羅布麻總黃酮的急性毒性實驗研究

胡夢楠 梁泰剛*（山西醫科大學藥學院，山西 太原 030001）

?

羅布麻總黃酮的急性毒性實驗研究

胡夢楠 梁泰剛*
（山西醫科大學藥學院，山西 太原 030001）

【摘要】目的 初步評價羅布麻總黃酮的安全性。方法 小鼠一次性灌胃給藥，連續觀察14 d，通過預實驗判斷測定半數致死量（LD50）的可能性，據此測定其LD50或最大耐受量（MTD）。結果 小鼠口服羅布麻總黃酮最大耐受量為10.24 g/kg。結論 羅布麻總黃酮對小鼠急性毒性低，安全性較高。

【關鍵詞】羅布麻；總黃酮；急性毒性；最大耐受量

羅布麻（Apocynum venetum L.）為夾竹桃科羅布麻屬植物羅布麻的干燥全草，又名紅麻、茶葉花等，具有降壓、強心、利尿、降血脂、延緩衰老、抗輻射、增強免疫等功效。臨床用于治療高血壓、高血脂、慢性心功能不全、腎炎水腫、防治感冒等。現代藥理研究表明羅布麻總黃酮是其降血壓、降血脂和抗血小板聚集、鎮靜、利尿的有效部位之一［1］。為保證臨床用藥的安全性，合理開發利用羅布麻總黃酮提取物資源提供可靠的安全性資料，本實驗對羅布麻總黃酮提取物進行了急性毒性評價。

1 實驗材料

1.1 受試藥物：稱取適量羅布麻，加入10倍量65%乙醇，70 ℃回流提取2次，每次2 h［2］，過濾，合并濾液，回收乙醇至無乙醇味，濃縮至適量體積獲得棕黃色羅布麻總黃酮粗提物。粗提物經HPD-400型樹脂，以1 BV/h吸附流速上樣，純化水沖洗2 BV，60%乙醇洗脫3 BV，收集60%乙醇洗脫液，減壓回收溶劑獲得純化后的羅布麻總黃酮有效部位［3］。以蘆丁為標準品通過紫外分光光度法計算得出提取物中總黃酮的含量為25.4%。

1.2 實驗動物：昆明種小鼠140只（SPF級），雌雄各半，6～7周齡，體質量18～25 g，由山西醫科大學實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK（晉）2009-0001，動物房合格證號：醫動字070102 號。

1.3 實驗環境：實驗室溫度23～27 ℃，相對濕度50%～70%，雌雄分籠飼養，每籠5只，自由攝食和飲水。

2 實驗方法與結果［4-5］

2.1 預實驗：取小鼠40只，隨機分成2組，每組20只，雌雄各半。分為對照組和實驗組。實驗組以最大給藥濃度，最大給藥劑量（0.4 mL/10 g）。一次灌胃，連續觀察14 d，期間觀察小鼠死亡數和一般情況。對照組灌胃等量0.5% CMC溶液，余同給藥組。若死亡數≥30%，則進行半數致死量（LD50）測定，否則測定最大耐受量（MTD）。

2.2 最大耐受量測定：取小鼠100只，隨機分成5組，每組20只，雌雄各半。分別為溶劑對照組（0.5% CMC-Na組）和羅布麻總黃酮組（4組，按劑量由高到低依次為16.00、12.08、10.24、8.20 g/kg組）。相鄰兩組劑量成等比級數，比值1.25：1。給藥前隔夜禁食12 h，自由飲水。按劑量一次灌胃給藥，對照組給予0.5% CMC-Na，給藥容積均為0.4 mL/10 g BW。給藥后2 h自由飲食，詳細觀察給藥后4 h內動物的反應情況，然后每天觀察1次。記錄小鼠死亡情況和體質量變化，觀察期限14 d。第14天時稱量各組小鼠體質量后，剖檢存活小鼠，觀察主要臟器病變情況。

2.3 實驗結果：在預實驗中，小鼠以最大給藥濃度和最大給藥劑量灌胃后，觀察14 d，死亡數＜30%，因此測不出LD50，所以進行最大耐受量（MTD）測定。按實驗劑量分別進行灌胃給予羅布麻總黃酮提取物，實驗中發現，灌胃給藥后部分小鼠出現自主活動減少，呼吸短促，尿量增加，甚至出現死亡。灌胃后的小鼠連續觀察14 d。小鼠灌胃后的死亡情況，體質量、行為活動、呼吸、排泄、精神狀態、飲食情況見表1、2。

由表1和表2可知，存活動物中對照組小鼠：行為活動、呼吸、排泄、精神狀態、飲食均無異常，未有動物死亡。羅布麻總黃酮組：隨著給藥劑量的升高，小鼠表現為活動減少，中毒小鼠表現為呼吸短促、尿量增多等。16.00 g/kg 劑量組給藥后24 h內死亡3只；12.08 g/kg劑量組給藥后24 h內死亡1只；10.24 g/kg和8.20 g/kg 劑量組均未有動物死亡。未死亡小鼠3～7 d各項指標恢復正常。14 d后處死受試小鼠并解剖尸檢，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等主要臟器，各實驗組臟器外觀均未見異常改變。結果，小鼠口服羅布麻總黃酮MTD 為10.24 g/kg。相當于臨床成人日用量的161倍（成人每日口服生藥量15 g，成人體質量60 kg計）。

3 實驗討論

羅布麻富含黃酮等活性物質，具有較高的藥理活性和食療保健作用［6-7］?？傸S酮作為羅布麻的主要活性成分，具有降壓、強心、利尿和降脂等作用。深化羅布麻總黃酮的研究將有助于進一步開發羅布麻總黃酮在食品保健和作為降壓，強心，利尿等治療藥物方面的應用前景，帶來更大的社會效益和經濟效益。

本研究制備了羅布麻總黃酮提取物，通過羅布麻總黃酮對小鼠的急性毒性實驗觀察發現：口服給藥未能測出羅布麻總黃酮的LD50，口服一次的MTD為10.24 g/（kg·d），相當于臨床成人日用量的161倍，表明羅布麻總黃酮口服給藥較為安全。但其安全性評價還應結合長期毒性實驗做進一步驗證，以全面保證臨床用藥的安全性。

表1 羅布麻總黃酮急性毒性試驗小鼠死亡及反應情況

表2 羅布麻總黃酮小鼠急性毒性試驗小鼠體質量（g，±s，n=20）

表2 羅布麻總黃酮小鼠急性毒性試驗小鼠體質量（g，±s，n=20）

注：與對照組比較，*P＜0.05

組別　　實驗前體質量　禁食后體質量　1 d體質量　3 d體質量　5 d體質量　7 d體質量　9 d體質量　11 d體質量　14 d體質量1　23.27±1.74　21.22±1.23　21.59±2.03* 22.07±1.65* 22.45±1.62* 23.43±1.38* 24.03±1.08* 25.11±1.45* 26.10±1.39* 2　23.24±1.13　20.98±1.05　22.18±1.32* 22.53±1.66* 22.69±1.32* 23.58±1.2* 24.25±1.45* 25.57±1.63* 26.89±1.30 3　23.66±1.25　20.86±1.73　22.98±1.80　23.29±1.6　23.71±1.57　24.96±1.28　25.13±1.27　26.95±1.35　27.97±1.12 4　23.15±1.61　21.23±0.96　23.34±1.22　23.8±1.73　24.06±1.49　24.98±1.37　25.75±1.33　27.46±1.63　27.66±1.49對照組　23.46±1.23　20.71±1.05　23.72±1.67　24.06±2.0　24.35±1.65　25.16±1.30　25.84±1.56　27.05±1.36　28.15±1.55

參考文獻

［1］ 侯晉軍，韓利文，楊官娥，等.羅布麻葉化學成分和藥理活性研究進展［J］.中草藥，2006，37（10）:1603-1606.

［2］ 葉菊，蘇印泉.羅布麻葉總黃酮提取工藝研究［J］.安徽農業科學，2008，36（10）:3939-3940.

［3］ 張素瓊，侯晉軍，李青山.大孔樹脂同步分離純化羅布麻葉總黃酮和總鞣質的研究［J］.中國中藥雜志，2008，33（10）:1141-1144+ 1230.

［4］ 崔明宇，孫志偉，王艷，等.蓬子菜有效部位總黃酮的急性毒性實驗研究［J］.中醫藥信息，2011，28（6）:36-37.

［5］ 李冬梅，尹曉飛，蔡大偉.淫羊藿總黃酮急性毒性試驗研究［J］.中國藥師，2007，10（10）:1011-1012.

［6］ 張衛明，肖正春，錢學射，等.羅布麻保健茶在境外的研究與利用［J］.中國野生植物資源，2007，26（3）:22-27.

［7］ 喻春明.羅布麻的概況及開發利用前景［J］.中國麻作，1996，18（3）: 40-41.

中圖分類號：R282.710.7

文獻標識碼：B

文章編號：1671-8194（2016）15-0037-02

*通訊作者