氣相色譜法測(cè)定參芎葡萄糖注射液中甘油含量*

馮廣衛(wèi)， 付思紅， 孫　緒， 朱　迪， 鄭　林， 李勇軍， 王愛(ài)民**

(1.貴州醫(yī)科大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院， 貴州 貴陽(yáng)　550004； 2.貴州醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院， 民族藥與中藥開(kāi)發(fā)應(yīng)用教育部工程研究中心， 貴州 貴陽(yáng)　550004)

氣相色譜法測(cè)定參芎葡萄糖注射液中甘油含量*

馮廣衛(wèi)1， 付思紅2， 孫緒2， 朱迪2， 鄭林2， 李勇軍2， 王愛(ài)民2**

(1.貴州醫(yī)科大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院， 貴州 貴陽(yáng)550004； 2.貴州醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院， 民族藥與中藥開(kāi)發(fā)應(yīng)用教育部工程研究中心， 貴州 貴陽(yáng)550004)

[摘要]目的： 建立參芎葡萄糖注射液中甘油含量方法的測(cè)定。方法： 采用氣相色譜法對(duì)參芎葡萄糖注射液中甘油的含量測(cè)定進(jìn)行測(cè)定,色譜柱為AT-624毛細(xì)管柱、初始140 ℃保持13.5 min、120 ℃/ min升至255 ℃、保持5 min；分流進(jìn)樣，分流比5.0，進(jìn)樣口溫度250 ℃，進(jìn)樣量1 μL，F(xiàn)ID檢測(cè)器溫度300 ℃，柱流量6.0 mL/min，載氣高純氮?dú)狻＝Y(jié)果: 成功建立了氣相色譜法測(cè)定參芎葡萄糖注射液中甘油的方法，所測(cè)甘油濃度在1～10 g/L內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為102.5%，RSD為2.0%；精密度試驗(yàn)RSD為0.9%，重復(fù)性試驗(yàn)RSD為2.4%，穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD為4.2%。結(jié)論： 氣相色譜測(cè)定參芎葡萄糖注射液中甘油含量的方法，操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確可靠。

[關(guān)鍵詞]甘油; 葡萄糖； 參芎； 色譜法,氣相

參芎葡萄糖注射液為已上市的注射劑，由丹參提取物、鹽酸川芎嗪配伍組成，具有抗血小板聚集，擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈作用，用于閉塞性腦血管病及其它缺血性血管疾病的治療、療效確切[1-3]。現(xiàn)行參芎葡萄糖注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)其中丹參素和鹽酸川芎嗪進(jìn)行定量控制，難以全面控制產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量[4]。課題組前期建立了參芎葡萄糖注射液中6種主要成分的含量測(cè)定方法以及指紋圖譜測(cè)定方法[5-6]。甘油作為參芎葡萄糖注射液中的主要輔料，具有調(diào)節(jié)滲透壓，增溶等作用。有研究指出，高濃度甘油對(duì)中樞神經(jīng)有直接作用和滲透障礙，可引起溶血或其他毒副作用，這在參芎葡萄糖注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[WS-10001-(HD-1136)-2002-2012]中并未加以控制[7]。本研究在前期多成分含量測(cè)定和指紋圖譜研究的基礎(chǔ)上，采用氣相色譜測(cè)定參芎葡萄糖注射液中甘油，為本產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

1儀器與試藥

GC-2010Plus氣相色譜儀，配置氫火焰離子化檢測(cè)器，GC-Slution色譜工作站(日本島津)。甘油分析標(biāo)準(zhǔn)品(阿拉丁試劑公司，含量>99.5%)，二甘醇(分析純，阿拉丁試劑公司，含量>99.0%)，無(wú)水乙醇(分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，8批次參芎葡萄糖注射液均由貴州景峰注射劑有限公司提供。

2方法與結(jié)果

2.1溶液的制備

2.1.1對(duì)照品儲(chǔ)備溶液制備稱取甘油對(duì)照品2.020 8 g，置100 mL量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得儲(chǔ)備液。

2.1.2內(nèi)標(biāo)溶液制備精密稱取二甘醇150 mg，置50 mL量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得內(nèi)標(biāo)液。

2.1.3對(duì)照品溶液制備精密量取甘油對(duì)照品儲(chǔ)備液2 mL，置10 mL量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)液1 mL，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度、搖勻，得每1 mL含甘油4.042 mg的對(duì)照品溶液。

2.1.4供試品溶液的制備精密量取供試品5 mL，置10 mL量瓶中，再精密加內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.1.5陰性對(duì)照溶液制備 按“參芎葡萄糖注射液”處方配制缺甘油的陰性樣品，照2.1.4項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.2色譜條件

色譜柱 AT-624毛細(xì)管柱(30 m ×0.53 mm，3 μm)，載氣為氮?dú)猓魉? mL/min；柱溫140 ℃，保持13.5 min，再以120 ℃/min升至255 ℃，保持5 min；分流進(jìn)樣，分流比10∶1；進(jìn)樣口溫度250 ℃；氫火焰離子化檢測(cè)器，溫度300 ℃；進(jìn)樣體積1 μL。

2.3專屬性試驗(yàn)

分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液及不加二甘醇(內(nèi)標(biāo)物)的供試品溶液，照2.2項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果顯示在供試品溶液色譜中，與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性對(duì)照溶液色譜無(wú)此峰，供試品溶液和陰性對(duì)照液在與內(nèi)標(biāo)物相同保留時(shí)間處也無(wú)干擾峰，表明方法專屬性良好，見(jiàn)圖1。

注：1.二甘醇(內(nèi)標(biāo)物)，2.甘油，A.對(duì)照品溶液，B.供試品溶液，C.陰性對(duì)照溶液，D.不加二甘醇(內(nèi)標(biāo)物)的供試品溶液圖1　甘油含量測(cè)定氣相色譜圖Fig.1　Gas chromatograms of the determination of glycerol contents

2.4線性試驗(yàn)

精密量取甘油對(duì)照品儲(chǔ)備液 0.5、1、2、4、8 mL，分別置于5個(gè)10 mL量瓶中；分別精密加入內(nèi)標(biāo)液1 mL，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，得每1 mL含甘油1.010、2.021、4.042、8.083及16.17 mg 的系列工作溶液。分別量取前述工作液1 μL，按照2.2項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。以甘油色譜峰峰面積與內(nèi)標(biāo)物(二甘醇)的峰面積比值(Y)為縱坐標(biāo)，以甘油濃度(X)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程為Y=0.247 1X+0.019 8，r=0.999 9，表明在1.01～16 .2 g/L的甘油濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5精密度試驗(yàn)

取參芎葡萄糖注射液，照2.1.4項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.2項(xiàng)下色譜條件連續(xù)測(cè)定6次。計(jì)算甘油峰面積與內(nèi)標(biāo)二甘醇峰面積的比值，測(cè)得峰面積比值平均值的RSD為0.90%，表明本方法的精密度良好。

2.6重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)參芎葡萄糖注射液，分別精密量取3、5、7 mL，照2.1.4項(xiàng)下供試品溶液的制備方法，每個(gè)濃度分別制備3份供試品溶液，共9份，照2.2項(xiàng)下色譜條件測(cè)定并計(jì)算甘油含量，結(jié)果供試品中甘油平均含量為11.68 g/L，RSD為2.4%，表明方法重復(fù)性良好。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

取參芎葡萄糖注射液，按2.1.4項(xiàng)下制備供試品溶液，并按2.2項(xiàng)下儀器條件測(cè)定并計(jì)算含量。分別于室溫放置0、1、2、4、8、12及24 h，分別進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果顯示甘油與內(nèi)標(biāo)二甘醇峰峰面積比值平均值RSD為1.8%，表明供試品溶液中甘油在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8回收率試驗(yàn)

精密量取已知甘油含量的參芎葡萄糖注射液2.5 mL，按所取供試品中甘油含量的50%、100%和150%加入甘油對(duì)照品，每個(gè)濃度制備3份，照2.1.4項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備樣品9份，并按2.2項(xiàng)下色譜條件測(cè)定并計(jì)算含量，結(jié)果為甘油的平均回收率為101.0%，RSD為2.3%，表明該方法準(zhǔn)確度較好，表1。

表1　甘油回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9樣品測(cè)定

取參芎葡萄糖注射液供試品，按2.1.4項(xiàng)下的制備方法制備供試品溶液各2份，按2.2項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。按內(nèi)標(biāo)法以峰面積比值計(jì)算甘油含量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　參芎葡萄糖注射液樣品甘油測(cè)定結(jié)果(n=2)

3討論

根據(jù)參芎葡萄糖注射液制備工藝，制得參芎葡萄糖注射液1 000 mL，甘油處方量為10 mL，樣品含甘油應(yīng)為12.6 g/L，從測(cè)定結(jié)果可見(jiàn)，其含量在11.68～13.70 g/L，即在處方量的90%～110%，說(shuō)明本研究的生產(chǎn)工藝穩(wěn)定。由于甘油的沸點(diǎn)高，采用恒溫分離供試品甘油時(shí)，色譜峰較寬，柱效差，內(nèi)標(biāo)物與干擾成分不能分離，本研究在制備方法的基礎(chǔ)上[8～10]，采用程序升溫，使甘油的色譜峰形正常，柱效提高，獲得較好的分離效果。

本文優(yōu)化了載氣流速、色譜柱溫度、進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度、分流比等實(shí)驗(yàn)參數(shù)。成功建立了氣相色譜法測(cè)定參芎葡萄糖注射液中甘油的測(cè)定方法。甘油濃度在1～10 g/L內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為102.5%，RSD為2.0%；精密度試驗(yàn)RSD為0.9%，重復(fù)性試驗(yàn)RSD為2.4%，穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD為4.2%。本文建立的參芎葡萄糖注射液中甘油的含量測(cè)定方法，操作簡(jiǎn)便、結(jié)果穩(wěn)定、準(zhǔn)確可靠好，可應(yīng)用于參芎葡萄糖注射液質(zhì)量控制體系。為全面保證參芎葡萄糖注射液的質(zhì)量奠定基礎(chǔ)。

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(2016-03-03收稿，2016-05-26修回)

中文編輯： 劉平； 英文編輯： 周凌

Determination of Glycerol in Shenxiong Glucose Injection with Gas Chromatography

FENG Guangwei1, FU Sihong2, SUN Xu2, ZHU Di2, ZHENG Lin2, LI Yongjun2, WANG Aimin2

(1.SchoolofBasicMedicine,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China; 2.EngineeringResearchCenterofMinistryofEducationforDevelopmentandApplicationofEthnicMedicineandTraditionalChineseMedicine,SchoolofPharmacy,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To establish the method for determination of glycerol content in Shenxiong glucose injection. Methods: The concentration of glycerol in Shenxiong glucose injection was determined by gas chromatography using AT-624 capillary column. Temperature program for the column was set up as follow: initialize at 140 ℃ for 13.5 minutes, then rise to 255 ℃ by rate of 120 ℃ per minute and keep at 255 ℃ for 5 minutes.Shunt sample with the split ratio of 5.0, injection temperature at 250 ℃, sample volume 1 μL, FID detector temperature was 300 ℃, flow rate 6.0 mL/min, and high purity nitrogen as carrier gas. Results: The reliable and accurate method for determination of glycerol in Shenxiong glucose injection by gas chromatography was established, which show a good linear relationship in the concentration range of 1 g/L～10 g/L. The average recovery rate was 102.5% with RSD of 2.0%.Precision test RSD was 0.9%, duplicate test RSD was 2.4%, and stability tests RSD was 4.2%. Conclusion: A facile, accurate and reliable method was established for determination of glycerol, which can be used as quality control method on Shenxiong glucose injection.

[Key words]Glycerol; glucose; Shenxiong; chromatography, gas

*[基金項(xiàng)目]貴州省中藥現(xiàn)代化科技產(chǎn)業(yè)研究開(kāi)發(fā)專項(xiàng)項(xiàng)目[黔科合重G字(2013) 4001]； 貴州省教育廳項(xiàng)目黔教合協(xié)同創(chuàng)新字(2013) 04、黔教社發(fā)[(2013) 419號(hào)]

[中圖分類(lèi)號(hào)]R286

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1000-2707(2016)06-0664-03

DOI:10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.06.010

**通信作者 E-mail:gywam100@163.com

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-06-16網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160616.1639.016.html