程序性細胞死亡因子5與AT豐富結構域1A在結直腸癌中的表達*

何勝悅, 何　常*

(貴州醫科大學附院 病理科， 貴州 貴陽　550004)

程序性細胞死亡因子5與AT豐富結構域1A在結直腸癌中的表達*

何勝悅**, 何常***

(貴州醫科大學附院 病理科， 貴州 貴陽550004)

[摘要]目的： 研究程序性細胞死亡因子5(PDCD5)與AT豐富結構域1A(ARID1A)在結直腸癌(CRC)中的表達。方法： 應用免疫組織化學法檢測結直腸癌(55例)、結直腸腺瘤(18例)和結直腸黏膜慢性炎癥(18例)組織中PDCD5與ARID 1A的表達，同時，分析PDCD5及ARID1A蛋白的表達與CRC患者淋巴結轉移、生存期及TNM分期的關系，采用spearman′s方法分析結直腸癌組織中PDCD5及ARID1A蛋白表達的相關性；隨訪CRC患者1～60個月，分析PDCD5及ARIDIA 蛋白表達陽性或陰性CRC患者的生存曲線圖。結果： 在結直腸癌、結直腸腺瘤、結直腸黏膜慢性炎癥組織中，PDCD5的陽性表達率分別為45.5%(25/55)、83.3%(15/18)和94.4%(17/18)，差異有統計學意義(P<0.05)；ARID1A陽性表達率分別為52.5%(29/55)、80%(14/18)和100%(18/18)， 差異有統計學意義(P<0.05)；CRC患者組織中PDCD5與ARID 1A 呈正相關(r=0.279，P=0.039)； ARID 1A的表達與TNM分期、淋巴結轉移及5年生存期有關(P<0.05)；結直腸癌中PDCD5、ARID1A陽性表達病例的生存狀況較陰性病例好。結論： PDCD5、ARID1A的表達對結直腸癌的發生發展有一定的影響。

[關鍵詞]結直腸腫瘤； 程序性細胞死亡因子5； 免疫組織化學； AT豐富結構域1A

結直腸癌(colorectal cancer CRC)是一種常見的消化道惡性腫瘤，全世界每年約60萬人死于結直腸癌[1]，結直腸癌的形成與進展和細胞凋亡密切相關。程序性細胞死亡因子5(progra-mmed cell death fator 5,PDCD5)作為凋亡相關調控因子，影響著細胞周期及凋亡[3-5]；而作為抑癌基因的AT豐富結構域1A(AT rich interactive domain 1A,ARID1A)，亦影響了細胞周期，促進了細胞凋亡[6-8]，本研究采用免疫組織化學方法檢測PDCD5及ARID1A在結直腸癌中的表達，并探討其意義。

1材料與方法

1.1臨床資料

選取2004年1月～2006年11月行CRC手術，術前未進行化(放)療的同一組織學類型(管狀腺癌Ⅱ級)病例55例， 30～80 歲，平均55 歲；男 26 例，女 29 例。選取18例CRC患者遠癌處結直腸黏膜慢性炎癥組織作為黏膜慢性炎癥標本，25歲～51歲，平均39歲；男12例，女6例。結直腸腺瘤病例18例，23歲～45歲，平均34歲；男10例，女8例。所取CRC、結直腸腺瘤及黏膜慢性炎癥標本均經10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，切片厚4 μm。PDCD5 兔抗人多克隆抗體購自北京博奧森，ARID1A 兔抗人多克隆抗體購自武漢博士德，DAB 顯色試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。顯微鏡使用 OLYMPUS BX53 型。

1.2方法

采用免疫組織化學法，嚴格按說明書進行操作，檢測了3組標本中PDCD5及ARID1A蛋白表達，PBS 代替一抗作陰性對照。PDCD5以細胞質有棕黃色顯色為陽性，ARID1A以細胞核呈清晰棕黃色顆粒為陽性。觀察100倍顯微鏡下綜合染色強度和陽性細胞所占比例進行半定量測定[2]。記錄PDCD5及ARID1A蛋白的表達陽性率。

1.3觀察指標

分析CRC患者PDCD5及ARID1A蛋白表達的相關性；同時分析PDCD5及ARID1A蛋白表達與CRC患者年齡、性別、淋巴轉移、生存期及TNM分期的關系；對55例CRC患者隨訪1～60個月，比較PDCD5蛋白及ARID1A蛋白的陽性表達或陰性表達CRC患者的生存曲線圖。

1.4統計學分析

數據采用軟件 SPSS 19.0 處理，計數資料用率(%)表示，數據采用χ2檢驗；使用Spearman等級相關法分析結腸癌組織中PDCD5、ARIDIA蛋白表達的相關性，PDCD5、ARIDIA蛋白的表達分別與患者預后的關系均采用Kaplan-Meier法(Log-Rank檢驗) 進行生存分析，檢驗水準取α= 0.05，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1PDCD5和ARID1A蛋白陽性表達率

PDCD5 及ARID1A蛋白在CRC、結直腸腺瘤、結直腸黏膜慢性炎癥組織中均有表達，兩兩比較，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1　PDCD5 及ARID1A蛋白在3組結直腸組織中的表達(n ,%)

(1)與CRC比較，P<0.05；(2)與結直腸腺瘤比較，P<0.05

2.2PDCD5與ARID1A相關性

spearman′s相關分析顯示，在結直腸癌組織中PDCD5與ARID1A的表達呈正相關(r=0.279，P<0.05)。

2.3PDCD5及ARID1A蛋白表達與CRC患者淋巴結轉移、生存期及TNM分期的關系

ARID1A在CRC組織中的表達與患者的年齡、性別無關(P>0.05)，與TNM分期、淋巴結轉移及5年生存期有關(P<0.05)；PDCD5與患者的年齡、性別、淋巴結轉移、TNM分期及5年生存期均無關(P>0.05)。見表2。

表2　PDCD5及ARID1A蛋白的表達與CRC患者淋巴結轉移、生存期及TNM分期的關系(n ,%)

(1)與同一指標其他分組比較，P<0.05

2.4PDCD5及ARID1A蛋白表達與CRC患者生存狀況的關系

分析PDCD5及ARID1A蛋白表達陽性組和陰性組生存曲線，發現PDCD5及ARID1A蛋白陽性表達病例的生存狀況較陰性組好(P<0.05)。見圖1。

注：A為PDCD5,B為ARID1A圖1　PDCD5及ARID1A蛋白陽性或陰性表達的結直腸癌患者的生存曲線Fig.1　Survival curve of colorectal cancer patients with ARID1A and PDCD5 protein positive or negative expression

3討論

大腸腺瘤為大腸癌的主要癌前病變， 80%以上的大腸癌是由于腺瘤的癌變。就結直腸癌而言，目前治療方法仍以手術為主，但總體治療效果并不能令人滿意，而腺瘤的治療方法相對簡單，效果明顯，且治愈率高，腸鏡下摘除腺瘤便可降低大腸癌發病率。因此研究大腸癌的早期診斷和治療就顯得尤為重要。

PDCD5在腫瘤的進程中起了強大的抗腫瘤作用，可能是其與組蛋白乙酰轉移酶Tip60 作用，導致了 DNA 損害并促進細胞凋亡，但具體機制尚未明確[3]。也有資料顯示，Tracy 等[4]認為其可能通過抑制β- 微管蛋白折疊而促進了凋亡的發生。PDCD5的表達異常與腫瘤的發生發展有著密切的關系，在正常細胞的表達明顯高于腫瘤細胞的表達[5]。這也與本實驗結果一致。本研究顯示，結直腸癌組織中的陽性表達要明顯低于腺瘤組與慢性炎癥組，并且在結直腸癌中PDCD5陽性表達的患者較陰性患者生存狀況好。相關資料表明，PDCD5在細胞凋亡過程的早期出現高表達并能快速發生核轉位，從而有效的促進細胞凋亡并抑制細胞生長。因此，PDCD5的表達對結直腸癌的早期診斷及預后具有一定的指導意義。

ARID1A位于染色體1p36.11。ARID1A在早期胚層的分化和發育過程中發揮重要作用， ARID1A能通過調節靶基因 BCL-2和cyclin D1誘導細胞凋亡的發生[6-7]。Guan等[8]研究發現誘導突變 ARID1A 的正常表達能夠明顯抑制細胞增殖，減少S期細胞數。這些證實了該基因與細胞增殖密切相關，并不同程度影響了細胞凋亡。Wang等[9]通過觀察分析胃癌組織切片，發現 ARID1A表達低的預后較差。在膀胱移形細胞癌病人生存分析中發現，ARID1A低表達與癌癥復發、惡性腫瘤進展顯著相關[10]。Lichner等[11]通過相關實驗發現腎透明細胞癌中ARID1A表達高的病人生存時間也要長于表達低的，與本研究結果一致。實驗的生存分析也顯示，ARID1A在結直腸癌中陽性表達的患者較陰性患者的預后好，這也提示ARID1A是一個較好的生存指標。ARID1A 作為一個潛在的腫瘤抑制基因，在致瘤性轉化過程中起著重要作用。隨著研究的深入，將更有利于了解腫瘤的形成，開拓新的腫瘤治療途徑，以更好更完善的方法診斷及治療腫瘤性疾病。同時相關性研究結果顯示， PDCD5、ARID1A的陽性表達在結直腸癌中呈正相關。綜上，PDCD5、ARID1A的表達對結直腸癌的發生發展存在有一定的影響。

4參考文獻

[1] Garcia-Albeniz X, Chan AT. Aspirin for the prevention of colorectal cancer[J]. Best Pract Res Clin Gastroenterol, 2011(4-5) :461-472.

[2] 潘玲，何常．髓樣細胞白血病1及染色質重塑A蛋白在卵巢上皮癌組織中的表達[J]．貴陽醫學院學報， 2016(2):221-223．

[3] Gao F, Ding L, Zhao M, et al. The clinical significance of reduced programmed cell death 5 expression in humangastrointestinal stromal tumors[J].Oncol Rep, 2012(6):2195-2199.

[4] Tracy CM, Gray AJ, Jorge C, et al. Programmed cell death protein 5 interacts with the cytosolic chaperonin containing tailless complex polypeptide 1 (CCT) to regulate β-tubulin folding[J]. J Bio Chem, 2013(7):4490-4502.

[5] 郭妮娜，劉競．PDCD5基因促進細胞凋亡機制的研究進展[J].陰山學刊， 2012(1):45-47.

[6] Samartzis EP,Noske A,Dedes KJ,et al. ARID1A muta-tions and PI3K/AKT pathway alterations in endometriosis and endometriosis-associated ovarian carcinomas[J].Int JMol Sci, 2013(9): 18824-18849.

[7] Zhang Y,Xu X,Zhang M,et al.ARID1A is downregu-lated in non-small cell lung cancer and regulates cell pro-liferation and apoptosis[J].Tumour Biol, 2014(6):5701-5707.

[8] Guan B,Wang TL,Shih I. ARID1A,a factor that promotes formation of SWI/SNF-mediated chromatin remodeling，is a tumor suppressor ingynecologic cancers[J]. Cancer Res, 2011(21): 6718-6727.

[9] Wang K, Kan J, Yuen ST, et al. Exome sequencing identifies frequent mutation of ARID1A in molecular subtypes of gastric cancer[J]. Nat Genet, 2011(12): 1219-1223.

[10]Balbas-Martinez C, Rodriguez-Pinilla M, Casanova A, et al. ARID1A alterations are associated with FGFR3-wild type, poor-prognosis, urothelial bladder tumors[J]. PLoS One, 2013(5): e62483.

[11]Lichner Z, Scorilas A, White NM, et al. The chromatin remodeling gene ARID1A is a new prognostic marker in clear cell renal cell carcinoma[J]. Am J Pathol, 2013(4): 1163-1170.

(2016-03-28收稿，2016-05-25修回)

中文編輯： 文箐潁； 英文編輯： 周凌

The Significance of PDCD5 and ARID 1A Expression in Colorectal Carcinoma

HE Shengyue, HE Chang

(DepartmentofPathology,AffiliatedHospitalofGuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To study the clinical significance of programmed cell death factor (PDCD5) and AT rich interactive domain 1A (ARID 1A) expression in colorectal carcinoma (CRC). Methods: PDCD5 and ARID 1A expression in 55 cases of CRC, 18 cases of colorectal adenoma, 18 cases colorectal inflammation were determined by immunohistochemistry. At the same time, the correlation of PDCD5 and ARID1A expression in CRC patients with lymph node metastasis , survival period and TNM staging was studied, and the correlation between PDCD5 and ARID1A protein expression in colorectal cancer tissues was analyzed by spearman's method ; CRC patients were followed up for 1 to 60 months to study survival curve of CRC patients with ARID1A and PDCD5 protein positive or negative expression.Results: In CRC, colorectal adenoma and colorectal inflammation , the positive expression rate of PDCD5 was 45.5%(25/55), 83.3%(15/18), 94.4%(17/18)respectively with significant differences among them (P<0.05); the ARID 1A positive expression rate was 52.5%(29/55), 80%(14/18), 100%(18/18) respectively with significant differences among them (P<0.05); ARID 1A was positively correlated with PDCD5(r=0.279，P=0.039)in CRC patients; ARID 1A expression in colorectal cancer tissues was associated with TNM staging, lymph node metastasis and 5 years survival (P<0.05); living condition of the ARID1A and PDCD5 positive expression CRC cases were better than the negative cases. Conclusion: ARID1A and PDCD5 expression has a certain effect on the occurrence and development of colorectal cancer.

[Key words]colorectal neoplasm; programmed cell death factor 5; immunohistochemistry; AT rich interactive domain1A

*[基金項目]貴州省科技廳基金(E2010-4)

[中圖分類號]R735.3

[文獻標識碼]A

[文章編號]1000-2707(2016)06-0696-04

DOI:10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.06.017

**貴州醫科大學病理科2013級碩士研究生

***通信作者 E-mail:2077166911@qq.com

網絡出版時間：2016-06-16網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160616.1657.026.html