平均胎齡(38.7±1.4)周，出生時體質量2 811～3 585 g，平均體質量(3 295±342)g。各組新生兒在性別比例、胎齡與出生體質量方面基本一致，差異無統計學意義(P>0.05)。所有新生兒均無窒息史、感染與神經系統疾病。

1.2方法(1)標本采集：入院后HIE患兒與對照組新生兒分別于出生后1、3、7 d股靜脈穿刺采血2 mL，置于無熱源無內毒素的試管內，室溫放置1 h，3 000 r/m離心10 min，分離血清，置于-20 ℃冰箱保存待測。(2)樣品檢測：采用ELISA雙抗體夾心法進行測定，TNF-α、IL-6試劑盒由北京晶美生物工程有限公司提供，酶標儀為美國Bio-Tekcere，其性能符合要求，操作過程按試劑盒說明書制訂的標準操作程序(SOP)進行。采用試劑盒提供的標準稀釋液稀釋標準品，繪制標準曲線。每次檢測均設空白對照，同時，各點均做2次平行檢測。繪制標準曲線，于450 nm波長處讀取樣品吸光值，根據標準曲線讀取相應的TNF-α、IL-6水平。

1.3觀察指標(1)記錄HIE患兒與對照組新生兒分別于出生后1、3、7 d TNF-α、IL-6水平；(2)腦血流速度監測：采用彩色經多普勒超聲儀監測腦血流速度，于新生兒安靜狀態下測定大腦中左主干動脈(LMCA)與右主干動脈(RMCA)的收縮期峰流速(Vs)與舒張期末峰流速(Vd)，同時記錄脈動指數(RI)。

2結果

2.1HIE各組與對照組TNF-α、IL-6各時間點水平比較研究結果顯示，隨著HIE患者病情的加重，TNF-α、IL-6水平隨之上升，且均高于對照組，差異具有統計學意義(P<0.05)。同時，HIE各組患者新生兒出生后7 d的TNF-α與IL-6水平較出生后1、3 d相比顯著降低，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2HIE各組與對照組腦血流速度比較輕度組HIE患者LMCA與RMCA的Vs與Vd與對照組相比，差異無統計學意義(P>0.05)，中度組患者與重度組患者與對照組相比，腦血流速度明顯減慢，差異有統計學意義(P<0.05)，結果見表2。

表1　　HIE各組與對照組TNF-α、IL-6各時間點水平對比

*：P<0.05，與同組同參數出生后7 d相比。

表2　　HIE各組與對照組Vs、Vd結果對比

*：P<0.05,與對照組相比。

表3　　HIE各組與對照組腦血管阻力指數對比±s，cm/s)

*：P<0.05，與對照組比較；△：P<0.05，與重度組比較。

2.3HIE各組與對照組腦血管阻力指數比較對照組LMCA為(0.72±0.07)cm/s，RMCA為(0.70±0.08)cm/s，中、輕度組與對照組相比，腦血管阻力指數差異無統計學意義(P>0.05)，而重度組腦血管阻力指數與對照組相比則有明顯增加，且差異具有統計學意義(P<0.05)。同時，重度組較中、輕度患者腦血管阻力指數也有明顯上升，且差異具有統計學意義(P<0.05)。

3討論

新生兒HIE是指因各種圍生期窒息引起的嚴重并發癥，其病因主要包括宮內或出生時窒息引起的代謝障礙或細胞損傷，導致腦血流量降低等。可引發腦水腫、腦室周圍軟化、腦皮層或腦干等部位的局部性壞死。其病情嚴重，病死率高，可導致永久性神經功能障礙，如癲癇、腦癱或共濟失調等。目前為止，對于HIE尚無有效防治措施[5]。國內外一直沿用Sarnat標準作為HIE的分級依據，其主要依據臨床表現并結合影像學結果來進行診斷并評估預后，但這些手段在實踐中存在一定的局限性，不利于臨床的應用。近年來研究表明，新生兒HIE中炎性因子發揮著重要作用，在新生兒腦缺血缺氧數分鐘可即可啟動免疫應答，神經細胞分泌的炎性因子可促進白細胞聚集，同時進一步促進炎性因子的釋放，從而引起一系列炎性反應，因此對血清中TNF-α與IL-6的動態監測對于指導治療與評估預后有著重要作用[6-7]。

TNF-α是由單核巨噬細胞產生的多肽調節因子，具有廣泛生物學活性。研究表明，TNF-α在炎性反應中可誘導生成急性期蛋白，參與炎性反應的許多病理過程，引起局部炎性反應，使機體組織或器官受到一定程度的損害。在顱腦損傷早期，星形膠質細胞與小膠質細胞釋放的TNF-α增加，過高的TNF-α可導致血管內皮細胞損傷，破壞血腦屏障，促進其他細胞因子的合成與分泌，可誘導腦細胞凋亡，加重腦缺血[8]。相關研究證實，在大鼠局灶性腦缺血3～6 h后，TNF-α釋放增加，在缺血再灌注早期，TNF-α水平迅速升高，靜脈注射抗TNF-α的抗體可保護腦組織細胞再灌注損傷，表明TNF-α確實在腦缺血缺氧中有著重要作用[9]。

IL-6是一種具有廣泛免疫調節作用的多細胞源性的細胞因子，腦組織中神經元、膠質細胞與血管內皮細胞等均可合成分泌，但表達量低。正常機體血液中含有一定水平的IL-6，可促進神經營養因子的生成，降低興奮性神經介質與海馬區神經元細胞的毒性，在中樞神經系統中主要起到抗損傷與防御作用，是調控神經系統分化與生長的重要因子[10]。當腦組織受到缺血、缺氧刺激時，顱內IL-6將大量增加，釋放入腦脊液或血液中，導致腦細胞水腫或壞死。動物試驗表明，缺氧缺血性腦損傷時，急劇增加的IL-6可刺激炎性細胞大量聚集，協同發揮細胞毒性作用，加重腦損傷[11]。

本研究結果顯示，HIE患者血清中TNF-α與IL-6的水平明顯高于對照組，且隨著病情程度的加重，TNF-α與IL-6的水平顯著增加。同時研究還表明，隨著病情的好轉，TNF-α與IL-6的水平逐漸下降并趨近正常水平，推測可能在恢復期，腦組織炎性反應已有所改善，腦損傷得到修復。在HIE患者中，腦血流動力學的改變是引發腦損傷的重要致病因素，在缺氧條件下，MCA血流變化最為靈敏，故可作為監測的主要血管。研究顯示，HIE患者Vs、Vd明顯低于健康新生兒，且中、重度組較輕度組相比，腦血流速度明顯減慢，差異具有統計學意義(P<0.05)。同時重度HIE患兒中腦血管阻力指數較中、輕度患兒相比有明顯上升(P<0.05)，其原因可能是機體在缺氧后，腦血流調節功能被破壞，腦組織處于低灌注狀態，腦血流量減少，誘導白細胞聚集于損傷區，使之部分或完全堵塞，同時加速促凝血因子的生成，導致血管內血栓的形成。因此，TNF-α與IL-6的異常變化可導致腦血流動力學紊亂，血流阻力增加，腦血流量降低。綜上所述，TNF-α與IL-6參與了新生兒HIE的病理生理過程，其水平與HIE嚴重程度呈正相關，動態監測其水平變化對早期診斷HIE、評價病情嚴重程度、判斷預后具有重要指導意義。

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Clinical significance of serum TNF-α and IL-6 in neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy

ShengHongling1,JiangYuanpei2△,WangBaogang1,ZhangQiuye3

(1.DepartmentofPediatrics,ShandongJiaotongHospital,Ji′nan,Shandong250031,China;2.DepartmentofNeurosurgery,Ji′nanCentralHospital,Ji′nan,Shandong250031,China;3.DepartmentofPediatricInternal,theAffiliatedHospitalofQingdaoUniversity,Qingdao,Shandong266003,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the clinical significance of dynamic monitoring of serum tumor necrosis factor-α(TNF-α) and interleukin-6(IL-6) in neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE) patients.MethodsTotally 98 cases of neonatal hypoxic ischemic encephalopathy patients were selected as the experimental group,which were divided into mild,moderate and severe group according to the illness severity,meanwhile,35 cases with normal obstetric delivery were selected as control group,and the level of TNF-α,IL-6 was compared between groups after the birth of 1,3 and 7 d,at the same time,cerebral hemodynamic index was monitored.ResultsThe levels of TNF-2 and IL-6 in HIE patients were increased,which was higher than the control group,there was significant differences (P<0.05);At the same time,the level of TNF-α and IL-6 in HIE children 7 d was more than 1 and 3 d after birth,which was decreased significantly.Compared with mild group,cerebral blood flow velocity slowed significantly,Compared to the mild and moderate group,the cerebral vascular resistance index in severe group was increased significantly the difference were statistically significant (P<0.05).ConclusionThe levels of TNF-α and IL-6 were positively correlated with the severity of neonatal hypoxic ischemic encephalopathy,the dynamic monitoring was the index of early diagnosis of hypoxic ischemic brain damage and important indices for evaluating disease severity and prognosis.

Key words:hypoxic-ischemic encephalopathy;tumor necrosis factor-α;interleukin-6

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.10.008

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)10-1322-03

(收稿日期：2015-11-19)