QuEChERS—GC—ECD快速測定葡萄和土壤中苯醚甲環(huán)唑殘留

羅雪婷　吳迪　潘洪吉　張希躍　矯健

摘要[目的]對苯醚甲環(huán)唑在葡萄和土壤中的殘留分析方法進行探討并測定其殘留消解動態(tài)。[方法]采用乙腈提取、基質固相分散凈化后，GCμECD外標法定量。[結果]在葡萄和土壤樣品中添加0.01～2.00 mg/L苯醚甲環(huán)唑，葡萄的平均回收率為88.5%～107.3%，相對標準偏差為4.2%～6.8%；土壤的平均回收率為85.9%～115.9%，相對標準偏差為1.7%～7.3%；苯醚甲環(huán)唑在葡萄中的消解動態(tài)方程為y=1.165e-0.11x，在土壤中的消解動態(tài)方程為y=0.172e-0.04x，其在葡萄中半衰期為6.3 d，在土壤中半衰期為17.3 d。[結論]該方法靈敏度、準確度、精密度高，前處理簡單，儀器耗材普遍易得，能夠為大規(guī)模監(jiān)測苯醚甲環(huán)唑的殘留情況提供參考。

關鍵詞 苯醚甲環(huán)唑；殘留；葡萄；土壤；消解動態(tài)

中圖分類號 S481+.8 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2016）05-083-03

Abstract[Objective]To discuss the residue analysis methods of difenoconazole in grapes and soils， and to detect the residue degradation dynamics.[Method]Detection was carried out by acetonitrile method， quantitative external standard method， and matrix solidphase dispersion after purification.[Result]When adding 0.01-2.00 mg/L difenoconazole in blank grape and soil sample， the average recovery rate of grape was 88.5%-107% with 4.2%-6.8% relative standard deviation； the average recovery rate of soil was 85.9%-115.9% with 1.7%-7.3% relative standard deviation. Digestion dynamic equation of difenoconazole in grape was y=1.165 e-0.11x， that in soil was y=0.172 e-0.04 x. The halflife periods in grape and soil were 6.3 and 17.3 d， respectively.[Conclusion]This method has high sensitivity， accuracy and precision with simple pretreatment and widely available instruments， which provides references for the largescale monitoring of difenoconazole residue.

Key words Difenoconazole； Residue； Grape； Soil； Degradation dynamics

苯醚甲環(huán)唑（Difenoconazole）又名惡醚唑，通用名“世高”，是一種三唑類廣譜殺菌劑，能夠有效防治黑星病、黑痘病、白腐病、斑點落葉病、白粉病、褐斑病、銹病、條銹病、赤霉病等，廣泛應用于果樹、蔬菜等作物，在國內登記使用在番茄、芹菜、荔枝、葡萄樹、蘋果樹、洋蔥、大蒜、石榴、柑橘樹、大白菜、茶樹、蘆筍、西瓜、菜豆、黃瓜、辣椒、葡萄、水稻、小麥、大豆、玉米、花生、煙草、薔薇科觀賞花卉等多種作物上。

2014年CAC規(guī)定葡萄中苯醚甲環(huán)唑的MRL值為3 mg/kg[1]。我國已制定了柑橘、蘋果等16種水果上的苯醚甲環(huán)唑最大殘留限量值[2]（MRL值），但對于苯醚甲環(huán)唑在葡萄上的MRL值尚未制定。開展葡萄中苯醚甲環(huán)唑殘留的探討，不僅可應用于田間用藥指導、農產品質量安全監(jiān)測，還將為殘留限量的制定累積數(shù)據(jù)。

目前，國內苯醚甲環(huán)唑的農藥殘留檢測方法主要分為兩大類：一類為前處理方法相對較繁瑣，其使用儀器為氣相色譜儀、液相色譜儀[3-7]；第二類所使用儀器為液相色譜-質譜聯(lián)用儀、氣相色譜-質譜聯(lián)用儀[8-11]，對實驗室設備配置和人員技術水平要求較高。另外國外也有苯醚甲環(huán)唑殘留檢測方面的報道，相對處理方法也較繁瑣[11-14]。筆者采用改良的QuEChERS[15]方法進行樣品前處理，氣相色譜-電子捕獲檢測器進行分析，以期為大規(guī)模監(jiān)測苯醚甲環(huán)唑的殘留情況提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料 供試材料為葡萄（巨峰）。

1.2 試劑、儀器與耗材 30%苯醚甲環(huán)唑懸浮劑（上海惠光化學有限公司）；苯醚甲環(huán)唑標準品（99%，美國Chemservice公司），甲苯（色譜純，迪馬公司），PSA （乙二胺基N丙基，迪馬公司）。

氣相色譜儀：安捷倫6890μECD ， 旋渦混合器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司），超聲波清洗機（北京市天海雙龍醫(yī)療設備有限責任公司），離心機（長沙英泰儀器有限公司），0.22 μm有機系濾膜（北化黎明）。

1.3 方法

1.3.1 樣品前處理——改進的QuEChERS方法。①葡萄。稱取5.0 g葡萄樣品，加5 mL甲苯，渦旋2 min，于超聲波發(fā)生器中超聲30 min。以5 000 r/min離心5 min。取3 mL上清液于10 mL 離心管中， 加入200 mg PSA， 渦旋2 min，以8 000 r/min離心5 min后取上清液過0. 22 μm 濾膜。待氣相色譜進行檢測。②土壤處理同葡萄樣品處理。

1.3.2 儀器條件。

色譜柱：HP5 30.00 m×0.25 mm×0.25 μm；進樣口溫度：230 ℃；柱溫：初始柱溫150 ℃，保持3 min，以20 ℃/min的速率升溫至240 ℃，保持2 min，再以5 ℃/min的速率升溫至260 ℃，保持10 min，然后，以25 ℃/min的速率升溫至280 ℃，保持4 min；檢測器溫度：300 ℃；柱流量：1.5 mL/ min；進樣量：1 μL；保留時間：22.494 min。

1.3.3 標準曲線。

準確稱取99%苯醚甲環(huán)唑標準品10.10 mg，用甲苯溶解至10 mL，得到1 000 mg/L的甲苯母液。逐級稀釋，用0.005、0.010、0.020、0.050、0.100、0.200、0.500、1.000、2.000、5.000 mg/L苯醚甲環(huán)唑標準溶液進樣繪制標準曲線。

1.4 消解動態(tài)試驗

1.4.1 30%苯醚甲環(huán)唑懸浮劑在葡萄中的消解動態(tài)。

選取葡萄園內有代表性的地塊，設3個重復試驗小區(qū)，每小區(qū)面積20 m2， 施藥時期為葡萄生長至成熟個體50%大小時施藥，施藥時應保證用于動態(tài)試驗的葡萄均勻著藥。施藥劑量為制劑量450 mg/kg （667倍液）處理，施藥后2 h、1、3、5、7、14、21、30、45 d取樣。

隨機在試驗小區(qū)內6～12個采樣點采集6～8串（不少于1 kg）生長正常、無病害、半成熟或成熟的果實，采集部位遍及上中下部，去梗，混勻后縮分，留250 g樣品2份，分別裝入封口樣品容器中，于-20 ℃冰箱保存?zhèn)錅y定。小區(qū)邊行和每行距離兩端0.5 m內不采樣。

1.4.2 30%苯醚甲環(huán)唑懸浮劑在土壤中的消解動態(tài)。

選取果園無植被土地20 m2，單獨施藥，施藥濃度為高劑量制劑量450 mg/kg （667倍液），施藥后2 h、1、3、5、7、14、21、30、45 d取樣。隨機取點5～10個，用土鉆采集0～10 cm土層的土壤1～2 kg，除去土壤中的碎石、雜草和植物根莖等雜物，混勻后采用四分法留樣300 g，裝入封口樣品容器中，粘好標簽，貯存于-20 ℃冰箱中保存。

2 結果與分析

2.1 標準曲線 以y軸為苯醚甲環(huán)唑峰面積，x軸為標準溶液濃度繪制標準曲線，苯醚甲環(huán)唑在0.005～5.000 mg/L的標準曲線為y=7 876x+406.4，相關系數(shù)r=0.999；表明在試驗條件下儀器響應信號與進樣量呈良好的線性關系。

2.2 靈敏度、準確度和精確度

該方法對苯醚甲環(huán)唑的最低檢出量為5.0×10-12g，在葡萄和土壤中的最低檢出濃度為0.010 mg/kg。分別在葡萄和土壤樣品中添加0.01～2.00 mg/L苯醚甲環(huán)唑，葡萄的平均回收率為88.5%～107.3%，相對標準偏差為4.2%～6.8%（表1），土壤的平均回收率為85.9%～115.9%，相對標準偏差為1.7%～7.3%（表2），添加回收率和相對標準偏差均符合農殘試驗要求。

2.3 方法凈化效果 通過該方法處理的葡萄、土壤空白樣品和添加樣品，在分析過程中排除了雜質干擾，說明該方法具有良好的凈化效果（圖2）。

2.4 殘留消解動態(tài)

從表3和4可以看出，苯醚甲環(huán)唑消解動態(tài)趨勢符合一級動力學模式，苯醚甲環(huán)唑在葡萄中的消解動態(tài)方程為y=1.65e-0.11x，在土壤中的消解動態(tài)方程為y=0.172e-0.04x；葡萄中苯醚甲環(huán)唑半衰期為6.3 d，土壤中苯醚甲環(huán)唑半衰期為17.3 d。從圖2和3可以看出，苯醚甲環(huán)唑在葡萄中的消解前期相對較快。在確保苯醚甲環(huán)唑得到安全使用的前提下，參照其他國家已有的MRL值和安全間隔期，建議30%苯醚甲環(huán)唑懸浮劑防治葡萄白腐病，制劑用量48～75 mg/kg（4 000～6 000倍液），噴霧施藥3～4次，施藥間隔10～15 d，推薦的安全間隔期為7 d，推薦MRL值為0.5 mg/kg。

3 結論與討論

該試驗以傳統(tǒng)的QuEChERS前處理法為基礎，用甲苯替代乙腈作為提取液，一方面，甲苯極微溶于水，提取液中的含水量很少，易于除水；另一方面，甲苯極性較弱，相對提取的色素、糖類較少，彌補了傳統(tǒng)QuEChERS方法除雜不徹底的缺陷；第三方面，該試驗采用渦旋和超聲的提取方法，減少了人員誤差的同時，使前處理可以批量進行，節(jié)約了人力資源，提高了檢測效率；第四方面，使用試劑量少，節(jié)約成本，減少了環(huán)境污染；第五方面，該方法采用的儀器、材料方便易得，適用于在各級檢測單位推廣使用；第六方面，該方法在葡萄和土壤中的最低檢出濃度為0.010 mg/kg。在0.005～5.000 mg/L范圍內，峰面積與標準溶液濃度呈良好的線性關系。表明該方法檢測靈敏度、精確度較高，滿足生產實際中的檢測要求。

另外，目前我國尚未制定苯醚甲環(huán)唑在葡萄中的最大殘留限量值，CAC（食品法典委員會）2014年規(guī)定葡萄中苯醚甲環(huán)唑最大殘留限量值（MRL值）為3 mg/kg，日本規(guī)定在葡萄中MRL值為0.5 mg/kg，歐盟規(guī)定在葡萄中MRL值為0.5 mg/kg。通過對其殘留消解動態(tài)的研究，結合已經制定最大殘留限量值的國家和地區(qū)，建議苯醚甲環(huán)唑在葡萄上的MRL值為0.5 mg/kg。

參考文獻

[1]食黃食品農藥殘留在線數(shù)據(jù)庫[DB/OL][2015-12-20].http：//www.fao.org/fao-who-codexalimentarius/standards/pestres/commodities-detail/zh/？lang=zh & c_id=113.

[2]國家衛(wèi)生和計劃生育委員會，農業(yè)部.食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量：GB 2763-2014[S].北京：中國標準出版社，2014.

[3]王華棟，陳錦輝.SPE-GC/ECD測定西瓜中的苯醚甲環(huán)唑殘留[J].安徽農業(yè)科學，2009，37（28）： 13448-13449.

[4]張雪燕，吳文銳，毛佳第，等.氣相色譜法測定三七中苯醚甲環(huán)唑殘留量[J].湖南農業(yè)大學學報（自然科學版） ，2010，36（2）：229-232.

[5]王軍，溫家鈞，邊俠玲，等.柑橘和土壤中苯醚甲環(huán)唑殘留動態(tài)研究及安全性評價[J]. 西南農業(yè)學報，2009，22（3）：644-647.

[6]張學強，陳 歆， 韓丙軍. 氣相色譜法測定香蕉和土壤中苯醚甲環(huán)唑殘留[J]. 熱帶農業(yè)科學，2011，31（7）：60-62.

[7]吳曼 ，陳九星 ，付啟明 等. 氣相色譜法測定蘆筍及其土壤中的苯醚甲環(huán)唑殘留量[ J]. 精細化工中間體，2009，39（6）：71-75.

[8]錢宗耀，周曉龍，劉河疆等.氣質聯(lián)用法測定紅棗中苯醚甲環(huán)唑殘留量[J]. 現(xiàn) 代 農 藥，2012，2（3）：37-39.

[9]王雯， 梁穎， 錢建亞， 等. 液相色譜-質譜聯(lián)用檢測番茄中苯醚甲環(huán)唑殘留[ J]. 江蘇農業(yè)學報， 20 11 ， 27 （ 3 ） ： 668-671 .

[10]薛曉航，戴守輝，張璐珊等. QuEChERS / GC - MS 快速分析土壤中的苯醚甲環(huán)唑殘留[J].農藥學學報，2 010 ， 12 （ 3 ） ： 309-312

[11] LEHOTAY S，DE KOK A，HIEMSTRA M，et al. Validation of a fast and easy method for the deter mination of residues from 229 pesticides in fruit sand vegetables using gas and liquid chromatography and mass spectrometric detection[J].AOAC international，2005，88（2）：595-614.

[12]RUEEGG J，SIEGFIRIED W. Residues of difenoconazole and penconazole on apple leaves and grass and soil in an apple orchard in north-eastern Switzerland[J]. Crop Prot， 1996， 15（1）： 27–31

[13]THOM OTTOW J C G，BENCKISER G，et al. Degradation of the fungicide difenoconazole in a silt loam soil as affected by pretreatment and organic amendment[J]. Environmental Pollution， 1997， 96 （3）： 409–414.

[14]KUBIK M，NOWACKI J，PIDEK A，et al. Residues of captan （contact） and difenoconazole （systemic） fungicides in bee products from an apple orchard[J]. Apidologie， 2000， 31 （4）： 53.

[15]QuEChERS in Brief[EB/OL].[2015-12-01].http：//www.quechers.com.