PTEN基因甲基化及其表達異常與胃癌的關系分析

陳倩倩　朱永剛　馮　麗

PTEN基因甲基化及其表達異常與胃癌的關系分析

陳倩倩朱永剛馮麗

【摘要】目的探討PTEN基因甲基化及其表達異常與胃癌的關系。方法從我院選取120例胃癌患者作為臨床研究對象。對患者PTEN基因甲基化及其表達異常情況進行分析，并探討PTEN基因甲基化以及PTEN基因表達異常與胃癌的關系。結果胃癌組織表達呈陽性的患者例數，多于陰性的患者例數，同時，癌旁正常組織表達呈陽性的患者少于陰性患者，差異具有統計學意義（P＜0.05）。結論胃癌患者PTEN基因和表達異常情況都與癌癥組織的啟動子區甲基化有較大關系，是患者胃癌發生和發展以及轉移的原因之一。

【關鍵詞】胃癌；PTEN基因甲基化；表達異常

Objective To probe into the relation between the methylation as well as the abnormal expression of the PTEN gene and gastric cancer.Methods 120 cases of patients with gastric cancer from our hospital were selected as the objects of clinical study.The methylation as well as the abnormal expression of the PTEN gene in patients was analyzed，and the relation between the methylation as well as the abnormal expression of the PTEN gene and the gastric cancer was discussed and investigated.Results Gastric cancer tissue expression positive in patients was significantly more than the negative patients，at the same time，the adjacent normal tissue expression positive was significantly less than the negative patients，the difference was significantly different（P＜0.05）. Conclusion The PTEN gene as well as its abnormal expression in gastric cancer patients was greatly related to the methylation in the promotor region of the gastric cancer tissue，which was one of the reasons accounting for the genesis，development and metastasis of gastric cancer in patients.

【Key words】Gastric cancer，PTEN gene methylation，Abnormal expression

臨床研究發現，胃癌發病有家族易感性，即同一家族中胃癌發病率高于散發人群，且發病年齡較輕，最近文獻將其稱之為“遺傳性癌癥綜合征”。人體內第十號染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白同源物基因PTEN是臨床癌癥治療研究中發現的首個具有磷酸酶活性的抑癌基因［1-2］。PTEN正常的表達情況下，腫瘤細胞在它的影響下無法正常生長，主要是由于腫瘤細胞在生長過程中會出現被動抑制性變化，從而導致腫瘤細胞的凋亡，同時PTEN還參與細胞周期的調控以及抑制細胞的粘附及腫瘤轉移的功能［3-4］。選取本院2011年6月～2014年6月的部分胃癌患者，對PTEN基因甲基化及其表達異常與胃癌的關系進行相關研究，現將研究過程報告如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

自2011年6月～2014年6月，在我院選取120例胃癌患者作為臨床研究對象，女性40例，男性80例，年齡在28～62歲，平均年齡為（40.23±18.95）歲，患者平均體質量為（56.82±9.56）kg，平均身高為（164.45±8.15）cm。120例患者中初中學歷及以下有40例，高中學歷55例，大專及以上學歷25例。所有患者均符合胃癌診斷標準，平均病程為（2.25±1.12）年。所有參與本次實驗的患者對本實驗項目有足夠的了解，均屬于自愿行為，同時簽署實驗相關自愿協議。為貫徹倫理學原則，在整個實驗進行過程中，所有患者均可以隨時退出。以上所有患者在一般資料方面，如性別、年齡和文化程度以及病程等差異無統計學意義（P ＞0.05），具有可比性。

1.2方法

具體方法為：首先切取患者癌癥組織標本和非癌癥組織標本，離體后立即放入液氮，然后放進-70℃的冷藏庫進行保存。免疫組化：PTEN單克隆抗體4℃過夜孵育，PBS沖洗3次，5 min/次。生物素標記的鼠抗人?gG室溫孵育20 min，PBS沖洗3次，5 min/次。滴加SABC室溫孵育20 min后PBS充分沖洗。DAB顯色，蘇木素染色，封片，光鏡下觀察［5］。PTEN異常甲基化檢測：兩份標本均使用蛋白酶K-苯酚抽提法抽提總DNA，然后對DNA進行純化，同時使用亞硫酸氫鹽修飾，最后進行聚合酶鏈式反應觀察。患者癌癥組織標本上游引物和下游引物確定后，擴增片段長度為71 bp。患者非癌癥組織標本DNA上游引物和下游引物確定后，擴增片段長度為162 bp。引物各為0.4μg，在94℃環境下放置5 min預變性，然后開始35個循環，循環為94℃30s-57℃30S-72℃30 S，最后于72℃延伸5 min，最后在4℃環境下保存。PCR產物使用含量為2%的瓊脂糖凝膠電泳后，對條帶進行觀察［6］。

表1　患者PTEN基因的表達情況n（%）

1.3觀察指標

甲基化陽性：U引物未擴增出條帶，而M引物擴增出71 bp的條帶。甲基化陰性：M引物未擴增出條帶，U引物擴增出162 bp的條帶。

1.4統計學方法

本研究數據使用SPSS 10.0軟件分析，計數資料以n（%）形式表示，用χ2檢驗。可信區間以95%作為標準。當P＜0.05時，差異具有統計學意義。

2　結果

根據對患者基因表達情況的觀察可知，胃癌組織表達呈陽性的有72例，多于陰性患者48例，差異具有統計學意義（χ2=100.52；P＜0.05）；同時，癌旁正常組織表達呈陽性的患者僅有4例，呈陰性的有116例，二者差異具有統計學意義（χ2=20.67；P＜0.05），詳見表1。

3討論

PTEN具有抑制生長，促進細胞凋亡，并參與細胞周期的調控以及抑制細胞的粘附及腫瘤轉移的功能，自其1997年發現以來就成為研究的熱點［7］。研究PTEN的表達和啟動子甲基化的關系及作用機制也將有利于我國胃癌發病機制的研究［8］。PTEN的異常表達與胃癌等惡性腫瘤的發生發展生物學行為和預后有密切的關系。研究結果顯示胃癌組織表達呈陽性的患者多于陰性的患者例數，同時，癌旁正常組織表達呈陽性的患者少于陰性患者，差異具有統計學意義（P＜0.05）。本研究通過檢測PTEN在胃癌組織和非胃癌組織中的表達，已明確PTEN可作為胃癌的檢測項目之一。

綜上所述，胃癌患者PTEN基因和表達異常情況都和癌癥組織的啟動子區甲基化有關系，是患者胃癌發生和發展以及轉移的原因之一。

參考文獻

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【中圖分類號】R735.2

【文獻標識碼】A

【文章編號】1674-9316（2016）11-0186-02

doi：10.3969/j.issn.1674-9316.2016.11.127

基金項目：吉林省衛生廳課題。課題名稱：抑癌基因PTEN的表達及啟動子甲基化與胃癌遺傳易感性的相關性研究。課題編號（20122113）

作者單位：吉林大學中日聯誼醫院放療科，吉林長春130033

Analysis of Methylation of PTEN Gene and Abnormal Expression and its Relationship With Gastric Cancer

CHEN Qianqian ZHU Yonggang FENG Li Department of Radiotherapy，China and Japan Union Hospital of Jilin University，Changchun Jilin 130033，China

【Abstract】