液相串聯(lián)質諾法測定四環(huán)素類藥物殘留方法的改進

徐向陽

摘要：本研究進行了液相串聯(lián)質譜測定四環(huán)素類藥物殘留方法的改進，通過前處理，液相條件的優(yōu)化，為批量檢測畜產(chǎn)品中四環(huán)素類藥物殘留提供一種快速有效的方法。

關鍵詞：畜產(chǎn)品；四環(huán)素；殘留；質譜

四環(huán)素類抗生素是一種廣譜抗生素，主要通過抑制細菌蛋白質合成達到抗菌效果，在化學結構上都屬于氫化并四苯環(huán)衍生物，故稱四環(huán)素類，代表物有四環(huán)素、土霉素、金霉素、強力霉素等。對革蘭氏陽性菌、陰性菌、立克次體、支原體、衣原體都有很好的抑制作用。由于價格低廉，使用方便，效果良好，四環(huán)素類被作為藥物添加劑廣泛應用于畜禽養(yǎng)殖業(yè)。但是四環(huán)素類容易誘導耐藥菌株，且會在畜產(chǎn)品中殘留。本文研究在GBT21317-2007和農業(yè)部1025號公告-12-2008基礎上，優(yōu)化了前處理方法，液相方法。經(jīng)試驗驗證，改進后的方法，簡便、準確，適合批量檢測四環(huán)素類藥物殘留的需要。

1.前處理方法

1.1提取

1）雞肉、豬肉，稱取2±0.02g勻質樣品，置于50mL離心管內，加8mLMcllvaine-Na2EDTA，渦旋混勻，中速振蕩10min，14000r/min離心5min，轉移上清液于另一50mL離心管內。重復提取一次，合并提取液，混勻，并14000r/min離心10min，去上清液8mL待凈化。

2）雞蛋，稱取2±0.02g勻質樣品，置于50mL離心管內，加9mLMcllvaine-Na2EDTA，渦旋混勻，中速振蕩10min，14000r/min離心5min，轉移上清液于另一50mL離心管內。重復提取一次，合并提取液，混勻，并14000r/min離心10min，去上清液10mL待凈化

1.2凈化

HLB固相萃取柱依次用甲醇3mL、水3mL活化。取備用液過柱，并依次用3mL水、3mL5%甲醇淋洗，擠干，棄去。用5mL甲醇洗脫并收集，55C°下氮氣吹干，加1mL30%甲醇復溶、過濾。吸取過濾液0.2mL，加30%甲醇0.8mL，混勻后上機。

2.儀器條件

2.1色譜條件

色譜柱：WatersAcquityBEHC18（2.1mm×50mm，1.7um）柱溫：30℃，流動相：A：乙腈；B：0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫（梯度洗脫程序見表1）進樣量：2uL

2.2質譜條件

離子源：電噴霧ESI；掃描方式：正離子掃描；采集模式：多反應監(jiān)測MRM；毛細管電壓：3.3kV；錐孔電壓：25.00V；離子源溫度：150℃；霧化溫度：500℃；定性、定量離子對及對應的錐孔電壓和碰撞電壓（見表2）。

3.結果

回收率及精密度取空白豬肉試樣，進行加標試驗，測得回收率81.3%～102.6%，精密度0.5%～5.8%，數(shù)據(jù)（見表3）。

4.分析

國標方法中前處理和梯度洗脫程序冗長，本研究通過減少稱樣量，相對增加Mellvaine-Na2EDTA提取液用量，利用高速渦旋和14000轉速的高速冷凍離心，加快了前處理速度，前處理步驟得到簡化。優(yōu)化了梯度洗脫程序，洗脫效率得到極大提高，也得到了較好的質譜離子化效率。該方法既提高了檢測效率，也保證了檢測的可靠性。（編輯：趙曉松）