ZEB1在散發性伯基特淋巴瘤中的表達及意義

張守華　　黃慧　　徐紅艷　　吳艷　　曾松濤　　黃傳生　　楊文萍★

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ZEB1在散發性伯基特淋巴瘤中的表達及意義

張守華1，2黃慧1徐紅艷1吳艷1曾松濤1黃傳生3楊文萍1★

［摘要］目的探討ZEB1表達與散發性伯基特淋巴瘤（Burkitt lymphoma，BL）臨床病理參數之間的關系。方法收集33例BL患者臨床病理資料，免疫組化檢測Bcl?6、MUMl、ZEB1、E?鈣粘蛋白和N?鈣粘蛋白的表達，原位雜交檢測EB病毒編碼RNA（epstein?barr virus RNA，EBER）。結果33例BL 中Bcl?6、MUMl、ZEB1和EBER陽性率分別為90.9%（30例）、21.2%（7例）、42.4%（14例）、30.3%（10例）。所有病例均不表達E?鈣粘蛋白和N?鈣粘蛋白。ZEB1表達與臨床分期、MUMl表達和生存狀態無關（P>0.05），與Bcl?6和EBER表達也無統計學意義（P=0.067、0.057）。結論BL不存在經典上皮間質轉化現象，ZEB1表達可能與EB病毒感染有關，其具體機制有待進一步研究。

［關鍵詞］伯基特淋巴瘤；免疫組織化學；ZEB1蛋白

伯基特淋巴瘤（Burkitt lymphoma，BL）是兒童最常見的淋巴瘤［1］，雖然治愈率逐步提高，但仍有少部分患者復發而死亡［2］，因此了解其發病機制將有助于開展靶向治療。轉錄因子ZEB1與上皮間質轉化（epithelial?to?mesenchymal transition，EMT）有關，在多種腫瘤中表達，與預后有關［3］，其在彌漫大B細胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma，DLBCL）和套細胞淋巴瘤（mantle cell lymphoma，MCL）中已有報道［4?5］，與BL臨床病理參數之間的關系不清楚。本實驗收集33例BL患者臨床資料，應用免疫組化檢測Bcl?6、MUMl、ZEB1、E?鈣粘蛋白和N?鈣粘蛋白的表達，原位雜交檢測EB病毒編碼RNA （epstein?barr virus RNA，EBER），探討ZEB1表達與散發性BL臨床病理參數之間的關系。

1　資料與方法

1.1病例來源

收集江西省兒童醫院病理科和江西省腫瘤醫院病理科2000年1月至2013年12月術后進行化療的33例BL患者臨床病理資料，診斷標準參考第四版世界衛生組織淋巴造血系統腫瘤分類標準［6］。33例BL中男孩27例、女孩6例；就診年齡為2~13歲，平均年齡5.8歲；發病部位為腹腔（30例）、頸部淋巴結（2例）、睪丸（1例）；臨床分期為Ⅰ+Ⅱ期（12例）、Ⅲ+Ⅳ期（16例）、未分期（5例）。采用電話或查閱病例形式進行隨訪，隨訪截止時間為2014年8月31日。

1.2免疫組化和原位雜交

免疫組化檢測采用鏈霉菌抗生物素蛋白?過氧化物酶連結法（streptavidin?perosidase，SP），Bcl?6、 MUMl、ZEB1、E?鈣粘蛋白和N?鈣粘蛋白表達試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。根據Bcl?6和MUMl的表達，將BL分為生發中心型（germinal center，GC）（Bcl?6+/MUMl?）、晚生發中心型（late?GC）（Bcl?6+/MUMl+）、后生發中心型（post?GC）（Bcl?6-/MUMl+）和套細胞樣型（mantle cell?like）（Bcl?6-/MUMl-）［7］。EB病毒編碼RNA（EB?ER）原位雜交檢測試劑購自福建泰普國際生物學集團有限公司。操作按照說明書進行，當腫瘤陽性細胞>30%時判斷為陽性。

1.3統計學方法

應用SPSS 17.0統計學分析軟件，率的比較采用c2檢驗，不滿足c2檢驗時用Fisher確切概率法。

2　結果

2.1隨訪結果

33例BL患者隨訪時間為4~120個月，其中生存27例、死亡6例（均為Ⅲ或Ⅳ期，病例4和5未完整切除且未做骨髓穿刺）（表1）。

表1　6例死亡患者的臨床資料和免疫表型及EBV感染狀態Table 1　Clinical data，immunotype and EBV infect status in 6 died cases

2.2免疫組化和原位雜交結果

33例BL中腫瘤細胞Bcl?6（圖1）、MUMl（圖2）、ZEB1（圖3）和EBER（圖4）陽性率分別為90.9%（30例）、21.2%（7例）、42.4%（14例）、30.3% （10例）。所有病例均不表達E?鈣粘蛋白和N?鈣粘蛋白。根據Bcl?6和MUMl的表達，生發中心型24例、晚生發中心型6例、后生發中心型1例和套細胞樣型2例。ZEB1表達與臨床分期、MUMl表達和生存狀態無關（P>0.05），與Bcl?6和EBER表達也無統計學意義（P=0.067、0.057）。6例死亡患者的臨床資料和免疫表型及EBV感染狀態見表1。ZEB1表達與臨床病理參數之間的關系見表2，因有5例無臨床分期而未納入統計分析。

3　討論

惡性淋巴瘤發病率占兒童腫瘤第3位［8］，伯基特淋巴瘤為主要病理學類型，大約占兒童非霍奇金淋巴瘤（non?Hodgkin lymphoma，NHL）的30%~ 50%［6］，其特征是惡性度高、進展快、具有高度的侵襲性，常伴有中樞神經系統及骨髓的累及；傳統治療方案多采用高強度的化療，但骨髓抑制及毒副作用常導致治療失敗。因此，亟待闡明高度侵襲性的分子調控機制，探尋新的治療策略。EMT是指上皮細胞在特定的生理與病理情況下失去極性和細胞間的連接性，向具有間質表型細胞轉化的現象，促使細胞獲得較強侵襲能力，同時EMT也被認為是影響腫瘤化療療效的一個新的重要機制［9］。ZEB1是ZEB轉錄因子家族一員，含有2個鋅指結構簇和一個同源結構域其通過與E?cadherin啟動子區保守的E2盒結合，抑制E?cadherin的表達，從而促進EMT的發生［10］。Lemma等［4］研究發現EMT相關轉錄因子ZEBl、Twist和Slug在DLB?CL中存在異常表達，且與預后有關；同時有學者［5］證實在MCL中ZEB1激活增殖和抗凋亡基因，抑制促凋亡基因，與腫瘤細胞的侵襲性及化療耐藥有關。早期的研究也證明ZEB在淋巴細胞造血細胞的生成和功能成熟起著重要的作用［11］，由此可見在淋巴造血系統腫瘤中可能存在EMT（樣）的調控機制，ZEB起著關鍵作用。我們對33例BL進行研究，發現中ZEB1在BL中的陽性表達率為42.4% （14例），所有病例均不表達E?鈣粘蛋白和N?鈣粘蛋白。因此，我們推測在BL中可能不存在經典的EMT現象，是否與內皮間質轉化（endothelial?mes?enchymal transition，EndMT）有關有待進一步研究。

表2　ZEB1表達與臨床病理參數之間的關系（例）Table 2　The relationship between ZEB1 expression and clinicopathologic parameters（case）

ZEB1的表達與多種腫瘤預后有關，然而其在不同的腫瘤中的作用與表達部位有關，如在DLB?CL中，ZEB1表達于腫瘤細胞核、內皮細胞和組織細胞中，無細胞質陽性病例，核強陽性者預后較弱陽性者差［4］。在食管鱗狀細胞癌中，ZEB1在腫瘤細胞核、細胞質和腫瘤間質中均有表達，細胞質ZEB1弱陽性者預后更好［12］。本實驗也發現，ZEB1除了表達于腫瘤細胞外，在血管內皮細胞和間質中的一些細胞也呈現陽性。遺憾的是，本組未發現ZEB1的表達部位和表達強度與腫瘤預后有關，可能與病例較少或化療方案不統一有關，有待積累更多病例來闡述ZEB1在BL中的表達意義。

Bcl?6和MUMl是腫瘤細胞起源的標記物，在DLBCL中Bcl?6和MUMl表達與預后的關系較大。有學者將BL分為生發中心型、晚生發中心型、后生發中心型和套細胞樣型。雖然Bcl?6和MUMl表達與BL的預后關系不明顯［2］，但本實驗發現3例Bcl?6陰性BL均表達ZEB1，其意義有待進一步研究。

BL中存在與EBV相關的miRNA?127表達［13］，同時存在Wnt信號通路的異常［14］。ZEB受EBV相關miRNAs的調控，在EBV陽性鼻咽癌中，通過抑制miRNA?200a和miRNA?200b的表達，上調EMT介導靶基因ZEB1和ZEB2，使腫瘤細胞的侵襲性和轉移性增強［3］。本課題組前期工作中也證實了EBV感染相關的BL與miRNA?127、miRNA?155相關［15］，本實驗發現ZEB1表達與EBV感染狀態有一定的關系，BL中ZEB1的表達是否與miRNA?127、miRNA?200a或Wnt信號通路等有關有待進一步研究。

參考文獻

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2.江西省兒童醫院普外科，江西，南昌330006

3.江西省腫瘤醫院病理科，江西，南昌330029

★通訊作者：楊文萍，E?mail：ywp07912000@163.com

基金項目：江西省衛生和計劃生育委員會課題項目（20155603）；江西省自然科學基金（20132BAB205047）

作者單位：1.江西省兒童醫院病理科，江西，南昌330006

Expression of ZEB1 in sporadic Burkitt lymphoma and its clinical significance

ZHANG Shouhua1，2，HUANG Hui1，XU Hongyan1，WU Yan1，ZENG Songtao1，HUANG Chuansheng3，YANG Wenping1★
（1.Department of Pathology，Children’s Hospital of Jiangxi Province，Nanchang，Jiangxi，China，330006；2.Department of General Surgery，Children’s Hospital of Jiangxi Province，Nanchang，Jiangxi，China，330006；3.Department of Pathology，Jiangxi Provincial Cancer Hospital，Nanchang，Jiangxi，China，330029）

［ABSTRACT］ObjectiveTo study the relationship between expression of ZEB1 and clinicopathologi?cal features of sporadic Burkitt lymphoma(BL).MethodsThe clinicopathological data of 33 patients with BL were retrospectively analyzed.The expressions of Bcl?6,MUMl,ZEB1,E?cadherin and N?cadherin were detected by immunohistochemistry and EBER by in situ hybridization.ResultsIn 33 cases,the positive rates of Bcl?6,MUMl,ZEB1 and EBER were 90.9%(30 cases),21.2%(7 cases),42.4%(14 cases)and 30.3%(10 cases) respectively,and negative for E?cadherin and N?cadherin.There were no significant differences between ZEB1 expression and clinical stage.Bcl?6,MUM1 and prognosis were poorly associated with EBV infection status(P= 0.057).ConclusionZEB1 expression is associated with EBV infection status.Its mechanism requires further study.

［KEY WORDS］Burkitt lymphoma;Immunohistochemistry;ZEB1 protein