家族性甲狀腺功能亢進(jìn)癥合并高膽固醇血癥家系LDLR基因突變篩查探析

柴曉文，劉旭峰

(天津?yàn)I海新區(qū)海濱人民醫(yī)院：1.檢驗(yàn)科；2.外科，天津 300280)

·論著·

家族性甲狀腺功能亢進(jìn)癥合并高膽固醇血癥家系LDLR基因突變篩查探析

柴曉文1，劉旭峰2

(天津?yàn)I海新區(qū)海濱人民醫(yī)院：1.檢驗(yàn)科；2.外科，天津 300280)

摘要:目的篩查并分析家族性甲狀腺功能亢進(jìn)癥合并高膽固醇血癥LDLR基因突變情況。方法抽取患者及其家屬的外周血DNA，行PCR核酸擴(kuò)增，并行LDLR基因以及載脂蛋白B100(ApoB100)基因測(cè)序分析。結(jié)果該家系3例患者呈常染色體顯性遺傳，存在LDLR基因突變，無(wú)ApoB100基因突變。結(jié)論LDLR基因第13外顯子核苷酸序列的第1 864位G變?yōu)門(mén)，發(fā)生堿基置換，導(dǎo)致天冬氨酸變?yōu)槔野彼幔羌易逍约谞钕俟δ芸哼M(jìn)癥合并高膽固醇血癥的基因突變的主要類(lèi)型，該家族性疾病的發(fā)生與ApoB100基因無(wú)相關(guān)性。

關(guān)鍵詞:家族性甲狀腺功能亢進(jìn)癥；高膽固醇血癥；LDLR基因；基因檢測(cè)

家族性高膽固醇血癥在臨床上常表現(xiàn)為多部位的黃色瘤以及早發(fā)冠心病[1]。其主要為血漿總膽固醇(TC)以及低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)存在明顯的升高。本文為了探討LDLR基因在家族性甲狀腺功能亢進(jìn)癥合并高膽固醇血癥患者中的突變情況，現(xiàn)對(duì)其進(jìn)行PCR擴(kuò)增以及基因序列進(jìn)行測(cè)序分析，報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料本次研究所選研究對(duì)象為1例在本院就診發(fā)現(xiàn)的家族性甲狀腺功能亢進(jìn)癥合并高膽固醇血癥患者及其家系3代共5名成員。其中先證者為26歲女性，另4名成員包括先證者父親，56歲，先證者母親，55歲，先證者姐姐34歲，以及先證者外甥，11歲。

1.2方法

1.2.1血脂測(cè)定清晨采集先證者以及其他4名家屬空腹12 h后的靜脈血。測(cè)定5名成員的外周血TC、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、LDL-C、載脂蛋白A1(ApoA1)、載脂蛋白B100(ApoB100)、促甲狀腺素(TSH)、游離甲狀腺素(T3)、游離三碘甲狀腺原氨酸(T4)。

1.2.2先證者心血管系統(tǒng)檢查對(duì)先證者進(jìn)行心電圖、心臟彩超以及血管超聲檢測(cè)。

1.2.3DNA提取取患者的3 mL外周血樣本，乙二胺四乙酸二鉀抗凝處理。后提取患者DNA，在-20 ℃環(huán)境下保存。

1.2.4LDLR基因和ApoB100基因檢測(cè)提取患者DNA，行PCR，擴(kuò)增LDLR的啟動(dòng)子和外顯子。同時(shí)擴(kuò)增ApoB100基因的3500區(qū)域位點(diǎn)的DNA片段。擴(kuò)增產(chǎn)物行瓊脂糖凝膠電泳鑒定。將患者擴(kuò)增產(chǎn)物與健康者進(jìn)行對(duì)比，篩選出存在異常突變位點(diǎn)的片段，重復(fù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增測(cè)序，避免技術(shù)性錯(cuò)誤。

1.3觀察指標(biāo)(1)先證者心血管系統(tǒng)檢查情況；(2)血脂情況；(3)LDLR基因突變分析；(4)ApoB100基因突變分析。

1.4家族性高膽固醇血癥的診斷成人的血清TC高于7.8 mmol/L，16歲以下大于6.7 mmol/L，或者是成人的血清LDL-C高于4.4 mmol/L。其中患者以及家屬血清TC超過(guò)16 mmol/L且有黃色瘤表現(xiàn)的為純合子高膽固醇血癥，未達(dá)此要求的為雜合子高膽固醇血癥。

2結(jié)果

2.1先證者心血管系統(tǒng)檢查情況分析在患者頸總動(dòng)脈分叉處，中段的內(nèi)中膜發(fā)現(xiàn)增厚現(xiàn)象。主動(dòng)脈瓣以及二尖瓣和三尖瓣存在反流的現(xiàn)象。冠狀動(dòng)脈儲(chǔ)血能力下降。

2.2血脂情況對(duì)5名家系成員進(jìn)行血脂檢測(cè)，結(jié)果顯示，先證者符合高膽固醇血癥的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)。具體檢查結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　　高膽固醇血癥家系5名成員血脂檢測(cè)結(jié)果

2.3LDLR基因突變分析對(duì)先證者的LDLR基因進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)基因突變情況。先證者LDLR基因第13外顯子顯示異常，分析其核苷酸序列，第1 864位堿基G變?yōu)門(mén)，發(fā)生了堿基置換，導(dǎo)致天冬氨酸變?yōu)槔野彼帷；驒z測(cè)發(fā)現(xiàn)先證者父母以及姐姐均存在第13外顯子的異常情況。其中先證者父母為雜合突變，先證者為純合突變。見(jiàn)圖1。

注：ABC分別表示先證者、先證者父親以及先證者母親的測(cè)序圖。

圖1先證者、先證者父親以及先證者母親的測(cè)序圖

2.4ApoB100基因突變分析對(duì)先證者的ApoB100基因擴(kuò)增進(jìn)行基因突變檢測(cè)。結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)正反兩個(gè)方向的基因測(cè)序，其結(jié)果與GenBank中的人類(lèi)ApoB100基因的序列完全吻合，為高度一致的結(jié)果，無(wú)基因突變的發(fā)生。排除了因ApoB100基因突變導(dǎo)致的家族性高膽固醇血癥。見(jiàn)圖2。

圖2　　先證者的ApoB100基因測(cè)序圖

3討論

正常的血脂代謝受甲狀腺激素的調(diào)節(jié)，當(dāng)機(jī)體的甲狀腺激素紊亂時(shí)，出現(xiàn)甲狀腺功能亢進(jìn)癥，可導(dǎo)致血脂的異常，出現(xiàn)高膽固醇血癥[2]。家族性甲狀腺功能亢進(jìn)癥合并高膽固醇血癥的患者，血脂升高情況應(yīng)高度懷疑與遺傳因素有關(guān)[3]。對(duì)其進(jìn)行相關(guān)的基因篩查，明確血脂升高的原因極為重要[4]。

根據(jù)文獻(xiàn)[5]報(bào)道結(jié)果顯示，高膽固醇血癥數(shù)據(jù)庫(kù)中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)1 741種與LDLR基因突變相關(guān)的變異類(lèi)型。高膽固醇血癥最主要的病因是LDLR基因突變所引發(fā)的受體功能減退[6-7]。

本文為了篩查家族性甲狀腺功能亢進(jìn)癥合并高膽固醇血癥LDLR基因突變的情況，并對(duì)其加以分析，選取了1例家族性甲狀腺功能亢進(jìn)癥合并高膽固醇血癥的先證者，對(duì)先證者以及其家族另外4名成員進(jìn)行基因突變的檢測(cè)。由于LDLR基因或者ApoB100基因突變時(shí)均可引發(fā)血漿膽固醇水平的異常升高，導(dǎo)致家族性高膽固醇血癥。因此檢測(cè)LDLR基因的同時(shí)，對(duì)ApoB100基因進(jìn)行排除性檢測(cè)。通過(guò)研究分析可知，所選該家系符合家族性高膽固醇血癥的診斷。先證者的LDLR基因第13外顯子顯示異常，發(fā)生純合突變。對(duì)先證者以及家屬進(jìn)行ApoB100基因檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)異常情況，排除了ApoB100基因突變導(dǎo)致的家族性高膽固醇血癥。通過(guò)基因檢測(cè)診斷，可有效的鑒別出家族性高膽固醇血癥，給予有效的治療可起到顯著的效果。

參考文獻(xiàn)

[1]Cuchel M,Bruckert E,Ginsberg HN,et al.Homozygous familial hypercholesterolaemia:new insights and guidance for clinicians to improve detection and clinical management.A position paper from the Consensus Panel on Familial Hypercholesterolaemia ofthe European Atherosclerosis Society[J].Eur Heart J,2014,35(32):2146-2157.

[2]徐勝媛,潘曉冬,孫立元,等.羊水細(xì)胞低密度脂蛋白受體基因突變分析在家族性高膽固醇血癥產(chǎn)前診斷中應(yīng)用[J].中華實(shí)用診斷與治療雜志,2012,26(4):344-348.

[3]張明明,帖彥青,霍麗靜,等.低密度脂蛋白受體基因I334V突變與高膽固醇血癥的相關(guān)性[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué),2011,14(24):2742-2745.

[4]代艷芳,孫立元,張新波,等.中國(guó)人群家族性高膽固醇血癥LDLR基因突變研究進(jìn)展[J].遺傳,2011,33(1):1-8.

[5]關(guān)嘯,潘曉冬,王春梅,等.低密度脂蛋白受體基因全長(zhǎng)cDNA序列分析法檢測(cè)1例家族性高膽固醇血癥患兒基因突變[J].臨床檢驗(yàn)雜志,2014(7):481-484.

[6]王蓓.家族性高膽固醇血癥的臨床與基因治療新進(jìn)展[J].中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志,2014,22(12):1287-1291.

[7]丁長(zhǎng)霞,王艷芳,劉存杰,等.黃驊市高碘地區(qū)甲狀腺功能亢進(jìn)患者血糖血脂變化[J].河北醫(yī)藥,2013,35(7):1082-1083.

Screening analysis of LDLR gene mutations in familial hyperthyroidism compicated with hyperlipidemia

ChaiXiaowen1,LiuXufeng2

(1.DepartmentofClinicalLaboratory;2.DepartmentofSurgery,HaibinPeople′sHospitalofBinhaiNewArea,Tianjin300280,China)

Abstract:ObjectiveTo detect LDLR gene mutations in familial hyperthyroidism combined with hypercholesterolemia. MethodsDNA were extracted from peripheral blood of the patients and their families. By using polymerase chain reaction (PCR), sequence of the LDLR gene and apolipoprotein B100 gene.ResultsThere were three patients in the pedigree consistent with the characteristic of autosomal dominant disease. And the three had LDLR gene mutations but without apolipoprotein B100 gene mutations. ConclusionThe base of G mutated to T at the 1 864 bp of exon 13 of LDLR gene in the proband and their siblings is the main cause of asparagic acid (Asp) transformed to tyrosine (Tyr), which is the main gene mutation type in familial hyperthyroidism combined with hypercholesterolemia. Apolipoprotein B100 gene is not correlated with this kind of familial disease.

Key words:familial hyperthyroidism;hypercholesterolemia；LDLR gene;genetic testing

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.10.017

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)10-1344-02

(收稿日期：2015-11-22)

作者簡(jiǎn)介：蒲澤晏，男，主任技師，主要從事免疫學(xué)檢驗(yàn)方向的研究。