西妥昔單抗聯(lián)合FOLFOX4對(duì)老年結(jié)腸癌患者組織PTEN及P13K表達(dá)的影響

虞義建，虞玲燕，王雙珠

(1.浙江省臺(tái)州醫(yī)院 病理科，浙江 臺(tái)州 317000；2.浙江省臺(tái)州醫(yī)院 急診科，浙江 臺(tái)州 317000)

西妥昔單抗聯(lián)合FOLFOX4對(duì)老年結(jié)腸癌患者組織PTEN及P13K表達(dá)的影響

虞義建1Δ，虞玲燕2，王雙珠1

(1.浙江省臺(tái)州醫(yī)院 病理科，浙江 臺(tái)州 317000；2.浙江省臺(tái)州醫(yī)院 急診科，浙江 臺(tái)州 317000)

目的 探討西妥昔單抗聯(lián)合FOLFOX4化療方案對(duì)老年結(jié)腸癌患者組織抑癌基因PTEN及P13K表達(dá)的影響。方法 選取2013年10月～2015年7月浙江省臺(tái)州醫(yī)院收治的結(jié)腸癌老年患者62例，按治療方法不同分組，對(duì)照組(n=27)采用單純FOLFOX4方案化療，研究組(n=35)在FOLFOX4化療方案基礎(chǔ)上給予西妥昔單抗治療，療程均為4個(gè)周期，對(duì)比2組間臨床療效，治療前后采用免疫組化測(cè)定病理組織PTEN及P13K表達(dá)狀況。結(jié)果 研究組有效率(51.4%)與對(duì)照組有效率(44.4%)，研究組疾病控制率(80.0%)與對(duì)照組疾病控制率(62.9%)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.298，P=0.585；χ2=2.223，P=0.136)。在組織PTEN及P13K表達(dá)上，研究組治療后PTEN陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組(82.86%vs. 59.26%,P<0.05)，治療后P13K陽(yáng)性率顯著低于對(duì)照組(37.14%vs. 62.96%,P<0.05)。結(jié)論 采用西妥昔單抗聯(lián)合FOLFOX4化療方案治療老年結(jié)腸癌能提高組織PTEN表達(dá)，降低P13K表達(dá)，效果顯著。

西妥昔單抗；FOLFOX4；老年；結(jié)腸癌；PTEN；P13K

結(jié)腸癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,具有較高的死亡率[1]，現(xiàn)階段FOLFOX4化療方案是晚期結(jié)腸癌的標(biāo)準(zhǔn)治療方案之一,但由于腫瘤耐藥性及化療相關(guān)的嚴(yán)重不良反應(yīng)常導(dǎo)致治療失敗[2]。研究表明表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)的表達(dá)程度與西妥昔單抗的近期療效有一定相關(guān)性[3]。有報(bào)道顯示P13K/Akt是其中比較重要的一條信號(hào)傳導(dǎo)途徑,該通路與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[4]。目前國(guó)內(nèi)對(duì)于西妥昔單抗聯(lián)合FOLFOX4對(duì)老年結(jié)腸癌抑癌基因PTEN及P13K表達(dá)的研究仍然相對(duì)較少，本次研究探討西妥昔單抗聯(lián)合FOLFOX4對(duì)老年結(jié)腸癌患者組織PTEN及P13K表達(dá)的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年10月～2015年7月來(lái)浙江省臺(tái)州醫(yī)院治療的結(jié)腸癌老年患者62例，經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診，排除存在肝腎功能、心電圖異常，存在化療禁忌癥患者，按治療方法不同進(jìn)行分組，對(duì)照組27例采用FOLFOX4方案化療，男15例，女12例，年齡69～82歲，平均年齡(73.1±6.8)歲，病理分類高分化腺癌10例，中分化腺癌12例，低分化腺癌3例，粘液腺癌2例；研究組35例在FOLFOX4化療方案基礎(chǔ)上給予西妥昔單抗，男20例，女15例，年齡68～84歲，平均年齡(72.9±6.5)歲，病理分類高分化腺癌13例，中分化腺癌17例，低分化腺癌3例，粘液腺癌2例，2組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 方法

1.2.1 治療方法：對(duì)照組采用FOLFOX4方案：靜脈滴注奧沙利鉑(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)：H20000337)85 mg/m2，2 h，d1；靜脈滴注亞葉酸鈣(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，H32022391)200 mg/m2，2 h，d1-d2；靜脈注射氟尿嘧啶(上海旭東海普藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)：H31020593)400 mg/m2，d1-d2；持續(xù)靜脈滴注5-Fu 600 mg/m2，22 h，d1-d2；每14 d重復(fù)1次，為1個(gè)周期，連續(xù)治療4個(gè)周期。研究組在FOLFOX4化療方案基礎(chǔ)上給予西妥昔單抗(德國(guó)默克制藥廠，批準(zhǔn)文號(hào)：S20050095)治療，給藥前30 min肌注鹽酸異丙嗪(上海禾豐制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)：H31021490)25 mg，靜脈推注地塞米松(廣州白云山天心制藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)：H44022091)5 mg，首次靜脈滴注西妥昔單抗400 mg/m2，時(shí)間2 h，隨后降為每周250 mg/m2，時(shí)間1 h。

1.2.2 免疫組化檢測(cè)方法：準(zhǔn)備：取出石蠟包埋組織，加4%聚甲醛磷酸鹽緩沖液內(nèi)固定；切片：石蠟包埋組織切片2張，標(biāo)記P13K(A)、PTEN(B)，每片4 μm；脫蠟水化：二甲苯Ⅰ、Ⅱ浸泡15 min，無(wú)水乙醇、95%乙醇、70%乙醇中浸泡3 min，流水沖洗5 min。放入PBS液中，放在震蕩儀上震蕩2 min/次×3；高壓修復(fù)抗原：取適量EDTA(pH9.0)抗原修復(fù)液、檸檬酸鹽緩沖液(pH6.0)高壓鍋加熱，2、3 min后取出切片；置于PBS液，震蕩儀上震蕩2 min/次×3；擦去PBS液，滴加第一抗體(P13K、PTEN)，室溫下孵育15 min，PBS液中置于震蕩儀上震蕩3 min/次×3；擦去PBS液，滴加MaxVision TMHRP-Polymeranti -Rabbit IHC，室溫下孵育15min，PBS液中置于震蕩儀上震蕩3 min/次×3；擦去PBS液，滴加新配制的DAB ingrain agent，混勻后加至切片，37 ℃反應(yīng)10～30 min后觀察顯色情況；反復(fù)沖洗3次，蘇木素復(fù)染，脫水、透明、樹脂膠封片，顯微鏡下觀察記錄顯色情況。

1.2.3 觀測(cè)指標(biāo)：

① 臨床療效：完全緩解(CR)為所有目標(biāo)病灶消失并持續(xù)>1個(gè)月；部分緩解(PR)為腫瘤病灶長(zhǎng)徑總和縮小≥35%，并持續(xù)>1個(gè)月；穩(wěn)定(SD)為腫瘤病灶長(zhǎng)徑總和縮小未達(dá)PR，有增大而未達(dá)PD；進(jìn)展(PD)為腫瘤病灶長(zhǎng)徑總和增大≥20%或存在新發(fā)病灶。有效率=完全緩解率+部分緩解率，疾病控制率=完全緩解率+部分緩解率+穩(wěn)定率。

② PTEN及P13K表達(dá)：采用免疫組化測(cè)定治療前后病理組織：PTEN、P13K免疫組化染色結(jié)果=陽(yáng)性細(xì)胞百分比+著色強(qiáng)度，積分0～3分為-，積分3～5分為+，積分5～9分為++，積分9～12分為+++。陽(yáng)性細(xì)胞百分比計(jì)分：陽(yáng)性細(xì)胞百分比0為0分，陽(yáng)性細(xì)胞百分比<25%為1分，陽(yáng)性細(xì)胞百分比25%～50%為2分，陽(yáng)性細(xì)胞百分比50%～75%為3分，陽(yáng)性細(xì)胞百分比>75%計(jì)為4分；著色強(qiáng)度：著色強(qiáng)度無(wú)著色為0分，著色強(qiáng)度黃色為1分，著色強(qiáng)度棕黃色為2分，著色強(qiáng)度黃褐色為3分。

2 結(jié)果

2.1 2組患者治療后臨床效果分析 研究組有效率(51.4%)與對(duì)照組有效率(44.4%)，研究組疾病控制率(80.0%)與對(duì)照組疾病控制率(62.9%)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.298，P=0.585；χ2=2.223，P=0.136)。見表1。

表1 2組患者治療后臨床效果分析[n(%)]

2.2 2組患者治療前后組織PTEN及P13K表達(dá)狀況分析 細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)存在黃色或黃棕色顆粒為PTEN陽(yáng)性，細(xì)胞質(zhì)中存在黃棕色顆粒為P13K陽(yáng)性，見圖1。

圖1 結(jié)腸腺癌細(xì)胞中PTEN與P13K免疫組化結(jié)果(×100)Fig.1 Immunohistochemical results of PTEN and P13K in colon cancer cells(×100)

治療前，對(duì)照組PTEN陽(yáng)性率(51.85%)與研究組比較PTEN陽(yáng)性率(54.29%)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，治療后研究組PTEN陽(yáng)性率(82.86%)高于對(duì)照組PTEN陽(yáng)性率(62.96%)(χ2=4.265，P<0.05)。

治療前，對(duì)照組P13K陽(yáng)性率(70.37%)與研究組P13K陽(yáng)性率(71.43%)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，治療后研究組P13K陽(yáng)性率(37.14%)顯著低于對(duì)照組P13K陽(yáng)性率(62.96%)(χ2=4.069，P<0.05)。見表3。

表2 2組患者治療前后組織PTEN表達(dá)狀況比較

#P<0.05，與對(duì)照組治療后比較，compared with control group post-treatment

表3 2組患者治療前后組織P13K表達(dá)狀況比較

#P<0.05，與對(duì)照組治療后比較，compared with control group post-treatment

3 討論

結(jié)腸癌是常見的惡性腫瘤之一,在我國(guó)的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)[5],嚴(yán)重威脅人類生命與健康。許多結(jié)腸癌患者出現(xiàn)明顯癥狀時(shí)，往往已進(jìn)入晚期，且容易發(fā)生轉(zhuǎn)移，從而失去了手術(shù)機(jī)會(huì)[6]?；熓侵委熃Y(jié)腸癌主要治療手段之一，可延長(zhǎng)患者生存時(shí)間。FOLFOX4化療方案存在腫瘤耐藥性及化療相關(guān)的嚴(yán)重不良反應(yīng)，化療結(jié)果不良。近年來(lái)，單克隆抗體與化療藥物的聯(lián)合使用提高了結(jié)腸癌的治療效果，西妥昔單抗(cetuximab) 作用靶點(diǎn)為表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)，能逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞對(duì)細(xì)胞毒類藥物的抗藥性而達(dá)到抑制腫瘤進(jìn)展的目的[7]。隨著對(duì)腫瘤發(fā)病機(jī)制的進(jìn)一步認(rèn)識(shí)，與腫瘤細(xì)胞增殖分化等有關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)通路被報(bào)道，PTEN/P13K/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是其中之一，以該通路為靶點(diǎn)治療腫瘤的小分子特異性抑制劑正成為熱點(diǎn)研究之一。國(guó)內(nèi)尚缺乏西妥昔單抗聯(lián)合FOLFOX方案 對(duì)抑制PTEN/P13K/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的依據(jù)，大規(guī)模臨床研究數(shù)據(jù)顯示，cetuximab聯(lián)合化療用于KRAS野生型mCRC患者的一線治療已得到廣泛認(rèn)可[8]。隨著對(duì)腫瘤分子靶向治療研究深入，靶向治療藥物具有毒性低、靶向性好、效能高等特點(diǎn)，在改善晚期患者生活質(zhì)量及控制腫瘤進(jìn)展方面表現(xiàn)出獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。本次研究發(fā)現(xiàn)不論在療效及疾病控制率上，雖然在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)差異，但兩者合用均高于單純化療，說(shuō)明西妥昔單抗聯(lián)合FOLFOX4化療方案近期療效明顯，其對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞株具有明顯的抑制作用，可有效抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。

研究發(fā)現(xiàn)在結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中,可能由于PTEN蛋白的低表達(dá)或失表達(dá)不能有效抑制ERK磷酸化,使細(xì)胞發(fā)生癌變,并促進(jìn)癌變細(xì)胞的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移[9]。各種外界刺激可通過(guò)細(xì)胞內(nèi)的多種受體激活P13K，激活后的第二信使與下游Akt結(jié)合，不僅能導(dǎo)致Akt從細(xì)胞質(zhì)到細(xì)胞膜轉(zhuǎn)位，還可促使其構(gòu)象發(fā)生改變，激活A(yù)KT，通過(guò)磷酸化作用激活或抑制其下游靶蛋白參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖等多種生命活動(dòng)。研究發(fā)現(xiàn)PTEN在結(jié)腸癌中的缺失表達(dá)有可能激活了P13K信號(hào)傳導(dǎo)通路，兩者共同參與了結(jié)腸癌的發(fā)生[10]，為結(jié)腸癌的個(gè)體化治療提供依據(jù)。在組織PTEN及P13K表達(dá)上，研究組治療后PTEN陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組，治療后P13K陽(yáng)性率顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，說(shuō)明西妥昔單抗聯(lián)合FOLFOX4化療方案治療老年結(jié)腸癌能降低P13K表達(dá)，提高PTEN表達(dá)，可能與西妥昔單抗對(duì)PTEN/P13K/AKT信號(hào)通路具有靶向作用有關(guān)。

本次研究發(fā)現(xiàn)采用西妥昔單抗聯(lián)合FOLFOX4化療方案治療老年結(jié)腸癌能提高組織PTEN表達(dá)，降低P13K表達(dá)，效果顯著。西妥昔單抗是腫瘤分子靶向治療的最新研究成果之一，其對(duì)直腸癌患者的個(gè)體化治療意義重大。本次由于人數(shù)及時(shí)間限制，對(duì)于西妥昔單抗通過(guò)何種機(jī)制對(duì)PTEN/P13K/AKT信號(hào)通路起到靶向作用尚不清楚，需要進(jìn)一步研究。

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(編校：王儼儼)

Effect of cetuximab combined with FOLFOX4 on expressions of PTEN and P13K in colon cancer tissue of elderly patients

YU Yi-jian1Δ, YU Ling-yan2, WANG Shuang-zhu1

(1.Department of Pathology, Taizhou Hospital of Zhejiang Province, Taizhou 317000, China; 2. Department of Emergency,Taizhou Hospital of Zhejiang Province, Taizhou 317000, China)

ObjectiveTo investigate the effect of cetuximab combined with FOLFOX4 chemotherapy on expressions of cancer suppressor gene PTEN and P13K in colon cancer tissue of elderly patients.Methods62 cases of elderly patients with colon cancer from October 2013 to July 2015 in our hospital were selected and divided into two groups according to the different therapy. The control group (n=27)

pure FOLFOX4 chemotherapy and treatment group(n=35)received cetuximab on the basis of FOLFOX4 chemotherapy, with a consecutive treatment of 4 courses. The clinical curative effect and expressions of PTEN and P13K in colon cancer tissue were compared between two groups.ResultsThere were no significant difference in effective rate and disease control rate between treatment group and control group (51.4% vs. 44.4%,χ2=0.298,P=0.585; 80.0%vs. 62.9%,χ2=2.223,P=0.136 ). After treatment, the cells positive rate of PTEN in treatment group was higher than that in control group post-treatment (82.86%vs. 59.26%,P<0.05), and the cells positive rate of P13K in treatment group was lower than that in control group (37.14%vs. 62.96%,P<0.05).ConclusionCetuximab combined FOLFOX4 chemotherapy regimen could increase expression of PTEN and reduce P13K expression, which effect is remarkable in the treatment of elderly colon cancer.

cetuximab; FOLFOX4; elderly;colon cancer; PTEN; P13K

浙江省自然科學(xué)基金(LY13H160024)

虞義建，通信作者，男，本科，主治醫(yī)師，研究方向：腫瘤病理，E-mail：poyisb@163.com。

R735.3+5

A

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.04.50