沙棘葉中總黃酮提取純化工藝研究

安 樂, 郁長治, 郭小娜*

(1.新疆醫科大學第五附屬醫院，新疆烏魯木齊 830011；2.新疆醫科大學第一附屬醫院，新疆烏魯木齊 830054)

沙棘葉中總黃酮提取純化工藝研究

安 樂1, 郁長治2, 郭小娜2*

(1.新疆醫科大學第五附屬醫院，新疆烏魯木齊 830011；2.新疆醫科大學第一附屬醫院，新疆烏魯木齊 830054)

摘要[目的]建立沙棘葉中總黃酮的最佳提取純化工藝。 [方法]采用正交設計試驗，以高效液相色譜圖中主要化學成分的峰面積為指標，考察提取溫度、提取料液比、乙醇濃度對沙棘葉中總黃酮提取率的影響。[結果]確定沙棘葉中總黃酮的最佳提取條件為A3B2C2，即提取溫度60 ℃、料液比1∶10(g∶mL)、乙醇濃度60%；固定超聲功率60 Hz，時間30 min，連續提取2次。[結論]該提取工藝黃酮提取率高，質量易于控制，為沙棘中黃酮類成分的提取和測定提供依據。

關鍵詞沙棘；總黃酮；提取工藝

沙棘又名醋柳、沙棗(Fructushippophae)，為胡頹子科(Elaeagnaceae)植物，是公認的珍貴藥食同源植物[1]，主產于我國內蒙古、新疆、青海等地。沙棘不僅是理想的生態植物同時其中含有的各類化合物也具有很高的藥用價值。沙棘是我國古代藏醫、蒙醫用來治病的常用藥[2-3]，具有活血散瘀、止咳祛痰、利肺養胃等功效。沙棘葉富含黃酮、有機酸、揮發油、萜類、氨基酸等多種成分[4-6]。目前研究較多的沙棘黃酮是沙棘中重要的活性成分，其在心血管疾病方面有突出作用，具有抗心肌缺血、抗心律失、抗血栓形成等作用，同時改善免疫系統，抗癌、抗氧化方面同樣發揮重要作用[7]。近年來國內對沙棘果實的研究非常廣泛，已經趨于成熟[8-9]，但對沙棘葉及其他部位的開發利用還較為欠缺。筆者利用正交設計試驗建立了沙棘葉中總黃酮的提取純化工藝，以期為更充分地開發利用沙棘提供科學的依據。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1研究對象。沙棘葉采自新疆農九師。

1.1.2主要儀器。安捷倫1100高效液相色譜儀；科導5200HP超聲提取儀；賽多利斯211D電子分析天平。

1.1.3主要試劑。對照品有異鼠李素、槲皮素、山柰素，木犀草素購買自中國藥品生物制品檢定所。試驗所用的乙腈、甲醇為色譜純級別，水為雙蒸水；鹽酸、磷酸、乙醇及其他試劑均為分析純級別。

1.2方法

1.2.1高效液相色譜分析條件。分析使用Waters C18色譜柱；高效液相檢測波長為360 nm；柱溫箱溫度25 ℃；流動相由甲醇-乙腈-0.4 %磷酸組成，洗脫方式采用梯度洗脫(表1)，運行時間 25 min，流動相流速1 mL/min，進樣量 20 μL。

表1　HPLC梯度條件

1.2.2對照品溶液的配制。分別精密稱取對照品異鼠李素20.00 mg、槲皮素14.95 mm、山奈素10.10 mg；以甲醇溶解稀釋成濃度分別為80.00、59.80、40.40 g/mL的對照品儲備溶液，備用。

1.2.3供試品溶液的配制。稱取沙棘總黃酮提取物60 mg，加入甲醇30 mL、25% 鹽酸5 mL置于50 mL錐形瓶中，將配置好的溶液于 90 ℃水浴中水解60 min后冷卻備用。精密吸取水解后的溶液5 mL，用甲醇定容至10 mL容量瓶中，搖勻待測。

1.2.4標準曲線的繪制。分別精密移取“1.2.2”條件下的3種對照品溶液1、2、3、4、5、6、7、8 mL至10 mL的容量瓶中，加入甲醇稀釋定容。在“1.2.1”色譜條件下進樣20 μL，記錄色譜圖。以高效液相色譜圖峰面積為縱坐標、對照品濃度為橫坐標繪制標準曲線。

1.2.5正交試驗設計。選取提取溫度(A)、料液比(B)和乙醇濃度(C)為影響沙棘葉中總黃酮提取率的3個主要因素，各因素選取3個水平，采用L9(34)正交試驗表(表2)設計試驗；其他條件為超聲提取功率60 Hz，提取時間30 min，連續提取2次。精確稱取沙棘葉干粉20.0 g，加入正交設計中的不同溶劑系統，在其他提取條件平行不變的條件下操作，提取結果按“1.2.1”條件運行，以各組積分峰面積之和與樣品質量的比值記作(A/m)為量化指標進行樣品分析。

表2　正交試驗因素水平

2結果與分析

2.1HPLC色譜條件由圖1可見，在“1.2.1”色譜條件下，樣品中各組分的色譜峰分離度良好，符合高效液相色譜定量分析的要求。

注：1為槲皮素；2為木犀草素；3為山柰素；4為異鼠李素。Note: 1. Quercetin; 2. Luteolin; 3. Kaemperfol; 4. Isorhamnetin.圖1　混合對照品(a)和沙棘樣品(b)色譜圖Fig. 1　Chromatograms of mixed reference substances (a) and F. hippophae samples (b)

2.2線性關系的考察以峰面積為縱坐標、對照品濃度為橫坐標繪制標準曲線，得到槲皮素、山柰素和異鼠李素的線性方程分別為Y=66.96X-5.99(r=0.999 5)、Y=50.11X-19.5(r=0.999 9)、Y=69.13X-39.5(r=0.999 9)，表明它們分別在5.98～47.84、4.04～32.32、8.00～64.00 μg/mL濃度范圍內呈良好的線性關系。

2.3正交試驗由表3可知，影響沙棘葉中總黃酮提取率的因素主次順序依次為A、C、B，且提取沙棘葉中總黃酮的最佳工藝條件為A3B1C2，即提取溫度60 ℃、料液比為1∶8(g∶mL)、乙醇濃度60%；但在實際操作過程中干燥的沙棘葉粉末吸水性較大，影響提取的流動性，不利于循環超聲提取，且方差分析可知，在P>0.1時，料液比對總黃酮的提取無顯著性影響，綜合分析考慮將料液比確定為1∶10。最終確定提取沙棘葉中總黃酮的最佳工藝條件為A3B2C2，即提取溫度60 ℃、料液比為1∶10、乙醇濃度60%，其中超聲功率60 Hz，時間30 min，連續提取2次。

表3　正交試驗結果分析

3結論

該研究以沙棘葉中的總黃酮峰面積為提取指標，分別考察了提取溫度、乙醇濃度、料液比對提取效率的影響，并通過正交設計試驗對提取方法進行了優化。結果表明，沙棘葉中總黃酮最佳工藝條件為提取溫度60 ℃、料液比1∶10、乙醇濃度60%，超聲功率60 Hz，時間30 min，連續提取2次。該提取工藝總黃酮提取率高且穩定，質量易于控制，為沙棘中黃酮類成分的提取和測定提供依據。

參考文獻

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Extraction and Purification of Total Flavones from Leaves ofFructushippophae

AN Le1, YU Chang-zhi2, GUO Xiao-na2*

(1. The Fifth Teaching Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi, Xinjiang 830011; 2. The First Teaching Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi, Xinjiang 830054)

Abstract[Objective] To develop a method for extraction and purification of total flavones from leaves of Fructus hippophae. [Method] With HPLC peak area of major chemical compounds as the index, orthogonal test design was designed. Effects of extraction temperature, solid-liquid ratio and ethanol concentration on the extraction rate of flavones of F. hippophae were researched. [Result] The optimal extraction condition was A3B2C2, which was 60 ℃ extraction temperature, 1∶10 (g∶mL) solid-liquid ratio, 60% ethanol concentration, 60 Hz extraction power, 30 min extraction time and 2 extraction times. [Conclusion] This method is easy control and has high extraction rate of flavones, which provides the basis for extraction and detection of flavones from leaves of F. hippophae.

Key wordsFructus hippophae; Total flavones; Extraction

作者簡介安樂(1987- )，女，回族，新疆烏魯木齊人，藥師，從事中藥新劑型研究。*通訊作者，藥師，碩士，從事藥物新劑型研究。

收稿日期2016-03-08

中圖分類號S 789

文獻標識碼A

文章編號0517-6611(2016)11-154-02