金銀花枝葉提取物口腔崩解片的制備及質量評價

沈健　肖敏

摘要[目的]制備金銀花枝葉提取物口腔崩解片并對其品質進行評價和考察。[方法]采用單因素法初步篩選工藝參數，在此基礎上，采用響應面優化法確定最佳工藝參數。[結果]最終優化的處方為金銀花提取物19.3%、交聯聚乙烯吡咯烷酮（PVPP）9.6%、微晶纖維素（MCC）26.6%、低取代羥丙基纖維素5.0%、桔子香精∶甘露醇∶阿司帕坦=1∶4∶1，制得的口腔崩解片在30 s內崩解完全，口感良好。[結論]該處方和工藝制得的金銀花枝葉提取物口腔崩解片質量上乘，達到設計要求。

關鍵詞 金銀花枝葉提取物；口腔崩解片；制備；質量評價

中圖分類號 S567.7+9 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2016）05-136-03

Abstract[Objective]The aim was to prepare honeysuckle branches and leaf extract oral disintegrating tablet and evaluate its quality.[Method]Single-factor method was adopted to screen out the process parameters， on the basis of this， response surface methodology was used to optimize the technique parameters.[Result]The optimized formulation was as follows： 19.3% honeysuckle extract， 9.6% cross-linked polyvinylpyrrolidone， 26.6% microcrystalline cellulose and 5.0% L-HPC. Orange flavor： mannitol： aspartame ratio was 1∶4∶1. The prepared tablets disintegrated totally within 30s and tasted good.[Conclusion]The honeysuckle extract orally disintegrating tablets obtained by this prescription and process have good qualities and meet the design requirements.

Key words Honeysuckle branches and leaf extracts； Orally disintegrating tablets； Preparation； Quality evaluation

植物提取物口腔崩解片（orally disintegrating tablets）是近年來研發的一種固體速釋制劑，已成為新藥和保健食品研發的一個熱點和趨勢[1]。這種制劑不需用水，片劑置于舌面，無需咀嚼，遇唾液迅速溶解或崩解，借吞咽動力，藥物即可入腸胃起到預期效果[2-4]。與普通片劑相比，口腔崩解片為患者人群和保健食品所需人群提供了一種新的藥物和保健食品服用方式，方便特殊人群如老人、吞咽困難者或特殊情況下患者服用，也為普通患者提供一種新的選擇方式。對于中草藥中的不穩定性活性成分可制成口腔崩解片，可以達到預想不到的效果[5-6]。

金銀花（Flos Lonicerae）為忍冬科（Caprifoliaceae）植物忍冬（Lonicerajaponica Thunb）、菰 （紅）腺忍冬（L. hypoglauca Miq.）或毛花柱忍冬（L. dasystyla Rehd.）的干燥花蕾或初開的花[7]，主要分布在歐洲、亞洲、北美洲和非洲北部溫帶至亞熱帶地區[8]。在我國分布極為廣泛，是傳統的清熱解毒中草藥，具有廣泛的食用歷史。傳統食用歷史、現代藥理試驗和臨床試驗均證明金銀花對于多種致病菌均有較強的抗菌作用[9]。綠原酸、異綠原酸、黃酮及多酚類物質等多種活性成分均具有抗病毒、抗炎、調節機體免疫力、降血糖血脂等多種生理功能[9-10]。金銀花的副產物枝葉產量較高，卻一直被視為非藥用部位而長期未得到利用。前期研究發現，金銀花枝葉提取物的綠原酸含量與花相同或略低于花[11-13]。該試驗研究了金銀花枝葉提取物口腔崩解片的制備工藝及其處方，并對產品的質量品質進行了評價，以期為合理開發利用這一廢棄資源提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 試料與儀器 UV260紫外分光光度計（日本島津）；CP224S電子天平（德國賽多利斯）。蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，純度>98%），金銀花枝葉提取物（自制）；阿司帕坦（廣州何濟公公司）；低取代羥丙基纖維素（LHPC，瀘洲醫藥輔料廠）；硬脂酸鎂（貴州省桐梓化工廠）；交聯聚乙烯吡咯烷酮（PVPP）、微粉硅膠（上海遠宏化工制劑輔料技術有限公司）；微晶纖維素（MCC，浙江湖州展望化學藥業有限公司）；所用試劑均為分析純，重蒸水（實驗室自制）。

1.2 方法

1.2.1 金銀花枝葉提取方法。20倍量80%乙醇回流提取得金銀花枝葉提取物總黃酮粗產物，以粗產物制備金銀花枝葉提取物總黃酮濃度為0.023 6 g/mL的上樣液，通過AB8大孔吸附樹脂柱進行分離純化，純化后金銀花枝葉提取物總黃酮純度55.27%。

1.2.2 總黃酮含量測定方法。

1.2.2.1 對照品溶液的制備。稱取蘆丁對照品0.01 g，用甲醇定容于50 mL量瓶中，制得蘆丁對照品溶液，即得蘆丁0.2 mg/mL的對照品溶液，低溫儲藏備用。

1.2.2.2 供試品溶液的制備。分別精密稱各試驗樣品約15.00 g，采用滲漉法提取，過濾，合并濾液，揮干溶劑并用甲醇定容至25 mL，即得供試品溶液。

1.2.2.3 線性關系的考察。量取對照品溶液2、4、6、8、10 mL，分別置入25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至10 mL，加亞硝酸鈉溶液（5%）1.0 mL，搖勻，靜置5 min，再加硝酸鋁溶液（10%）1 mL搖勻，靜置5 min，加氫氧化鈉溶液10 mL，再加甲醇定容至刻度，搖勻，靜置15 min。在504 nm波長處測定吸光度，以吸光度（y）為縱坐標、濃度（x）為橫坐標繪制標準曲線。

1.2.2.4 精密度試驗。精密量取100 μg/mL蘆丁對照品溶液2 mL，按“1.2.2.3”標準曲線繪制方法操作，在504 nm波長處連續6次測定吸光度值，計算RSD值，要求該值小于3%。

1.2.2.5 重復性試驗。取同一批樣品粉末15.00 g（共6份），計算總黃酮含量和RSD值，要求RSD<3%。

1.2.2.6 穩定性試驗。取測試樣品，分別在0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h于504 nm波長下用紫外可見分光光度計測定吸光度，并計算RSD值。

1.2.2.7 回收率試驗。取已知含量樣品粉末15 g（共6份），分別精密加入蘆丁對照品1.50 mg，按“1.2.2.2”供試品溶液制備方法制備樣品，在504 nm波長處測定吸光度值，由標準曲線讀出濃度，計算加樣回收率和RSD。

1.2.3 金銀花枝葉提取物口腔崩解片的制備。

原輔料經過預處理后，取金銀花枝葉提取物40 g、阿司帕坦1.5 g、桔子香精1.2 g、硬脂酸鎂1.5 g、甘露醇6.0 g、微粉硅膠2.5 g混勻，再與1 000片處方量的乳糖、微晶纖維素、交聯聚維酮按等量遞增法混勻后，粉末直接壓片，直徑約為6 mm。

1.2.4 崩解時間考察。

1.2.4.1 體外崩解時間考察。

取1片藥片、試管1支（直徑1～2 cm），加37 ℃純水2 mL，放入37 ℃水浴中，試管口復以20目篩（內徑600～710 μm篩網），1 min后反轉試管，應全部通過篩網。

1.2.4.2 體內崩解時間考察。

感官評價志愿者10名，試驗開始前20 min停止飲水和進食，每人每次口含片劑1片，至完全崩解，記錄崩解時間。

1.2.5 響應面優化口腔崩解片工藝試驗設計。采用綜合評分法對結果進行評分，以平均崩解時間y1和口感y2為評價指標，其中口感（y2）0～3分表示略苦、有澀味、有砂礫感，4～7分表示微苦、無澀味、無砂礫感，8～10分表示甜、無澀味、無砂礫感。將平均崩解時間指標權重定為2，口感指標權重定為1，綜合評分為Y=2y1+y2。

經過預試驗選擇甘露醇、阿司帕坦和桔子香精為矯味劑，且確定甘露醇∶阿司帕坦的配比為4∶1。設計4種配比，將金銀花枝葉提取物與桔子香精、甘露醇和阿司帕坦分別過80目篩，混勻，取適量粉末由健康志愿者評價口感。根據Box-Behnken design（BBD）試驗設計原理，進行4因素3水平的響應面分析試驗（表1）。通過Design-Expert 7.1.6軟件（STAT-EASE Inc.， minneapolis， USA）對數據進行回歸分析，最終結果通過多元回歸分析方法來擬合多元二次方程。

1.3 數據統計分析

采用SPSS 15數據處理軟件，各組數據結果均以±SD（n=6）表示，并進行方差分析，LSD法多重比較，P<0.05表示差異具有顯著性。

2 結果與分析

2.1 總黃酮含量測定結果

2.1.1 線性關系的考察。按“1.2.2.3”方法操作，以吸光度（y）為縱坐標、濃度（x）為橫坐標繪制標準曲線，計算得線性回歸方程為y=12.38x+0.019 4（r=0.999 4），表明對照品濃度在0.016～0.080 mg/mL范圍內與溶液的吸光度呈良好的線性關系。

2.1.2 精密度試驗。按“1.2.2.4”方法操作，計算得RSD=1.023%，表明在此試驗條件下精密度良好。

2.1.3 重復性試驗。按“1.2.2.5”方法操作，計算得RSD=0.938%，表明該方法重復性良好。

2.1.4 穩定性試驗。按“1.2.2.6”方法操作，計算得出RSD=1.724%，說明樣品在3 h內穩定。

2.1.5 回收率試驗。由標準曲線讀出濃度，計算總黃酮含量，平均加樣回收率為98.23%，RSD=1.861%。

2.2 矯味劑配比篩選與考察 由表2可見，處方③、④均有良好的口感，綜合考慮選擇處方③為宜，即確定芳香劑桔子香精∶矯味劑甘露醇∶甜味劑阿司帕坦的配比為1∶4∶1。

2.3 響應面優化口腔崩解片制備參數

對4因素3水平試驗設計結果（表3）進行統計分析，建立二次回歸方程：Y=108.40+9.82A+10.43B-17.59C-0.59D-13.80A2-7.94B2-10.57C2-7.22D2-1.72AB–2.46AC-13.93AD+1.64BC-5.36BD–3.90CD。對二次回歸方程進行方差分析，結果發現，綜合評分Y的A、B、C、A2、B2、C2、D2、AD均表現出顯著水平，二次回歸方程整體模型極顯著，且失擬項不顯著，該回歸模型與實測值能較好地擬合。進一步對該回歸模型進行顯著性檢驗發現，模型Y的決定系數R2為0.934 0，說明模型相關度很好；模型P<0.000 1，說明回歸模型極顯著。

2.4 響應面分析和優化參數的優化與驗證

軟件分析結果表明，回歸模型存在穩定編碼值點（0.9，0.8，–0.7，–1.0），穩定的特征值表明穩定點為最大值點（即尋找的最佳水平），即金銀花枝葉提取物19.3%、PVPP 9.6%、MCC 26.6%、L-HPC 5.0%時，綜合評分Y達到最大值（123）；通過試驗驗證發現，試驗值（Y=119±5）與模型預測值較為接近，表明該方法對優化金銀花枝葉提取物口腔崩解片制備工藝是可行的。

2.5 金銀花枝葉提取物口腔崩解片質量評價

試驗結果（表4）表明，體內、體外崩解時間有良好的相關性，體外崩解時間檢查方法能夠較為客觀地反映口腔崩解片在體內的崩解情況。取本品6片（最佳試驗條件下制片），按2010年版《中國藥典》溶出度測定法測定，計算每片的溶出度。結果表明平均溶出不低于標示量的80%，符合規定。

3 結論

該試驗通過對不同處方的篩選與優化，確定芳香劑桔子香精∶矯味劑甘露醇∶甜味劑阿司帕坦的配比為1∶4∶1時，可基本掩蓋藥物的苦味，且無沙礫感，符合口腔崩解片的質量要求。同時通過響應面優化確定了配方，即金銀花枝葉提取物19.3%、PVPP 9.6%、MCC 26.6%、LHPC 5.0%。通過體內和體外崩解度檢查表明體內、體外崩解時間有良好的相關性，體外崩解時間檢查方法能夠較為客觀地反映口腔崩解片在體內的崩解情況。

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