Pim-3與NF-κB在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中的表達(dá)及相關(guān)性研究*

戴小麗，韓中保，楊友田，邱　靜，劉一飛

(1.鹽城衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院，江蘇鹽城 224005；2.江蘇省鹽城市第三人民醫(yī)院病理科　224001；3.南通大學(xué)附屬醫(yī)院病理科　226001)

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Pim-3與NF-κB在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中的表達(dá)及相關(guān)性研究*

戴小麗1，韓中保1，楊友田1，邱靜2，劉一飛3

(1.鹽城衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院，江蘇鹽城 224005；2.江蘇省鹽城市第三人民醫(yī)院病理科224001；3.南通大學(xué)附屬醫(yī)院病理科226001)

[摘要]目的探討Pim-3與NF-κB在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌發(fā)病中的作用。方法用免疫組織化學(xué)技術(shù)SP法，檢測(cè)Pim-3與NF-κB在75例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌、21例乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌及30例正常乳腺組織中的表達(dá)，分析它們與乳腺癌臨床病理因素的關(guān)系及兩者的相關(guān)性。結(jié)果在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中Pim-3的陽性表達(dá)率為77.3%、NF-κB為68.0%，在乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌中Pim-3的陽性表達(dá)率為52.4%、NF-κB為42.9%，在正常乳腺組織中Pim-3的陽性表達(dá)率為23.3%、NF-κB為16.7%。Pim-3陽性表達(dá)率與腫瘤直徑、組織學(xué)分級(jí)、臨床病理分期，NF-κB陽性表達(dá)率與腫瘤直徑、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性。Spearmen秩相關(guān)分析，乳腺癌中Pim-3的陽性表達(dá)與NF-κB陽性表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.243)。結(jié)論P(yáng)im-3與NF-κB在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中具有重要的促進(jìn)作用，其陽性表達(dá)對(duì)預(yù)后的判斷具參考作用。

[關(guān)鍵詞]乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌；Pim-3；真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子B

2012年歐洲女性最常見的惡性腫瘤與最主要的死因是乳腺癌，預(yù)計(jì)2020年發(fā)病率還會(huì)進(jìn)一步上升[1]。Pim-3是Pim(proviral integration of moloney murine leukemia virus，Pim)家族成員之一，該家族是編碼絲/蘇氨酸蛋白激酶的原癌基因，其抑制細(xì)胞凋亡是通過磷酸化相關(guān)凋亡因子、干擾細(xì)胞周期而達(dá)到，對(duì)于腫瘤的發(fā)生與侵襲生長(zhǎng)起重要作用[2]。真核細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子B(nuclear factor-κappaB,NF-κB)[3]是一種轉(zhuǎn)錄因子，與腫瘤細(xì)胞增殖密切相關(guān)，促進(jìn)腫瘤侵襲生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移，在多種惡性腫瘤中有表達(dá)。關(guān)于Pim-3在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中表達(dá)，及其與NF-κB之間的相關(guān)性研究較少，本研究旨在通過統(tǒng)計(jì)分析研究Pim-3與NF-κB在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中的表達(dá)，來探討兩者的關(guān)系及可能的作用機(jī)制。

1資料與方法

1.1一般資料組織標(biāo)本收集時(shí)間為2013年1～12月，鹽城市第三人民醫(yī)院病理科新鮮乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織75例，同期正常乳腺組織(為切除的良性病變組織)30例，以及乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌組織21例。患者均為女性，年齡23～71歲，參照國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床TNM分期，采用《腫瘤組織病理學(xué)診斷》標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)，在手術(shù)前所有患者均未進(jìn)行化療、放療及其他治療。

1.2方法

1.2.1免疫組織化學(xué)(SP)染色石蠟標(biāo)本選取4 μm厚度連續(xù)切片，水中展片、撈片溫度45 ℃，烤片溫度65 ℃，靜置1.5 h后備用于常溫干燥環(huán)境。采用Envision二步法進(jìn)行SP染色，陰性對(duì)照使用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗，陽性對(duì)照使用已知陽性切片。

1.2.2染色結(jié)果判斷Pim-3與NF-κB的染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)Shimizu法[4]改良而成：顯微鏡下細(xì)胞質(zhì)顯示棕褐色或棕黃色顆粒判斷為陽性著色。結(jié)合染色強(qiáng)度與著色范圍進(jìn)行判斷，由兩位有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師對(duì)各張切片進(jìn)行盲讀，結(jié)合著色的范圍與強(qiáng)度綜合判斷。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用率表示，使用χ2檢驗(yàn)分析，使用Spearman秩相關(guān)分析Pim-3與NF-κB表達(dá)的相關(guān)性，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1Pim-3、NF-κB在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中的表達(dá)Pim-3主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，為棕褐色和棕黃色顆粒； NF-κB主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，少量有細(xì)胞膜、細(xì)胞核表達(dá)，為棕黃色細(xì)顆粒(圖1)。Pim-3在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中陽性58例，陰性17例；在乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌中陽性11例，陰性10例；在正常乳腺組織中陽性7例，陰性23例。NF-κB在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中陽性51例，陰性24例；在乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌中陽性9例，陰性12例；在正常乳腺組織中陽性5例，陰性25例；不同組織中Pim-3與NF-κB陽性率表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

2.2Pim-3、NF-κB表達(dá)與乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌臨床病理因素之間的關(guān)系Pim-3陽性表達(dá)與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)(P<0.05)，且隨腫瘤直徑增大、組織惡性程度增高，陽性表達(dá)率升高；NF-κB陽性表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)(P<0.05)，見表2。

2.3乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中Pim-3、NF-κB表達(dá)的相關(guān)性分析Pim-3與NF-κB均陰性者為12.0%(9/75)，NF-κB表達(dá)在Pim-3陰性表達(dá)中的表達(dá)率為52.9%(9/17)，Pim-3與NF-κB均陽性者為57.3%(43/75)，NF-κB表達(dá)在Pim-3陽性表達(dá)中的表達(dá)率為74.1%(43/58)，二者的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.243，P<0.05)，見表3。

A：乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌Ⅰ級(jí)，Pim-3陽性(×200)；B：乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌Ⅱ級(jí)，NF-κB陽性(×100)；C：乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌Ⅲ級(jí)，Pim-3陽性(×100)。

圖1　乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中Pim-3、NF-κB陽性表達(dá)的SP染色結(jié)果

表2　Pim-3及NF-κB的表達(dá)與乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌

續(xù)表2　Pim-3及NF-κB的表達(dá)與乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌

表3　Pim-3與NF-κB在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌

3討論

乳腺癌是最常見的女性惡性腫瘤，其預(yù)后除腫瘤生物學(xué)特性外，主要與早期診斷密切相關(guān)，本研究通過免疫組織化學(xué)SP法聯(lián)合檢測(cè)Pim-3與NF-κB的表達(dá)，探討其與乳腺癌臨床病理因素的相關(guān)性，旨在評(píng)價(jià)其在乳腺癌的臨床病理診斷與預(yù)后判斷中的價(jià)值。

Pim-3的統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，與良性病變相比，乳腺癌組織中Pim-3表達(dá)上調(diào)，可能是由于Pim-3高表達(dá)可抑制細(xì)胞凋亡相關(guān)因子，幫助腫瘤細(xì)胞逃避凋亡，使腫瘤得以發(fā)生[4-7]； 此外，本研究發(fā)現(xiàn)其陽性表達(dá)與乳腺癌組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān)，有研究發(fā)現(xiàn)Pim-3表達(dá)可促進(jìn)下游細(xì)胞因子，如VEGF、cyclinD1表達(dá)，從而促進(jìn)腫瘤血管生長(zhǎng)得以轉(zhuǎn)移侵襲[8-10]。

NF-κB在腫瘤組織中陽性表達(dá)比正常組織高，其表達(dá)與腫瘤惡性程度與乳腺癌分化級(jí)別呈正相關(guān)，與文獻(xiàn)結(jié)果相符[11]?？赡艿脑蚴钱惓；罨腘F-κB引起細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)失控，從而使細(xì)胞趨于無限增殖和分裂，惡性腫瘤得以形成[12]。并且NF-κB高表達(dá)激活其對(duì)其下游許多黏附、轉(zhuǎn)移相關(guān)因子的基因產(chǎn)物如VEGF的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，從而促進(jìn)腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移[13]。

國(guó)外學(xué)者研究證實(shí)，Pim-3異常表達(dá)可減弱體內(nèi)的細(xì)胞正常凋亡程序，啟動(dòng)IKK/NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，使細(xì)胞凋亡基因抑制子(IAP)的表達(dá)上調(diào)，從而使腫瘤細(xì)胞得以生存，并且可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生、發(fā)展[14]；而活化NF-κB又會(huì)促使cMyc、cyclinD1等腫瘤轉(zhuǎn)移因子表達(dá)，通過p38MAPK等途徑，從而激活下游iNOS、COX-2等相關(guān)因子，誘發(fā)VEGF家族多個(gè)成員的表達(dá)，幫助腫瘤的血管與淋巴管生成，對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移與浸潤(rùn)生長(zhǎng)起顯著的促進(jìn)作用[15]。

本研究表明，Pim-3高表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生與惡性進(jìn)展密切相關(guān)；NF-κB陽性表達(dá)不僅可作為乳腺癌的輔助診斷依據(jù)，也可作為判斷生物學(xué)行為與評(píng)估乳腺癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)。提示了Pim-3、NF-κB在腫瘤發(fā)生與惡性侵襲，如血管與淋巴管生成中的作用，提示在Pim-3、NF-κB之間可能存在一條促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移與侵襲生長(zhǎng)的通路，筆者將會(huì)在今后的研究中進(jìn)一步求證探討，Pim-3、NF-κB的這種抑制腫瘤細(xì)胞凋亡和促進(jìn)腫瘤血管與淋巴管形成的特點(diǎn)，可能成為未來抗腫瘤治療的新靶點(diǎn)，具有重要的臨床意義。

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Correlated expression of Pim-3 and NF-κB in infiltrating ductal carcinoma of breast*

Dai Xiaoli1,Han Zhongbao1,Yang Youtian1,Qiu Jing2,Liu Yifei3

(1.DepartmentofClinicalScience,YanchengInstituteofHealthScience,Yancheng,Jiangsu224005,China;2.DepartmentofPathology,theThirdPeople′sHospitalofYancheng,Yancheng,Jiangsu224001,China;3.DepartmentofPathology,theAffiliatedHospitalofNantongUniversity,Nantong,Jiangsu226001,China)

[Abstract]Objectiveto investigate the role of Pim-3 and NF-κB in the development and progression of infiltrating ductal carcinoma of the breast.MethodsHere,we used immunohistochemistry to detect expression of Pim-3 and NF-κB in 75 samples of infiltrating ductal breast carcinoma,21 samples of intraductal breast carcinoma and 30 normal breast tissues.The relationship of their expression,as well as their correlation with clinicopathological features and patient survival were assessed.ResultsIn contrast,both Pim-3 and NF-κB were more commonly detected in infiltrating ductal carcinoma than in intraductal carcinoma and normal tissue.In the infiltrating ductal carcinoma,the positive expression rate of Pim-3 was 77.3%,and that of NF-κB was 68.0%;in ductal carcinoma of the breast,the positive expression rate of Pim-3 was 52.4%,and that of NF-κB was 42.9%;in the normal breast tissue,the positive expression rate of Pim-3 was 23.3%,and that of NF-κB was 16.7%;the positive expression rate of Pim-3 was correlated with tumor size,histological grade,and clinicopathological stage;and that of NF-κB was correlated with tumor size,histological grade,lymph node metastasis of breast cancer.Spearman rank correlation analysis revealed a positive correlation between Pim-3 expression and NF-κB expression in infiltrating breast cancer(r=0.243).ConclusionOur results demonstrate that Pim-3 and NF-κB play a role in the initiation and development of breast cancer,thus,these proteins may serve as useful diagnostic and prognostic markers of invasive breast cancer.

[Key words]infiltrating ductal carcinoma of breast;proviral integration of moloney murine leukemia virus -3;nuclear factor- κappaB

doi:論著·臨床研究10.3969/j.issn.1671-8348.2016.16.016

*基金項(xiàng)目：江蘇省鹽城市醫(yī)學(xué)科技發(fā)展計(jì)劃基金資助項(xiàng)目(YK2013057)。

作者簡(jiǎn)介：戴小麗(1981-)，講師、主治醫(yī)師，碩士，主要從腺癌病理學(xué)與臨床研究。

[中圖分類號(hào)]R737.9

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1671-8348(2016)16-2212-03

(收稿日期：2015-12-11修回日期：2016-02-26)