細(xì)菌培養(yǎng)法聯(lián)合檢測流行性腦膜炎奈瑟氏菌的臨床研究

趙燦河南省周口市第六人民醫(yī)院，河南周口　466000

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細(xì)菌培養(yǎng)法聯(lián)合檢測流行性腦膜炎奈瑟氏菌的臨床研究

趙燦
河南省周口市第六人民醫(yī)院，河南周口466000

［摘要］目的探究細(xì)菌培養(yǎng)法聯(lián)合檢測流行性腦膜炎奈瑟氏菌的臨床效果。 方法本文研究對(duì)象均選自2014年10 月-2015年10月自愿參加研究的432例健康人群的流行性腦膜炎奈瑟氏菌樣品，對(duì)所有受檢者采用普通PCR法檢測技術(shù)和傳統(tǒng)的細(xì)菌培養(yǎng)法，分析檢測結(jié)果。結(jié)果采用單純細(xì)菌培養(yǎng)法的受檢者有267例，共檢出7株腦膜炎奈瑟氏菌，2株B群，1株X群，2株C群，有2份不可分群的流腦菌株出現(xiàn)在血清上。采用細(xì)菌培養(yǎng)法和普通PCR法有165例，其中檢出12株腦膜炎奈瑟氏菌，檢出5株B群，3株X群，2株C群，1株W135群，不可分群現(xiàn)象不存在。結(jié)論在流行性腦膜炎奈瑟氏菌的檢測中應(yīng)用普通PCR法檢測技術(shù)和傳統(tǒng)的細(xì)菌培養(yǎng)法效果顯著，能有效提高腦膜炎奈瑟氏菌的檢出率和實(shí)驗(yàn)室檢測能力，值得應(yīng)用和推廣。

［關(guān)鍵詞］細(xì)菌培養(yǎng)法；流行性腦膜炎；奈瑟氏菌

流行性腦膜炎是一種急性呼吸道傳染病，發(fā)病與流行時(shí)間一般在冬春季，這種病癥是由于腦膜炎奈瑟球菌在呼吸道傳播引起的，是一種化膿性腦膜炎［1-2］。腦膜炎發(fā)病十分迅速，死亡率也非常高，會(huì)留下較嚴(yán)重的后遺癥。為了更好地防治這種疾病，首先必須將這種腦膜炎奈瑟氏菌給檢測出來，了解居民這種流行性腦膜炎奈瑟氏菌的帶菌情況，為實(shí)際的臨床治療提供參考

1　資料與方法

1.1一般資料

432例研究對(duì)象均為2014年10月-2015年10月期間到我院進(jìn)行健康體檢的人員，并將其分為兩組，其中采用細(xì)菌培養(yǎng)法檢測的有267例，采用細(xì)菌培養(yǎng)法聯(lián)合普通PCR法檢測的165例，細(xì)菌培養(yǎng)法檢測中，男122例，女145例，年齡27～69歲，平均年齡（41.92± 19.15）歲；普通PCR法聯(lián)合細(xì)菌培養(yǎng)法檢測中男性90例，女性75例，年齡25～71歲，平均年齡（40.82±18.77）歲，所選研究對(duì)象均對(duì)本研究知情，并自愿參與本實(shí)驗(yàn)，排除具有嚴(yán)重心、肝、腎等器官腫瘤疾病以及炎癥感染的人群。兩組研究對(duì)象的基本資料比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），具有可比性。本研究已提交醫(yī)院倫理學(xué)會(huì)審批并獲準(zhǔn)。

由Therm公司生產(chǎn)二氧化碳培養(yǎng)箱，由美國ABI公司生產(chǎn)ABI7500熒光定量PCR儀。由賽默飛世爾生物化學(xué)制品有限公司提供巧克力雙抗瓊脂平板，中國藥品生物制品檢定所提供腦膜炎奈瑟氏菌診斷血清，美國Gibical公司生產(chǎn)2×PCR Pre-mix、分子級(jí)無菌純水，青島海博技術(shù)有限公司提供化鑒定所用試劑，由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成特異引物，具體可參照國家疾控中心擴(kuò)增，如引物為orf-2f，引物序列：5'cgcaataggtatatatattcttcc-3'，擴(kuò)增片段長度為400bp，鑒定特性為NmA群。

1.2方法

1.2.1細(xì)菌培養(yǎng)法 采用無菌棉拭子拭擦對(duì)懸雍垂后鼻咽部黏膜處，立即接種預(yù)溫的雙抗巧克力瓊脂血平板，成功接種后送到保溫箱保溫后再送入檢驗(yàn)室，之后送入檢驗(yàn)室。檢驗(yàn)人員要在檢驗(yàn)室中挑取直徑1～2 mm的半透明、濕潤、灰白色的菌落，將其放置于帶有5%二氧化碳的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)18～24 h，挑取涂片染色，根據(jù)鏡檢結(jié)果發(fā)現(xiàn)要進(jìn)一步分離鑒定革蘭陰性雙球菌患者及氧化酶試驗(yàn)陽性患者所攜帶的細(xì)菌。

1.2.2普通PCR法和細(xì)菌培養(yǎng)法相結(jié)合采用無菌棉拭子拭擦對(duì)懸雍垂后鼻咽部黏膜處，立即接種預(yù)溫的雙抗巧克力瓊脂血平板，成功接種后送到保溫箱保溫后再送入檢驗(yàn)室，檢驗(yàn)人員要在檢驗(yàn)室中挑取直徑1～2 mm的半透明、濕潤、灰白色的菌落，將其放置于帶有5%二氧化碳的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)18～24 h，挑取涂片染色，通過鏡檢可得知，根據(jù)鏡檢結(jié)果發(fā)現(xiàn)要進(jìn)一步分離鑒定革蘭陰性雙球菌患者及氧化酶試驗(yàn)陽性患者所攜帶的細(xì)菌，采用水煮法提取不發(fā)酵乳糖、蔗糖的菌落。取100～200 μL純水和一定量的新鮮培養(yǎng)物相互混濁，沸水煮20 min后1000 rpm離心5 min提取上清液吸，最后做成DNA模板。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩種檢測方式的檢出結(jié)果采用（%）表示，行Χ2檢驗(yàn)，P＜0.05表示兩組數(shù)據(jù)比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

采用單純細(xì)菌培養(yǎng)法的受檢者有267例，共檢出7株腦膜炎奈瑟氏菌，2株B群，1株X群，2株C群，有2份不可分群的流腦菌株出現(xiàn)在血清上。采用細(xì)菌培養(yǎng)法和普通PCR法有165例，其中檢出12株腦膜炎奈瑟氏菌，檢出5株B群，3株X群，2株C群，1株W135群，不可分群現(xiàn)象不存在。兩組比較差異顯著（P＜0.05）。見表。

3　討論

流行性腦膜炎是由腦膜炎雙球菌引起的化膿性腦膜炎，即致病菌由鼻咽部逐漸侵入血循環(huán)，形成敗血癥后局限于脊髓膜和腦膜，患者多出現(xiàn)嘔吐、皮膚瘀點(diǎn)、發(fā)熱、頭痛等腦膜刺激征等臨床癥狀［3-4］。該病發(fā)病迅速，病死率達(dá)到20%且有嚴(yán)重后遺癥［5］。臨床表現(xiàn)多分為輕型和普通型，其中輕型多見于流腦流行時(shí)，有輕微病變，患者多出現(xiàn)輕微頭痛、低熱、咽痛等上呼吸道癥狀臨床表現(xiàn)，存有腦膜刺激征及皮膚出現(xiàn)少數(shù)細(xì)小出血點(diǎn)，腦脊液無多無明顯變化，通過咽拭子培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)病原菌［6-8］。細(xì)菌培養(yǎng)法下的流行性腦膜炎奈瑟氏菌檢出率是比較低的，這種方法對(duì)診斷血清質(zhì)量、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境以及實(shí)驗(yàn)室工作人員有著密切的關(guān)系，受限制性條件較多［9］。而本次實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)探討的PCR法與細(xì)菌培養(yǎng)法聯(lián)合檢測法，該法能夠更加直觀地檢測出這種病菌，具有較高的檢出率。本文研究結(jié)果顯示，采用單純細(xì)菌培養(yǎng)法的受檢者有267例，共檢出7株腦膜炎奈瑟氏菌，2 株B群，1株X群，2株C群，有2份不可分群的流腦菌株出現(xiàn)在血清上。采用細(xì)菌培養(yǎng)法和普通PCR法有165例，其中檢出12株腦膜炎奈瑟氏菌，檢出5株B群，3株X群，2株C群，1株W135群，不可分群現(xiàn)象不存在。由此說明，細(xì)菌培養(yǎng)法與診斷血清質(zhì)量、人員因素及實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件有著緊密聯(lián)系，因此才會(huì)出現(xiàn)較低的檢出率，而細(xì)菌培養(yǎng)法聯(lián)合普通PCR法檢測流行性腦膜炎奈瑟氏菌，檢測結(jié)果有著更強(qiáng)的直觀性，上述兩種檢測方法聯(lián)合應(yīng)用可提高流行性腦膜炎奈瑟氏菌的檢出率。研究結(jié)果中有1份不可分群的株菌分群為W135，主要是通過特異性基因擴(kuò)增，也正是這群呈現(xiàn)出擴(kuò)增陽性的群特異性基因才出現(xiàn)了上述結(jié)果。然而這種特異性基因中有滑移錯(cuò)配、缺失等現(xiàn)象，表現(xiàn)為不可分群血清，其莢膜也不能得到正常表達(dá)。謝國勇［10］等學(xué)者的相關(guān)研究成果表明，在直接涂片法、細(xì)菌培養(yǎng)法、PCR檢測法3種檢測法中，PCR檢測法的靈敏度最高、特異性最強(qiáng)，是臨床檢測奈瑟氏菌的理想方法，與本研究研究結(jié)果相一致。

表1　　細(xì)菌培養(yǎng)法和聯(lián)合培養(yǎng)法檢測結(jié)果

綜上所述，在流行性腦膜炎奈瑟氏菌的檢測中應(yīng)用普通PCR法檢測技術(shù)和傳統(tǒng)的細(xì)菌培養(yǎng)法效果顯著，能有效提高腦膜炎奈瑟氏菌的檢出率和實(shí)驗(yàn)室檢測能力，值得應(yīng)用和推廣。

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［中圖分類號(hào)］R446

［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］A

［文章編號(hào)］2096-1782（2016）01-0010-03

［作者簡介］趙燦（1970.10-），男，河南周口人，本科，副主任醫(yī)師，研究方向：地方病。意見。本文特選取2014年10月-2015年10月期間到我院進(jìn)行體檢的432例健康人群作為研究對(duì)象采用細(xì)菌培養(yǎng)法和普通PCR法檢測技術(shù)，獲得良好的檢出率，現(xiàn)報(bào)道如下。

收稿日期：（2015-12-15）

Bacterial culture method combined detection of neisseria meningitidis epidemic of clinical research

ZHAO Can
HeNan province Zhoukou people's hospital of six，466000

［Abstract］Objective To explore the bacterial culture method combined detection of epidemic Neisseria meningitidis clinical effect.Methods The study object of this article were selected from October 2014 and 2015 in October voluntarily participate in the study of 432 cases of healthy population of epidemic Neisseria meningitidis samples，on all subjects by normal PCR detection technology and the traditional bacterial culture method，analysis of the test results. Results Using pure bacterial culture method in subjects with 267 cases，detected a total of 7 strains of Neisseria meningitidis，2 strains of group B，1 strain x group，2 strains of group C，2 copies of clustering of epidemic cerebrospinal meningitis strains appeared in the serum.By bacterial culture method and conventional PCR of 165 patients，which were detected in 12 strains of Neisseria meningitidis，detection of 5 strains of group B，3 strains of group x，2 strains of group C，1 strains of serogroup W135，clustering phenomenon does not exist.Conclusion In the detection of epidemic Neisseria meningitidis application general PCR detection technology and the traditional bacterial culture method has significant effect，can effectively improve the detection rate and laboratory testing capabilities of Neisseria meningitidis，worthy of application and promotion.

［Key words］Bacterial culture method；Meningitis；Neisseria