光合細菌對羅非魚免疫功能的影響

張可　齊遵利　戎海新

摘要：為評價光合細菌在羅非魚養殖過程中使用效果的生物學指標，本試驗設計在養殖羅非魚的水體里添加不同濃度的光合細菌，通過測定羅非魚酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）、谷草轉氨酶（AST）、谷丙轉氨酶（ALT）、溶菌酶（LZM）五種免疫酶活性指標，探討在養殖水體里添加光合細菌對羅非魚的免疫酶活性及生長性能的影響。結果表明：添加光合細菌的濃度為10⁴cfu/mL的魚血清的ACP活性顯著高于其他組，光合細菌的濃度為10⁵cfu/mL的魚血清的AKP活性顯著高于其他組，光合細菌的濃度為10³cfu/mL的魚血清AST活性顯著高于其他組，光合細菌的濃度為10⁴cfu/mL和105 cfu/mL添加組的魚血清ALT活性顯著高于其他組，光合細菌的濃度為10⁴cfu/mL的魚血清的LZM活性顯著高于其他組，且實驗組顯著高于對照組。為推廣光合細菌在羅非魚養殖過程中提高免疫功能提供了理論依據。

關鍵詞：光合細菌；羅非魚；免疫酶活性

1材料及方法

1.1試驗動物

本試驗以羅非魚為試驗對象，挑選體質健壯、體表無傷的羅非魚，平均每條羅非魚的重量為15g左右。

1.2試驗設計

本試驗于河北農業大學渤海校區實驗育苗室內進行，水族箱規格為100 cm×60 cm×50 cm，試驗前將水族箱和實驗所用器具用高錳酸鉀浸泡消毒24 h。水體體積為100 cm×60 cm×35 cm，并充分曝氣24 h后將魚放入水族箱中。共16個水族箱，每個水族箱里放25尾魚。待魚適應環境以后開始投喂飼料并正式試驗。

試驗分為5個處理組，每個試驗組設3個平行，每個水族箱中飼養25尾羅非魚，養殖水體分別添加濃度10³cfu/mL的光合細菌、10³cfu/mL的光合細菌、10⁴cfu/mL的光合細菌、10⁵cfu/mL的光合細菌、10⁴cfu/mL的光合細菌，對照組不添加光合細菌。

1.3日常管理

每天投食兩次，上午8：30、下午14：30各投喂一次，投喂量以多數魚不攝食為準。試驗期間不換水，每天上午清洗過濾棉。試驗期間定時觀察羅非魚的生長及健康狀況，定期往水體里添加菌以保持水體菌的濃度。

1.4試驗處理

實驗開始后，在實驗飼養的第30 d采樣，采樣時取其血液，用肝素鈉潤洗注射器后抽取2～3mL的血液，放置冰箱冷凍條件下12 h，然后離心，3 500 r/min離心15 min，取上清液待測。

免疫指標的測定為酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）、谷草轉氨酶（AST）、谷丙轉氨酶（ALT）、溶菌酶（LZM），均為南京建成生物工程研究所生產的試劑盒測定，具體操作按其說明書進行。采用SPSS19.0對數據進行統計分析，運用ANoVA單因素進行方差分析及Duncans多重比較對實驗所得出的結果進行顯著性檢驗，顯著水平為P<0.05。

2試驗結果

2.1水體添加光合細菌對羅非魚血清中酸性磷酸酶（AOP）活性的影響

添加光合細菌的濃度為10⁴cfu/mL的魚血清的ACP活性顯著高于其他組（P

2.2水體添加光合細菌對羅非魚血清中堿性磷酸酶（AKP）活性的影響

添加光合細菌的濃度為10⁵cfu/mL的魚血清的AKP活性顯著高于其他組（P<0.05），且實驗組顯著高于對照組。

2.3水體添加光合細菌對羅非魚血清中谷草轉氨酶（AST）活性的影響

添加光合細菌的濃度為10³cfu/mL的魚血清AST活性顯著高于其他組（P<0.05），且實驗組顯著高于對照組。

2.4水體添加光合細菌對羅非魚血清中谷丙轉氨酶（ALT）活性的影響

添加光合細菌的濃度為10⁴cfu/mL和10⁵cfu/mL添加組的魚血清ALT活性顯著高于其他組（P<0.05），且實驗組顯著高于對照組。

2.5水體添加光合細菌對羅非魚血清中溶菌酶（LZM）活性的影響

添加光合細菌的濃度為10⁴cfu/mL的魚血清的LZM活性顯著高于其他組（P<0.05），且實驗組顯著高于對照組。

3結論

酸性磷酸酶（ACP）是動物體內重要的調控酶，它可以直接參與血細胞的包囊和吞噬作用，并能幫助殺死及吞噬病原體。在整個實驗過程中，10⁴cfu/mL添加組中ACP的活性最高，且添加組明顯高于對照組，因此ACP可以作為評價動物免疫功能的指標。

堿性磷酸酶（AKP）普遍存在于動植物體內，是重要的調控酶，可直接參與磷酸基團的轉移與磷酸脂的代謝，可為ADP磷酸轉化形成ATP提供更多的必需無機磷酸，也是動物體內重要的解毒體系。可作為評價甲殼動物免疫功能的指標。在整個實驗過程中，10⁵cfu/mL添加組中ACP的活性最高，且添加效果最為明顯，因此ACP可以作為評價甲殼動物的免疫功能指標。

谷草轉氨酶（AST）是一種重要的氨基轉移酶，廣泛存在于動物組織細胞中。當血清中AST的活性升高或組織內AST的活性降低時，即表明動物機體的肝臟、心臟等內臟器官發生損傷。AST活性變化也是反映肝細胞受到損傷的主要敏感指標。在整個試驗階段，10³cfu/mL添加組的羅非魚血清中AST活性最高，顯著高于其他組（P<0.05），且實驗組顯著高于對照組。

谷丙轉氨酶（ALT）是催化谷氨酸與丙酮酸之間的轉氨作用，在肝臟內的活力最大的一種酶。存在于很多器官中，對肝臟的蛋白質代謝起到樞紐的作用，攝人的糖類、脂肪及其他營養物質經由轉氨基作用轉變為所需蛋白質，而轉氨基作用最重要的就是需要谷丙轉氨酶的催化作用。在整個試驗階段，10⁴cfu/mL和10⁵cfu/mL添加組的魚血清ALT活性顯著高于其他組（P<0.05），這兩個添加組無明顯差異（P>0.05），實驗組顯著高于對照組（P<0.01）。

溶菌酶（LZM）是一種堿性蛋白酶，廣泛存在于動物體內的某些淋巴組織和體液中。LZM活性的高低，可作為衡量水產動物免疫狀態的重要指標之一，在一定程度上也能反映出動物機體的非特異性體液免疫的狀態。當血清中LZM活性提高時，機體的免疫能力也會相應提高。在本試驗中，10⁴cfu/mL添加組魚血清的LZM活性最高，且實驗組的溶菌酶活性顯著高于對照組。