銀杏葉提取物對MPTP誘導帕金森小鼠保護作用的研究

李金鳳，徐桂梅，張辰子，費　帆，楊　林，代路路，孫　俠，鄺少松

(1.廣東省醫學實驗動物中心,廣東 佛山　528248；2.增城市婦幼保健院，廣東 增城　511300)

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銀杏葉提取物對MPTP誘導帕金森小鼠保護作用的研究

李金鳳1，徐桂梅2，張辰子1，費帆1，楊林1，代路路1，孫俠1，鄺少松1

(1.廣東省醫學實驗動物中心,廣東 佛山528248；2.增城市婦幼保健院，廣東 增城511300)

【摘要】目的觀察銀杏葉提取物(ginkgo biloba extract，GBE)對1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(MPTP)誘導不同年齡段的帕金森(parkinson’s disease，PD)小鼠的防治作用。方法將8周齡及32周齡各60只C57BL/6小鼠隨機分為陰性組，模型組，GBE給藥高、中、低劑量組及陽性組，采用腹腔注射MPTP法制備PD動物模型，采用銀杏葉提取物進行灌胃治療。運用爬桿、懸掛和游泳實驗檢測小鼠肢體運動功能，采用分光光度法測定小鼠腦組織超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量，采用免疫組化法觀察小鼠大腦黑質酪氨酸羥化酶(TH)及紋狀體多巴胺轉運蛋白(DAT)陽性細胞數目的變化。結果(1)與陰性對照組比較，8周齡模型組小鼠運動功能得分、大腦GSH-Px活性、黑質TH陽性細胞及紋狀體DAT陽性細胞平均光密度值均顯著下降，腦組織MDA含量顯著升高，說明PD模型復制成功。與模型組比較，銀杏葉提取物給藥組8周齡小鼠運動功能得分、SOD與GSH-Px活性、黑質TH陽性細胞平均光密度值均顯著提高，MDA含量顯著下降。(2)與陰性對照組比較，32周齡模型組小鼠運動功能得分、黑質TH陽性細胞以及紋狀體DAT陽性細胞平均光密度值均顯著下降，SOD與GSH-Px活性降低，腦組織MDA含量升高，說明模型復制成功。與模型組比較，銀杏葉提取物給藥組32周齡小鼠運動功能得分、SOD活性、黑質TH及紋狀體DAT陽性細胞平均光密度值均顯著提高，腦組織MDA含量顯著下降。結論銀杏葉提取物對MPTP誘導的不同年齡段PD小鼠有一定的防治作用。

【關鍵詞】銀杏葉提取物；帕金森病；MPTP；氧化應激；神經元

帕金森病(parkinson’s disease，PD)是一種慢性神經系統退行性疾病，以中腦黑質多巴胺能神經元選擇性丟失為特征，進而導致紋狀體多巴胺水平降低，引發一系列典型癥狀如震顫、肌肉強直和運動障礙等[1]。銀杏葉提取物 (ginkgo biloba extract，GBE)主要有效成分為黃酮類和萜類內酯化合物，藥理研究表明它具有很好的神經保護作用[2-3]。本實驗以MPTP制備不同年齡段的PD小鼠模型，觀察銀杏葉提取物對模型小鼠學習記憶能力、抗氧化作用、黑質TH陽性神經元和紋狀體DAT陽性神經纖維變化的影響，探討銀杏葉提取物對MPTP誘導的不同年齡段的帕金森模型小鼠神經元保護的作用機制，為開發具有抗PD作用的天然藥物提供科學依據。

1材料和方法

1.1實驗動物

SPF級C57BL/6雄性小鼠，8周齡60只，體重18～22 g，32～36周齡60只，體重27～33g，由廣東省醫學實驗動物中心提供【SCXK(粵) 2013-0002】，飼養在廣東省醫學實驗動物中心SPF級動物實驗室【SYXK(粵)2013-0002】。實驗開始時，把8周齡及32周齡各60只小鼠隨機分為陰性組，模型組，銀杏葉提取物給藥高、中、低劑量組，陽性對照組6個組，每個年齡每組各10只。每日觀察動物一般狀態表現并記錄動物行為變化，每周記錄小鼠的體重。

1.2儀器與試劑

生物組織自動染色機(孝感宏業醫用儀器有限公司);石蠟切片機(德國Leica公司)；熒光病理圖像分析系統(日本Olympus公司);全波長酶標儀(美國Thermfisher公司);臺式高速離心機(德國Eppendorf股份有限公司);銀杏葉提取物滴劑(德國威瑪舒培博士藥廠);美多芭(多巴絲肼片)(上海羅氏制藥有限公司);1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶MPTP(廣州春嵐生物制品有限公司);多聚甲醛(天津市福晨化學試劑廠);超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)試劑盒(南京建成生物工程有限公司);其余試劑均為國產市售分析純。

1.3預處理及治療給藥方法

銀杏葉給藥組給予GBE灌胃治療，給藥濃度分別為高劑量組60 mg/kg、中劑量組40 mg/kg、低劑量組20 mg/kg[3-4]。陽性藥物對照組小鼠灌胃給予美多芭，給藥濃度為75 mg/kg[5]，模型組與陰性對照組小鼠灌胃生理鹽水。各組均按照0.1 mL/10g體重給藥，1次/d，連續12 d。從灌胃治療第8天起進行造模給藥，各組均于MPTP造模給藥后30 min內完成灌胃治療。

1.4造模給藥方法

采用腹腔注射MPTP的方法制備動物模型。GBE給藥組、陽性藥物對照組及模型組給予MPTP(30 mg/kg)[6]腹腔注射，注射量為0.1 mL/10g，1次/d連續7 d，制備PD小鼠模型，陰性組給予生理鹽水腹腔注射。

1.5行為學檢查

1.5.1爬桿試驗

將一直徑為25 cm的軟木小球固定于一根長50 cm粗1 cm的木桿頂端，木桿上纏上紗布以防打滑，然后將被測小鼠放到小球上，并記錄小鼠從小球上下來、小鼠爬完桿子上半部分、小鼠爬完桿子下半部分各段所用時間，然后按以下標準記分：3 s內完成上述某一動作的記3分；6 s內完成的記2分；超過6 s的記1分。每只小鼠測5次，每次檢測間隔3 min，記錄每只小鼠總得分情況，并作統計學分析。

1.5.2懸掛實驗

將小鼠懸掛于一水平電線上，如小鼠用兩后爪抓住電線則記3分，如用一后爪抓住電線則記2分，如果小鼠兩后爪均抓不住電線則記1分，每只小鼠測5次，每次檢測間隔3 min，最后記錄每只小鼠總得分情況，并作統計學分析。

1.5.3游泳試驗

將受試小鼠放入一個20×30×20 cm規格的水箱中，水溫為32～35℃，評分標準如下：在受試時間2 min內能連續不斷游泳者記3分，大部分時間游泳僅偶爾漂浮者記2.5分，漂浮時間占整個受試時間50%以上者記2分，偶爾游泳者記1.5分，偶爾用后肢游動并漂浮在一邊者記1分。每只小鼠測3次，每次檢驗間隔3 min，最后計算總得分情況，并作統計學分析。

1.6氧化應激指標檢測

行為檢測后，采用脫頸法迅速斷頭取腦，玻璃勻漿器制成10%腦組織勻漿，-80℃保存備用。實驗時用Bradford法定量蛋白，按試劑盒說明檢測腦組織中SOD、GSH-Px活性及MDA含量。

1.7免疫組織化學檢測

行為學檢測后各組小鼠斷頭處死，迅速取出大腦，一半迅速放入4%多聚甲醛中固定，常規制備石蠟切片，用于免疫組織化學染色；一半仔細分離皮層和海馬，-80℃保存，用于免疫組織化學檢測黑質TH陽性神經元和紋狀體DAT陽性神經纖維的變化。用低倍和高倍鏡觀察切片，陽性細胞為鏡下組織細胞結構清晰、細胞內有棕黃色沉著、染色明顯高于背景的細胞，用OLYMPUS BX41顯微鏡拍照。用HMIAS-2000高清晰度彩色醫學圖文分析系統分析TH、DAT的平均光密度值。

1.8 統計方法

2結果

2.1小鼠行為學表現

小鼠注射MPTP后立刻出現全身震顫、豎毛、尾僵直、步態不穩、活動能力減弱等癥狀，8周齡小鼠持續20～30 min后逐漸減輕，32周齡小鼠持續50～60 min后逐漸減輕，兩組年齡段的小鼠24 h后基本恢復正常。隨著給藥次數的增加，上述各種急性反應表現基本無太大變化，但24 h后32周齡小鼠活動能力減弱、四肢僵硬、反應遲緩的表現越來越明顯。

2.2小鼠肢體運動功能測定結果

如表2所示，與陰性對照組比較，兩個年齡段的模型組小鼠爬桿、懸掛和游泳實驗得分均顯著降低(P<0.05)，提示造模成功。在爬桿實驗中，8周齡GBE給藥組與陽性對照組、32周齡GBE低劑量組與陽性對照組小鼠的肢體協調能力均明顯提高(P<0.05，P<0.01)；在懸掛實驗中，兩個年齡段的GBE高劑組小鼠的懸掛能力均明顯增強(P<0.05，P<0.01)；在游泳實驗中，8周齡GBE低劑量組與陽性對照組小鼠游泳得分顯著提高(P<0.01)，32周齡GBE低劑量組、GBE中劑量組及陽性對照小鼠游泳得分顯著提高(P<0.05)。

2.3小鼠腦組織SOD、GSH-Px活性和MDA含量測定結果

如表3所示，與陰性對照組比較，8周齡模型組小鼠的GSH-Px活性顯著降低(P<0.01)，MDA含量明顯升高(P<0.05)。與模型組比較，8周齡GBE低劑量組小鼠GSH-Px活性顯著升高(P<0.05)，MDA含量降低，但沒有統計學意義；8周齡GBE中劑量組、陽性對照組小鼠SOD、GSH-Px活性均顯著升高(P<0.05，P<0.01)，而MDA含量明顯降低(P<0.05，P<0.01)。32周齡GBE中劑量組小鼠SOD、GPSH-Px活性有不同程度的提升，MDA含量明顯降低(P<0.01)；32周齡GBE高劑量組小鼠SOD活性顯著提高(P<0.05)，MDA含量明顯降低(P<0.01)。

2.4小鼠大腦黑質TH、紋狀體DAT的表達,

2.4.1黑質TH的表達結果

如表4所示，與陰性對照組比較，兩個年齡段模型組小鼠大腦黑質TH平均光密度值均顯著降低(P<0.01)，TH陽性細胞數顯著減少(圖1B、圖1H)。與模型組比較，8周齡GBE給藥組、陽性對照組小鼠大腦黑質TH平均光密度值均顯著升高(P<0.05，P<0.01)，TH陽性細胞數目顯著增加(圖1C-1F)；32周齡GBE高劑量組小鼠大腦黑質TH平均光密度值顯著升高(P<0.01)，TH陽性細胞數顯著增加(圖1L)，32周齡GBE低劑量組、GBE中劑量組及陽性對照組TH光密度值有所增加，但無統計學意義，TH陽性細胞數較模型組多(圖1I-1K)。

±s)

組別groupn爬桿實驗得分pole-climbingtestscore懸掛實驗得分hangingtestscore游泳實驗得分swimmingtestscore8周齡陰性對照組8weeksnegativegroup1027.20±6.887.20±6.377.95±0.808周齡模型組8weeksmodelgroup1021.30±4.95▲1.70±1.89▲7.10±1.58▲8周齡GBE低劑量組8weekslowdoseGBEgroup1026.60±6.15#4.44±4.338.17±0.75##8周齡GBE中劑量組8weeksmediumdoseGBEgroup1030.30±7.92##5.11±6.977.72±1.238周齡GBE高劑量組8weekshighdoseGBEgroup929.33±8.60##9.00±8.93##7.85±0.588周齡陽性對照組8weekspositivegroup835.63±8.42##5.33±3.678.39±0.49##32周齡陰性對照組32weeksnegativegroup1030.10±6.796.50±3.818.10±0.7032周齡模型組32weeksmodelgroup923.56±2.19▲1.44±1.01▲7.39±0.82▲32周齡GBE低劑量組32weekslowdoseGBEgroup534.80±5.31##3.20±1.648.40±0.42#32周齡GBE中劑量組32weeksmediumdoseGBEgroup827.88±6.984.38±2.628.38±0.52#32周齡GBE高劑量組32weekshighdoseGBEgroup627.67±2.256.43±2.51#8.21±0.4932周齡陽性對照組32weekspositivegroup631.83±5.64#5.57±2.648.50±0.50#

注：模型對照組與陰性對照組比較，▲P<0.05；GBE給藥組或陽性對照組與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01。

Note： MPTP group vs the control group,▲P<0.05; GBE group or positive control group vs MPTP group,#P<0.05，##P<0.01.

組別groupn1%腦勻漿SOD含量SODcontentof1%brainhomogenate(U/mL)10%腦勻漿GSH-Px含量GSH-Pxcontentof10%brainhomogenate(U/mgprot)1%腦勻漿MDA含量MDAcontentof1%brainhomogenate(nmol/mgprot)8周齡陰性對照組8weeksnegativegroup9124.07±8.2561.42±6.171.58±0.108周齡模型組8weeksmodelgroup10113.49±15.0451.23±7.22▲▲1.86±0.38▲8周齡GBE低劑量組8weekslowdoseGBEgroup9118.69±12.0759.79±7.65#1.74±0.418周齡GBE中劑量組8weeksmediumdoseGBEgroup8126.67±10.44#59.15±11.99#1.37±0.14##8周齡GBE高劑量組8weekshighdoseGBEgroup10125.07±11.2458.34±6.921.74±0.358周齡陽性對照組8weekspositivegroup8127.13±20.65#63.34±10.74##1.53±0.33#32周齡陰性對照組32weeksnegativegroup10125.03±13.5356.77±5.972.03±0.3932周齡模型組32weeksmodelgroup9116.60±18.9953.60±10.081.78±0.2632周齡GBE低劑量組32weekslowdoseGBEgroup5108.24±13.5758.57±6.071.49±0.1332周齡GBE中劑量組32weeksmediumdoseGBEgroup8127.07±10.2959.56±4.381.32±0.12##32周齡GBE高劑量組32weekshighdoseGBEgroup8130.89±17.27#59.05±11.271.33±0.17##32周齡陽性對照組32weekspositivegroup5120.32±3.7053.03±6.031.86±0.36

注：模型對照組與陰性對照組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；GBE給藥組或陽性對照組與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01。

Note： MPTP group vs the control group,▲P<0.05，▲▲P<0.01;GBE group or positive control group vs MPTP group,#P<0.05，##P<0.01.

2.4.2紋狀體DAT的表達結果

如表4所示，與陰性對照組比較，兩個年齡段模型組小鼠大腦紋狀體尾殼核DAT平均光密度值均顯著降低(P<0.05，P<0.01)，DAT陽性細胞顯著減少(圖2B、圖2H)。與模型組比較，8周齡GBE給要組與陽性對照組小鼠大腦紋狀體尾殼核DAT平均光密度值沒有統計學意義，DAT陽性細胞數增加不明顯(圖2C-2F)；32周齡GBE高劑量組小鼠大腦紋狀體尾殼核DAT平均光密度值顯著升高(P<0.05)，DAT陽性細胞數顯著增加(圖2L)，DAT陽性細胞數增加不明顯(圖2I-2K)。

3討論

PD是發病率僅次于阿爾茨海默病(alzheimer’s disease，AD)的好發于中老年人第二大神經退行性疾病，臨床常見癥狀有運動遲緩、靜止性震顫、肌強直和姿勢步態障礙。 MPTP是人工合成毒品的副產物，MPP+是其活性代謝產物，其可以選擇性抑制線粒體復合物Ⅰ，誘導氧化應激，導致細胞死亡[7]。MPTP誘導的C57BL/6小鼠是目前學術界廣泛運用并得到公認的研究PD的經典模型[8]。由于不同周齡的C57BL/6小鼠對于MPTP的敏感程度有明顯的差異[9]，為使實驗結果更具參考價值，本實驗選用了不同年齡段的小鼠作為研究對象。通過爬桿、懸掛和游泳實驗分別檢測8周齡和32周齡PD小鼠的運動協調功能，研究發現銀杏葉提取物(GBE)能夠顯著增強不同年齡段PD小鼠的肢體協調能力，推測其對PD的癥狀具有改善作用。

組別groupn黑質TH平均光密度值THmeanopticaldensityinsubstantialnigraparscompacta紋狀體尾殼核DAT平均光密度值DATmeanopticaldensityinstriatum8周齡陰性對照組8weeksnegativegroup100.588±0.0540.199±0.0688周齡模型組8weeksmodelgroup100.372±0.024▲▲0.081±0.007▲8周齡GBE低劑量組8weekslowdoseGBEgroup90.517±0.056##0.081±0.0048周齡GBE中劑量組8weeksmediumdoseGBEgroup80.527±0.068#0.084±0.0168周齡GBE高劑量組8weekshighdoseGBEgroup90.528±0.069##0.087±0.0178周齡陽性對照組8weekspositivegroup90.526±0.066##0.086±0.01932周齡陰性對照組32weeksnegativegroup100.559±0.0430.195±0.04232周齡模型組32weeksmodelgroup90.379±0.026▲▲0.082±0.015▲▲32周齡GBE低劑量組32weekslowdoseGBEgroup50.493±0.0390.081±0.01932周齡GBE中劑量組32weeksmediumdoseGBEgroup80.495±0.0640.113±0.03032周齡GBE高劑量組32weekshighdoseGBEgroup80.535±0.053##0.158±0.037#32周齡陽性對照組32weekspositivegroup60.468±0.0870.109±0.033

注：模型對照組與陰性對照組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；GBE給藥組或陽性對照組與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01。

Note： MPTP group vs the control group,▲P<0.05，▲▲P<0.01; GBE group or positive control group vs MPTP group,#P<0.05，##P<0.01.

注：A：8周齡陰性對照組；B：8周齡模型組；C：8周齡陽性對照組；D：8周齡GBE低劑量組；E：8周齡GBE中劑量組；F：8周齡GBE高劑量組； G：32周齡陰性對照組；H：32周齡模型組；I：32周齡陽性對照組；J：32周齡GBE低劑量組；K：32周齡GBE中劑量組；L：32周齡GBE高劑量組。 圖1　PD小鼠大腦黑質TH表達水平(標尺=50 μm)Note:A：8 weeks negative group；B：8 weeks model group；C：8 weeks positive group；D：8 weeks low dose GBE group；E：8 weeks medium dose GBE group；F：8 weeks high dose GBE group； G：32 weeks negative group；H：32 weeks model group；I：32 weeks positive group；J：32 weeks low dose GBE group；K：32 weeks medium dose GBE group；L：32 weeks high dose GBE group.Fig.1　TH expression in substantial nigra pars compacta of PD mice(Bar=50 μm)

注：A：8周齡陰性對照組；B：8周齡模型組；C：8周齡陽性對照組；D：8周齡GBE低劑量組；E：8周齡GBE中劑量組；F：8周齡GBE高劑量組； G：32周齡陰性對照組；H：32周齡模型組；I：32周齡陽性對照組；J：32周齡GBE低劑量組；K：32周齡GBE中劑量組；L：32周齡GBE高劑量組。 圖2　PD小鼠大腦紋狀體DAT表達水平(標尺=50 μm)Note:A：8 weeks negative group；B：8 weeks model group；C：8 weeks positive group；D：8 weeks low dose GBE group；E：8 weeks medium dose GBE group；F：8 weeks high dose GBE group； G：32 weeks negative group；H：32 weeks model group；I：32 weeks positive group；J：32 weeks low dose GBE group；K：32 weeks medium dose GBE group；L：32 weeks high dose GBE group.Fig.2　DAT expression in striatum of PD mice(Bar=50 μm)

已有研究表明，氧自由基與PD發病密切相關[10]，SOD及GSH-Px在清除自由基方面具有重要作用，其活性的降低會加劇自由基對神經的毒性作用[11]。MDA含量是反應氧自由基水平的重要指標，可間接反映細胞損傷的程度。本研究中顯示，銀杏葉提取物(GBE)給藥組小鼠的SOD、GSH-Px活性較模型組小鼠有不同程度的提高，MDA水平下降，提示GBE可能通過增加腦組織抗氧化酶的含量來提高機體的抗氧化能力，保護脂質免受病理性過氧化損傷，顯著改善MPTP誘導的帕金森病的氧化應激狀態。MDA測定結果顯示，相對于8周齡小鼠，GBE對32周齡小鼠的抗氧化能力改善更為顯著。

酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase，TH)是兒茶酚胺類神經遞質及多巴胺、去甲腎上腺素、腎上腺素生物合成過程所需的限速酶。大腦多巴胺能神經元可以從細胞外攝取酪氨酸，在胞漿內經TH催化形成左旋多巴，再經芳香族氨基酸脫羧酶催化形成多巴胺(dopamine，DA)。DA是一種兒茶酚胺類神經傳導物質，是用來幫助細胞傳送脈沖的化學物質，主要負責大腦的愉悅和獎賞，將興奮及開心的信息傳遞，在處理身體的學習、記憶、注意力、運動、新陳代謝中發揮重要作用。TH是DA能神經元的特有酶，染色陽性標志細胞存活，其TH陽性神經元數可直觀反映腦內DA含量[12]。本實驗兩個年齡段PD小鼠的TH免疫陽性染色結果均顯示，陰性對照組小鼠TH陽性細胞豐富，細胞胞體著色均勻，突起豐富，PD模型組小鼠TH陽性細胞數量呈明顯的丟失，銀杏葉提取物給藥組多巴胺能神經細胞沒有明顯的丟失，隨著給藥濃度的升高，陽性細胞數呈遞增趨勢，提示銀杏葉提取物減輕了MPTP對多巴胺能神經元的毒性作用，TH陽性細胞平均光密度值結果顯示，銀杏葉提取物對8周齡小鼠的治療效果更明顯。

DAT 是位于 DA 能神經元突觸前膜的一種膜蛋白分子，屬于 Na+/Cl-依賴性轉運蛋白，PD 患者腦內 DAT 水平的降低與 DA 能神經元減少呈正相關[13]。DAT能夠通過重攝取機制把DA重吸收進細胞，以確保DA不會不受限制的過多產生，DAT 的水平是DA能神經元最為特異的標記物，已成為診斷早期 PD的敏感指標[11]。本實驗結果顯示，模型組小鼠腦組織紋狀體內DAT平均光密度值顯著降低，DAT陽性細胞數明顯減少，而給予不同濃度的銀杏葉提取物治療后，其減少得到不同程度的抑制，并呈劑量依賴性，說明銀杏葉提取物能在一定程度上減輕MPTP對小鼠腦組織的病理損傷，DAT陽性細胞平均光密度值結果顯示，銀杏葉提取物對32周齡小鼠的治療效果更明顯。

本實驗中，銀杏葉提取物(GBE)顯著改善了 PD 小鼠的行為協調能力，顯著增強了PD小鼠抗氧化應激能力，明顯抑制了 MPTP 誘導的 TH 陽性細胞和 DAT 陽性細胞的減少，對 PD 有一定的神經保護作用。

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[13]Gonzalo E. The dopamine transporter proteome[J]. Journal of Neurochem，2006，97:3-10.

〔修回日期〕2015-10-21

[基金項目]廣東省中醫藥局課題項目(20122199);廣東省科技計劃項目(2013B060300033)。

[作者簡介]李金鳳(1986-)女，碩士，實習研究員，研究方向：實驗動物與動物實驗模型。 [通訊作者]鄺少松(1973-)女，碩士，高級獸醫師，研究方向：實驗動物藥理、毒理學研究。E-mail: kuangss@126.com。

【中圖分類號】R-332

【文獻標識碼】A

【文章編號】1671-7856(2016) 01-0046-07

doi:10.3969.j.issn.1671.7856. 2016.001.009

Protective effect of ginkgo biloba extract on mouse with parkinson’s disease induced by MPTP

LI Jin-feng1, XU Gui-mei2,ZHANG Chen-zi1, FEI Fan1, YANG Lin1, DAI Lu-lu1, SUN Xia1, KUANG Shao-song1

(1.Guangdong Medical Laboratory Animal Center, Guangdong Foshan 528248,China；2. Zengcheng maternal and Child Health Hospital，Guangdong Zengcheng 511300,China)

【Abstract】ObjectiveTo investigate the therapeutical effect of Ginkgo Biloba extract (GBE) on different ages of parkinsono Biloba e (PD) mice that induced by MPTP. MethodsSixty adult mice (8 weeks) and sixty older mice (32 weeks) were randomly divided into 6 groups: negative group, model group, positive group, high, medium and low dose GBE group. PD animal model were built through injecting with MPTP and then treated with different drugs accordingly. The limb motor function of mice were tested by using pole-climbing, hanging and swimming test. The activities of superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GSH-Px) and the content of malondial dehyde (MDA) in the brain tissue were measure using spectro photography. The number of positive neurons expressing tyrosine hydroxylase (TH) in substantial nigra pars compacta and dopamine transporters (DAT) in striatum were detected by using the method of immunohistochemistry. Results1. The motor function score, the activity of GSH-Px, and the mean optical density of TH and DAT in brain tissues of model group of 8 weeks significantly decreased compared with negative group, while the content of MDA was significantly raised, showing the model of PD was successfully established. The function score, the activities of SOD and GSH-Px, the mean optical density of TH and DAT in brain tissues of the GBE treatment group significantly raised compared with the model group, while the content of MDA was significantly decreased. 2. The motor function score, the activity of GSH-Px, and the mean optical density of TH and DAT in brain tissues of model group of 32 weeks significantly decreased compared with negative group, while the content of MDA was significantly raised, showing the model of PD was successfully established. The function score, the activities of SOD and GSH-Px, the mean optical density of TH and DAT in brain tissues of the GBE treatment group significantly raised compared with the model group, while the content of MDA was significantly decreased. ConclusionsThe preventive medication of GBE shows a protective effect on mice of different ages with PD induced by MPTP.

【Key words】Ginkgo biloba extract; Parkinson's disease; MPTP; Oxidative stress; Neuron