6種中藥對(duì)60株泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的抑菌作用

吳賢麗　　龐載元　　敖茂程　　蘇德永　　李靖　　華毅（攀枝花市中心醫(yī)院，四川 攀枝花 617067）

6種中藥對(duì)60株泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的抑菌作用

吳賢麗龐載元敖茂程蘇德永李靖華毅
（攀枝花市中心醫(yī)院，四川 攀枝花 617067）

目的：通過研究黃芩等6種中藥對(duì)泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的抑菌作用，為臨床治療泛耐藥菌感染尋找新的出路。方法：采用中藥抗菌試驗(yàn)試管倍比稀釋法測(cè)定藥物的最低抑菌濃度（MIC）。結(jié)果：黃芩、連翹、黃連、金銀花、五味子、烏梅對(duì)60株泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌有不同程度的體外抑菌作用，MIC均值分別為46.22，234.37，56.01，103.13，63.54，58.85 mg/mL。本地與外地收集的菌株，抑菌作用無顯著性差異（P＞0.05）。結(jié)論：6種中藥對(duì)60株泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌均有不同程度的體外抑菌作用。

黃芩；連翹；黃連；金銀花；五味子；烏梅；泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌；體外抑菌試驗(yàn)

鮑曼不動(dòng)桿菌是目前醫(yī)院感染的主要病原菌之一，廣泛存在于自然界、醫(yī)院環(huán)境及人體皮膚等部位。近年來，隨著抗菌藥物的廣泛使用，鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥率及泛耐藥菌株均呈上升趨勢(shì)［1]。泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌是指對(duì)臨床常用的五類抗菌藥耐藥，僅對(duì)1～ 2種潛在有抗不動(dòng)桿菌活性的藥物（主要指替加環(huán)素或多黏菌素）敏感的菌株［2]。多黏菌素E由于靜脈使用時(shí)有嚴(yán)重的腎臟毒性和神經(jīng)毒性，基本上未在臨床使用［3]；替加環(huán)素雖然對(duì)泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌有較好的抗菌活性，但血藥濃度、腦脊液濃度低且價(jià)格過于昂貴，常需與其他抗菌藥物聯(lián)合應(yīng)用［4]。開發(fā)新的抗菌藥物是克服該菌耐藥性的有效途徑，但新藥開發(fā)周期長(zhǎng)、投資大，醫(yī)藥經(jīng)費(fèi)負(fù)擔(dān)重。

中藥治療感染性疾病有悠久的歷史，常用的抗菌中草藥有近百種［5]，經(jīng)文獻(xiàn)檢索，有關(guān)中藥抑菌的研究較多，但未見中藥對(duì)泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌抑菌、殺菌的研究報(bào)道，因此，研究中藥對(duì)泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的體外抗菌活性具有重大的現(xiàn)實(shí)意義。

本實(shí)驗(yàn)采用中藥抗菌試驗(yàn)試管倍比稀釋法，參考了有關(guān)文獻(xiàn)［6]，并做了相應(yīng)的改進(jìn)。現(xiàn)報(bào)告如下。

1材料與方法

1.1材料

孵箱，1 000 μL無菌吸頭，1 000 μL加樣槍，帶帽無菌試管若干，比濁儀，API 0.85%3 mL無菌鹽水管，梅里埃的非苛養(yǎng)革蘭陰性桿菌藥敏試驗(yàn)專用肉湯，試管架若干。

1.2菌株的選擇

收集近期（2010年4月 -2014年3月）來自本院和外地（浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院）的泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌60株，選擇標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC27853、ATCC25922、ATCC25923作對(duì)比分析。

1.3中藥的選擇

通過查閱文獻(xiàn)，選擇有抗菌活性的6種中藥配方顆粒：黃芩、連翹、黃連、金銀花、五味子、烏梅（由四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)分別為：1502063，1502004，1410073，1306071，1410063，1401008）。

1.4中藥藥液的制備

取50 mL的無菌燒杯，用無菌蒸餾水溶解中藥配方顆粒，使其藥液相當(dāng)于生藥的質(zhì)量濃度為1 000 mg/mL。

1.5細(xì)菌的培養(yǎng)與稀釋

將選定的實(shí)驗(yàn)菌株，接種血平板培養(yǎng)基37℃孵育 24 h。取API 0.85%3 mL無菌鹽水管，挑取菌落配制成0.5麥?zhǔn)媳葷釂挝唬蛊浜繛?.5×108cfu/L。

1.6最小抑菌濃度（MIC）的測(cè)定

按臨床標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）推薦的液體稀釋法測(cè)定實(shí)驗(yàn)菌株的MIC。應(yīng)用倍比稀釋法對(duì)藥物進(jìn)行稀釋，稀釋液為梅里埃的非苛養(yǎng)革蘭陰性桿菌藥敏專用肉湯。

1.7操作步驟

在10支無菌試管中各加入1 mL肉湯，于第1管加 1 mL中藥（1 000 mg/mL），充分混勻后取出1 mL加入第2管，混勻后取出1 mL加入第3管，反復(fù)操作至第9管，混勻后第9管取出1 mL液體丟棄，第10管不加藥液做陽(yáng)性對(duì)照，在每個(gè)試管中加入0.5麥?zhǔn)蠁挝坏木?0 μL，第9管不加菌液做陰性對(duì)照，充分混勻后放置37℃孵箱中培養(yǎng)，24 h后觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況。在陽(yáng)性對(duì)照管細(xì)菌生長(zhǎng)正常，陰性對(duì)照管無菌生長(zhǎng)的條件下，判斷無渾濁的試管的最小濃度即為MIC。以上所有無菌操作均需在生物安全柜中進(jìn)行。

2結(jié)果

見表1。黃芩、連翹、黃連、金銀花、五味子、烏梅對(duì)60株泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌有不同程度的體外抑菌作用，MIC均值分別為46.22，234.37，56.01，103.13，63.54，58.85 mg/mL。

3討論

近年來在臨床分離的致病菌中鮑曼不動(dòng)桿菌逐年增多，多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌已經(jīng)在全球各地廣泛流行，甚至造成醫(yī)院感染的爆發(fā)流行［7-9]，有關(guān)世界各地泛耐藥菌株感染的報(bào)道也頻頻出現(xiàn)［10]。由于耐藥性增強(qiáng)，患者感染鮑曼不動(dòng)桿菌后死亡率逐年增高，在ICU患者中的死亡率達(dá)10% ～43%［11]。由于可供選擇的抗菌藥藥物少、療效差、不良反應(yīng)嚴(yán)重、價(jià)格昂貴，臨床治療面臨極大考驗(yàn)。

由表1可見，黃芩、連翹、黃連、金銀花、五味子、烏梅對(duì)60株泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌有不同程度的體外抑菌作用。五味子抑菌濃度比冷會(huì)勇等［12]報(bào)道的多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的抑菌濃度高，黃芩、連翹、黃連、金銀花的抑菌濃度比龐載元等［13]報(bào)道的泛耐藥銅綠假單胞菌抑菌濃度低，6種中藥對(duì)本地與外地收集的菌株，抑菌作用無顯著性差異（P＞0.05）。

表1　6種中藥對(duì)60株泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的抑菌作用　（mg/mL）

臨床常用的抗菌中藥有近百種，其抑菌濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于抗菌藥［14]，按常規(guī)劑量口服，血藥濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到抑菌濃度。以本實(shí)驗(yàn)為例：黃芩MIC均值為46.22 mg/mL，按成人4 000 mL體液算，需要一次口服185 g生藥才可能在體內(nèi)達(dá)到抑菌濃度，而黃芩的常規(guī)劑量為5～ 15 g［15]，遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到治療的血藥濃度；黃連MIC均值為56.01 mg/mL，按成人4 000 mL體液算，需要一次口服224 g生藥才可能在體內(nèi)達(dá)到抑菌濃度，而黃連的常規(guī)劑量為2～ 10 g［15]，也遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到治療的血藥濃度；彭乙華等［16]研究報(bào)道中藥單體注射制劑棓丙酯對(duì)多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌有較高的抑菌活性，體外最低抑菌濃度范圍64～128 μg/mL，按成人4 000 mL體液算，需要藥物256～ 512 mg，而棓丙酯靜脈滴注 1次的允許用量，不超過180 mg，在人體內(nèi)也很難達(dá)到有效抑菌濃度。

中藥治療呼吸道感染，吸入給藥是不錯(cuò)的選擇。由于呼吸道面積大，毛細(xì)血管豐富、致密，藥物吸收快，吸收速率僅次于靜脈給藥［17]，藥物用量少，可以克服口服血藥濃度過低的瓶頸，通過霧化吸入，藥物可直達(dá)病所。中藥?kù)F化吸入治療肺炎［18-20]和上呼吸道感染［21-23]的報(bào)道較多，療效肯定。

除了吸入治療外還可以選擇中藥貼敷治療。貼敷療法是一種中藥外治法，藥物貼敷于體表穴，可由局部的皮膚直接吸收，中藥貼敷治療可減少藥物代謝過程，用藥安全有效［17]，有關(guān)治療肺炎的文獻(xiàn)報(bào)道也較多［24-26]，療效肯定。

本研究資料顯示6種中藥對(duì)泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌有不同的體外抗菌活性，按傳統(tǒng)口服給藥模式難以發(fā)揮中藥的抗菌作用。中藥?kù)F化吸入或中藥貼敷治療泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌引起的肺炎是值得一試的方法。

在中藥抗菌研究的過程中，前人的研究結(jié)果提示中藥在抗菌作用方面蘊(yùn)藏著巨大潛力。中藥的給藥途徑較多，在應(yīng)用研究上需要打破常規(guī)，不斷創(chuàng)新與開拓，才能使中藥更好地造福于人類。

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Bacteriostatic Effects of Six Kinds of Traditional Chinese Herbal Medicines on Sixty Strains of Pan-resistant Acinetobacter baumannii

Wu Xianli，Pang Zaiyuan，Ao Maocheng，Su Deyong，Li Jing，Hua Yi（Center Hospital of Panzhihua City，Sichuan Panzhihua 617067，China）

Objective：To investigate the bacteriostatic effects of six kinds of traditional Chinese herbal medicine on pan-resistant Acinetobacter baumannii and provide a novel route to the clinical treatment of infection. Methods：The minimum inhibiting concentrations（MICs）of drugs were determined by antibacterial test with doubling dilution in tube.Results：Scutellaria，F(xiàn)orsythia，Coptis，Honeysuckle，Schisandra and Jaume showed bacteriostatic effect in vitro at different degrees on 60 strains of pan-resistant Acinetobacter baumannii，of which the mean MICs were 46.22，234.37，56.01，103.13，63.54 and 58.85 mg/mL respectively，which showed no difference in local and foreign isolates（P＞0.05）.Conclusion：Each of the six kinds of Chinese herbal medicines showed a certain inhibitory effect in vitro on 60 strains of pan-resistant Acinetobacter baumannii.

Scutellaria；Forsythia；Coptis；Honeysuckle；Scutellaria；Jaume；Pan-resistant Acinetobacter baumannii；In Vitro Antibacterial Test

10.3969/j.issn.1672-5433.2016.05.004

攀枝花市2015年度市級(jí)財(cái)政科技專項(xiàng)資金項(xiàng)目（2015cy-s-25）

吳賢麗，女，檢驗(yàn)技師。研究方向：臨床微生物檢驗(yàn)。E-mail：12252935@qq.com龐載元，男，副主任技師。研究方向：臨床微生物檢驗(yàn)。通訊作者E-mail：yangfan621225@qq.com

2016-02-01）