卵巢癌患者血清腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物CD133和miR-145的臨床價(jià)值

王　丹，王　莉，王治潔

(1.同濟(jì)大學(xué)醫(yī)學(xué)院，上海 200092；2.上海市第八人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，上海 200235；3.撫順市中心醫(yī)院婦科，遼寧 撫順 116300)

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卵巢癌患者血清腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物CD133和miR-145的臨床價(jià)值

王丹1,2，王莉3，王治潔2

(1.同濟(jì)大學(xué)醫(yī)學(xué)院，上海 200092；2.上海市第八人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，上海 200235；3.撫順市中心醫(yī)院婦科，遼寧 撫順 116300)

[摘要]目的觀察卵巢癌患者血清CD133和miR-145的表達(dá)及其對(duì)預(yù)后的影響。方法選擇2010年1月至2014年6月在同濟(jì)大學(xué)醫(yī)學(xué)院、上海市第八人民醫(yī)院和撫順中心醫(yī)院手術(shù)的卵巢癌患者84例為卵巢癌組；良性腫瘤手術(shù)的患者30例為對(duì)照組。用qRT-PCP的方法測(cè)定血清CD133和miR-145相對(duì)表達(dá)量，分析CD133和miR-145表達(dá)量與年齡、腫瘤直徑、病理類型、分化程度、CA125水平和是否轉(zhuǎn)移分期的關(guān)系。結(jié)果卵巢癌患者的血清CD133相對(duì)表達(dá)明顯高于對(duì)照組(t=5.34，P<0.01)，治療后明顯降低(t=8.25，P<0.01)；而miR-145相對(duì)表達(dá)量明顯低于對(duì)照組(t=5.06，P<0.01)，治療后明顯升高(t=10.96，P<0.01)。卵巢癌患者血清CD133和miR-145表達(dá)量與年齡、腫瘤直徑和病理類型無(wú)明顯的相關(guān)性(t/F值為0.03～0.93，均P>0.05)，血清CD133和miR-145表達(dá)量與腫瘤分化程度、CA125水平、淋巴轉(zhuǎn)移和FIGO分期呈明顯的相關(guān)性(t/F值為2.01～28.96，均P<0.05)。術(shù)后隨訪發(fā)現(xiàn)CD133高表達(dá)組的1年復(fù)發(fā)率為76.79%，明顯高于低表達(dá)組的42.86%(χ2=8.06，P<0.05)。miR-145高表達(dá)組的1年復(fù)發(fā)率為43.59%，明顯低于低表達(dá)組的84.44%(χ2=13.67，P<0.05)。結(jié)論CD133在卵巢癌患者的血清呈高表達(dá)，而miR-145呈低表達(dá)，兩者參與了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，兩者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)于診斷和評(píng)估預(yù)后具有重要的臨床價(jià)值。

[關(guān)鍵詞]卵巢癌；CD133；miR-145；診斷；預(yù)后

卵巢癌是婦科的常見(jiàn)腫瘤，其死亡率為婦科腫瘤的首位，由于其位置較深，起病較為隱匿，缺乏特異性的診斷，5年生存率較低[1]。近年來(lái)研究表明腫瘤干細(xì)胞是腫瘤發(fā)生發(fā)展的根源。CD133是腫瘤干細(xì)胞的常用標(biāo)記物，與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展具有密切聯(lián)系[2]。另一類標(biāo)記物微小RNA(micro RNA，miRNA)參與多種腫瘤發(fā)生發(fā)展，檢測(cè)miRNA對(duì)腫瘤診斷和預(yù)后具有重要意義[3]。miR-145與卵巢癌的診斷和預(yù)后是否具有聯(lián)系尚無(wú)定論。本組研究對(duì)卵巢癌患者血清CD133和miR-145的檢測(cè)，探討兩者與卵巢癌的相關(guān)性，為卵巢癌的早期診斷和治療提供理論依據(jù)。

1資料與方法

1.1臨床資料

選擇2010年1月至2014年6月在同濟(jì)大學(xué)醫(yī)學(xué)院、上海市第八人民醫(yī)院和撫順中心醫(yī)院手術(shù)的卵巢癌患者84例，為卵巢癌組。所有患者均被病理所證實(shí)，平均年齡61.45±9.56(45～80)歲，≥60歲51例，<60歲33例，病理類型：漿液性腺癌37例，黏液性腺癌29例，內(nèi)膜樣腺癌15例和其他類型3例。CA125≥200(IU/mL)30例和<200(IU/mL)54例。按照國(guó)際婦科聯(lián)盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO)分期分為Ⅰ期18例，Ⅱ期11例，Ⅲ期46例和Ⅳ期9例。根據(jù)所有的患者均獲得完全隨訪資料，且在術(shù)后30d內(nèi)未出現(xiàn)患者死亡；腫瘤的最大直徑不超過(guò)10cm；無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；術(shù)中經(jīng)病理冰凍切片證實(shí)未見(jiàn)腫瘤殘留。選擇同期在上海市第八人民醫(yī)院因良性腫瘤手術(shù)的患者約30例，為對(duì)照組，平均年齡60.94±10.32(45～80)歲。兩組患者入組時(shí)均獲得患者同意，經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)通過(guò)。兩組的年齡等一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1血液標(biāo)本的保存

所有患者術(shù)前2～3天和術(shù)后1個(gè)月，采集外周靜脈血約3mL，離心收集血清放置在-80℃的冰箱中待測(cè)。

1.2.2CD133和miR-145的測(cè)定

抽提細(xì)胞總RNA。根據(jù)目標(biāo)基因的mRNA序列，按照引物設(shè)計(jì)的原則，用設(shè)計(jì)軟件primer express 3.0設(shè)計(jì)并合成qPCR檢測(cè)引物及探針。以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板，在實(shí)時(shí)定量PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增。采用相對(duì)定量的方法對(duì)miRNA進(jìn)行相對(duì)量表達(dá)進(jìn)行計(jì)算，以2-△△CT法，分析基因相對(duì)表達(dá)量。所有的操作均嚴(yán)格按照試劑盒操作。

1.2.3觀察指標(biāo)

觀察卵巢癌組和對(duì)照組血清CD133和miR-145相對(duì)表達(dá)量，與年齡、腫瘤直徑、病理類型、分化程度、CA125水平、是否轉(zhuǎn)移及與FIGO分期的關(guān)系；卵巢癌患者術(shù)前術(shù)后血清CD133和miR-145相對(duì)表達(dá)量的變化及與預(yù)后的關(guān)系。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1卵巢癌患者血清CD133和miR-145表達(dá)的變化

卵巢癌患者的血清CD133相對(duì)表達(dá)為8.26±2.73，明顯高于對(duì)照組的5.38±1.88，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.34，P<0.01)；而miR-145相對(duì)表達(dá)量為4.39±1.66，明顯低于對(duì)照組的6.18±1.67，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.06，P<0.01)。

2.2卵巢癌患者血清CD133和miR-145表達(dá)量與臨床病理特征的關(guān)系

卵巢癌患者血清CD133和miR-145表達(dá)量與年齡，腫瘤直徑和病理類型無(wú)明顯的相關(guān)性(均P>0.05)，血清CD133和miR-145表達(dá)量與腫瘤分化程度、CA125水平、淋巴轉(zhuǎn)移和FIGO分期呈明顯的相關(guān)性(均P<0.05)，見(jiàn)表1。

臨床病理特征例數(shù)(n)血清CD133表達(dá)量t/FP血清miR-145表達(dá)量t/FP年齡0.170.860.310.76 ≥60歲518.22±2.814.35±1.81 <60歲338.32±2.194.46±1.25腫瘤直徑0.540.590.930.36 ≥3cm478.38±2.494.25±1.57 <3cm378.11±1.924.58±1.68病理類型0.031.020.230.88 漿液性腺癌378.18±2.564.54±1.34 黏液性腺癌298.32±2.084.26±1.78 內(nèi)膜樣腺癌158.34±1.974.31±1.45 其他類型38.28±2.184.28±1.67腫瘤分化程度12.270.0022.390.00 高136.25±2.186.43±1.28 中277.71±2.764.82±1.76 低449.19±1.873.53±1.58CA125(IU/mL)4.260.002.010.04 ≥200309.74±1.763.87±1.56 <200547.44±2.654.68±1.87是否轉(zhuǎn)移6.090.002.4500.02 是3710.72±2.173.72±1.46 否477.44±2.654.62±1.82FIGO分期10.190.0028.960.00 Ⅰ185.89±2.872.27±1.28 Ⅱ117.34±1.813.72±1.67 Ⅲ468.82±2.654.68±1.56 Ⅳ911.26±2.188.00±1.73

2.3卵巢癌除術(shù)前后血清CD133和miR-145表達(dá)水平的變化

卵巢癌患者的血清術(shù)前CD133和miR-145相對(duì)表達(dá)為8.90±2.46和4.39±1.66，治療后CD133的相對(duì)表達(dá)量為5.76±2.18較治療前明顯降低(t=8.25，P<0.01)，而miR-145相對(duì)表達(dá)為6.86±1.23，較治療前出現(xiàn)明顯的升高(t=10.96，P<0.01)。

2.4術(shù)前卵巢癌患者血清miR-224和miR-145表達(dá)量與卵巢癌患者預(yù)后的關(guān)系

術(shù)后隨訪平均時(shí)間為26.83±7.92(6～48)月，按照術(shù)前的卵巢癌患者血清CD133和miR-145相對(duì)表達(dá)量的平均值，將卵巢癌患者分為高表達(dá)組和低表達(dá)組。血清CD133高表達(dá)組為56例，其1年復(fù)發(fā)率為76.79%(43/56)，低水平表達(dá)組為28例，其1年復(fù)發(fā)率為42.86%(12/28)，高表達(dá)的復(fù)發(fā)率明顯高于低表達(dá)組(χ2=8.06，P<0.05)。血清miR-145高表達(dá)39例，其1年復(fù)發(fā)率為43.59%(17/39)，低表達(dá)為45例，1年復(fù)發(fā)率為84.44%(38/45)，低表達(dá)組的1年復(fù)發(fā)率明顯高于高表達(dá)組(χ2=13.67，P<0.05)。

3討論

3.1血清CD133的表達(dá)在卵巢癌患者中的臨床價(jià)值

本組研究結(jié)果表明，卵巢癌組的血清CD133相對(duì)表達(dá)量明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，同時(shí)發(fā)現(xiàn)CD133血清相對(duì)表達(dá)量與腫瘤的分化程度具有明顯相關(guān)性(P<0.05)，腫瘤的分化程度越低，血清的CD133水平表達(dá)越高；同時(shí)還發(fā)現(xiàn)與卵巢癌患者的淋巴轉(zhuǎn)移具有明顯的相關(guān)性(P<0.05)，出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的患者，血清的CD133表達(dá)水平也就越高；與腫瘤分期也具有明顯的相關(guān)性(P<0.05)，腫瘤的分期越高，患者血清表達(dá)量也就越高。說(shuō)明CD133是卵巢癌患者評(píng)價(jià)腫瘤惡性程度和預(yù)后的重要指標(biāo)，對(duì)于早發(fā)現(xiàn)卵巢癌，評(píng)估卵巢癌的病情具有重要意義。本研究實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，CD133陽(yáng)性的患者其1年復(fù)發(fā)率明顯高于陰性的患者(P<0.05)，說(shuō)明CD133是卵巢癌重要的預(yù)后指標(biāo)。與CD133陽(yáng)性卵巢癌的功能特性具有內(nèi)在聯(lián)系，現(xiàn)已知CD133陽(yáng)性的細(xì)胞有利于脈管系統(tǒng)的形成，參與新生血管的生成，對(duì)卵巢癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，增殖，浸潤(rùn)，轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的過(guò)程中具有重要的意義，越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)表明CD133可能成為腫瘤干細(xì)胞的特異性標(biāo)記物，CD133表達(dá)的卵巢癌更具有增殖和可能形成能力，并且與腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化有關(guān)[4]。本組研究還發(fā)現(xiàn)CD133表達(dá)量與血清CA125水平具有明顯的正相關(guān)性(P<0.05)，大量的研究結(jié)果證實(shí)CA125與卵巢癌的早期發(fā)現(xiàn)和預(yù)后監(jiān)測(cè)中具有重要意義，而本組發(fā)現(xiàn)血清CD133的檢測(cè)與CA125具有明顯的聯(lián)系(P<0.05)，CD133可能成為早期發(fā)現(xiàn)卵巢癌的腫瘤標(biāo)記物，并成為評(píng)估病情和估計(jì)預(yù)后的重要指標(biāo)，其確切的相關(guān)性需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。

3.2血清miR-145的表達(dá)在卵巢癌患者中的臨床價(jià)值

本組研究結(jié)果表明，卵巢癌患者血清表達(dá)miR-145水平明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。miR-145最早在結(jié)腸癌中發(fā)現(xiàn)低表達(dá)，隨后在其他組織中也發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)明顯的下調(diào)如卵巢癌，前列腺癌，肺癌和乳腺癌等[5-6]。本組研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，miR-145表達(dá)與腫瘤的分化程度，腫瘤分期和腫瘤是否有淋巴轉(zhuǎn)移具有明顯的相關(guān)性(P<0.05)，腫瘤的分化程度越高，分期越早和淋巴結(jié)未發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者血清表達(dá)miR-145相對(duì)水平較高，故miR-145表達(dá)是卵巢癌的保護(hù)因素，與文獻(xiàn)報(bào)道類似[7]。本研究還發(fā)現(xiàn)miR-145表達(dá)水平與CA125水平呈明顯負(fù)相關(guān)，而CA125為卵巢癌非特異性的腫瘤指標(biāo)，故 miR-145有可能同樣成為卵巢癌的腫瘤指標(biāo)。現(xiàn)已知miRNA是一類高度保守的非編碼單鏈小分子RNA，廣泛存在大多數(shù)的真核細(xì)胞中。在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要的作用，對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展多個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行調(diào)節(jié)，參與細(xì)胞增殖，分化，侵襲和轉(zhuǎn)移等過(guò)程[8-9]。因此推測(cè)miR-145作為一種抑癌基因，在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，可能作為新的治療靶點(diǎn)在卵巢癌的治療中發(fā)揮重要作用。本組研究發(fā)現(xiàn)miR-145表達(dá)低的卵巢癌患者的1年復(fù)發(fā)率明顯高于表達(dá)高的患者，說(shuō)明miR-145的表達(dá)與卵巢癌具有明顯的相關(guān)性。故miR-145調(diào)控著卵巢癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和侵襲，并影響卵巢癌的預(yù)后，推測(cè)miR-145可能作為卵巢癌新的標(biāo)記物作為卵巢癌早期診斷和預(yù)后的評(píng)估。

總之，CD133在卵巢癌患者的血清呈高表達(dá)，而miR-145呈低表達(dá)，兩者參與了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，兩者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)于診斷和評(píng)估預(yù)后具有重要的臨床價(jià)值。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Cui L,Kwong J,Wang C C.Prognostic value of circulating tumor cells and disseminated tumor cells in patients with ovarian cancer:a systematic review and meta-analysis[J].J Ovarian Res,2015,8:38.

[2]支小改,吳曉慶,謝靜燕,等.腫瘤干細(xì)胞在卵巢癌治療中的進(jìn)展[J].中國(guó)婦幼健康研究.2014,25(4):706-708.

[3]Wuerkenbieke D,Wang J,Li Y,etal.miRNA-150 downregulation promotes pertuzumab resistance in ovarian cancer cells via AKT activation[J].Arch Gynecol Obstet,2015,292(5):1109-1116.

[4]Zhou Q,Chen A,Song H,etal.Prognostic value of cancer stem cell marker CD133 in ovarian cancer:a meta-analysis[J].Int J Clin Exp Med,2015,8(3):3080-3088.

[5]劉龍浩,魏莎莉,余秋波,等.miR-145對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖和侵襲的影響[J].解剖學(xué)雜志,2014,37(3):289-292.

[6]Cui S Y, Wang R, Chen L B.MicroRNA-145: a potent tumour suppressor that regulates multiple cellular pathways[J]. J Cell Mol Med,2014,18(10):1913-1926.

[7]Zhu X,Li Y,Xie C,et al.miR-145 sensitizes ovarian cancer cells to paclitaxel by targeting Sp1 and Cdk6[J].Int J Cancer,2014,135(6):1 286-1 296.

[8]Zhang Z,Zhou B,Gao Q,etal.A polymorphism at miRNA-122-binding site in the IL-1α 3'UTR is associated with risk of epithelial ovarian cancer[J].Fam Cancer,2014,13(4):595-601.

[9]Gu Y,Zhang M,Peng F,etal.The BRCA1/2-directed miRNA signature predicts a good prognosis in ovarian cancer patients with wild-type BRCA1/2[J].Oncotarget,2015,6(4):2397-2406.

[專業(yè)責(zé)任編輯：張忠明]

[收稿日期]2015-09-24

[基金項(xiàng)目]上海市徐匯區(qū)衛(wèi)生局醫(yī)學(xué)科研課題青年資助項(xiàng)目(編號(hào)：SHXp01207)

[作者簡(jiǎn)介]王丹(1980-)，女，主治醫(yī)師，主要從事卵巢癌的基礎(chǔ)和臨床研究。

[通訊作者]王治潔，主任醫(yī)師。

doi:10.3969/j.issn.1673-5293.2016.04.015

[中圖分類號(hào)]R711.7

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1673-5293(2016)04-0460-03

Clinical significance of serum tumor stem cell marker CD133 and miR-145 in patients with ovarian cancer

WANG Dan1,2, WANG Li3, WANG Zhi-jie2

(1.Medical College of Tongji University, Shanghai 200092, China; 2.Department of Obstetrics and Gynecology,Shanghai Eighth People’s Hospital, Shanghai 200235, China; 3.Department of Gynecology,Liaoning Fushun Central Hospital, Liaoning Fushun 116300, China)

[Abstract]Objective To observe the expressions of serum CD133 and miR-145 in patients with ovarian cancer and their impact on prognosis. Methods From January 2010 to June 2014 totally 84 cases of ovarian cancer undergoing surgery in Medical College of Tongji University, Shanghai Eighth People’s Hospital or Fushun Central Hospital were selected in ovarian cancer group. Thirty cases of benign tumor were selected in control group. The serum expressions of CD133 and miR-145 were detected by qRT-PCP method, and the relationship between them and age, tumor size, histological type, degree of differentiation, CA125 level as well as metastasis were analyzed. Results The serum CD133 expression level in ovarian cancer group was significantly higher than that in the control group (t=5.34, P<0.01) and significantly lowered after surgery compared with that before surgery (t=8.25, P<0.01). The expression level of miR-145 was significantly lower than that in the control group (t=5.06,P<0.01) and significantly increased after surgery than that before surgery (t=10.96, P<0.01). CD133 and miR-145 expressions in ovarian cancer patients were not significantly correlated with age, tumor size and histological type (t/F value ranged 0.03-0.93, all P>0.05), but they were obviously correlated with tumor differentiation, CA125 level, lymph node metastasis and FIGO stage (t/F value ranged 2.01-28.96, all P<0.05). Postoperative follow-up revealed that the 1-year recurrence rate was 76.79% in patients with high expression of CD133, which was significantly higher than 42.86% in patients with low expression (χ2=8.06,P<0.05). In patients with high expression of miR-145 1-year recurrence rate was 43.59%, which was significantly lower than 84.44% in those with low expression (χ2=13.63,P<0.05).Conclusion The serum expression of CD133 is high but miR-145 is low in patients with ovarian cancer. They both involve in the development and progression of ovarian cancer, and combining detection of them is of great clinical significance in diagnosis and assessment of prognosis.

[Key words]ovarian cancer; CD133; miR-145; diagnosis; prognosis